- •Лабораторная работа № 1
- •Правила работы в микробиологической лаборатории
- •Лабораторная работа №2
- •Теоретическая часть Стерилизация стеклянной посуды
- •Стерилизация инструментов и приборов
- •Лабораторная работа № 3 Тема: Питательные среды и техника их приготовления.
- •Стерилизация питательных сред
- •Техника приготовления основных питательных сред
- •Стандартные питательные среды
- •Специальные (элективные) питательные среды
- •Дифференциально-диагностические (цветные) питательные среды
- •Определение рН питательных сред
- •Лабораторная работа № 4 Тема: Методы посева и культивирование продуцентов.
- •Практическая часть
- •Лабораторная работа № 5 Тема: Изучение роста микроорганизмов и влияние на него рН и температуры культивирования.
- •Практическая часть
- •Лабораторная работа № 6 Тема: Выделение чистых культур бактерий. Количественный учет микроорганизмов.
- •Метод выделения чистых культур с помощью химических веществ.
- •Методы обогащения.
- •Количественный учет микроорганизмов путем счета колоний(чашечный метод Коха)
- •Практическая часть
- •3. Определение микробного числа почвы
- •4.Определение микробного числа воздуха
- •5. Определение микробного числа воды
- •6. Определение микробной загрязненности предметов обихода и рук
- •Лабораторная работа № 7 Тема: Отделение биомассы микробов от культуральной жидкости.
- •Практическая часть
- •Лабораторная работа № 8 Тема: Изучение ферментативной активности (бродильной, протеолитической, целлюлозолитической) микроорганизмов.
- •Практическая часть
- •Лабораторная работа № 9 Тема: Исследование хлебопекарных дрожжей.
- •Практическая часть
- •3. Определить процентное содержание сахаромицетов и посторонних микроорганизмов
- •4. Качество прессованных дрожжей.
- •Лабораторная работа № 10 Тема: Методы получения аминокислот из микробной массы.
- •Практическая часть
- •Лабораторная работа № 11 Тема: Методы экстрагирования из микробной массы ферментов, витаминов и липидов.
- •Практическая часть
- •1 Метод.
- •Лабораторная работа № 12 Тема: Микрофлора молочнокислых продуктов. Бактериальные препараты, используемые в пищевой промышленности (закваски, бифидумбактерии, лактобактерии).
- •Микрофлора молочнокислых продуктов
- •Бактериальные препараты, используемые в пищевой промышленности
- •Практическая часть
Специальные (элективные) питательные среды
Среды для выращивания анаэробных микробов. Мясопептонный печеночный бульон Кита - Тароцци (МППБ). Свежую или замороженную печень (лучше крупного рогатого скота) режут на мелкие куски, заливают равным по массе количеством водопроводной воды, варят в течение часа, фильтруют через вату и добавляют к 1 части полученного экстракта 3 части мясопептонного бульона. Смесь нагревают до кипения, добавляют химически чистую поваренную соль (на 1 л среды 1,25 г) и доводят рН до 7,6—7,8, после чего кипятят в течение 15 мин и фильтруют через бумажный или увлажненный ватный фильтр. К профильтрованному бульону добавляют мелко нарезанные кусочки (по 1,5— 2 г) печени, из расчета на 1 л бульона 100 г печени (печень предварительно очищают от пленок и промывают водой). В пробирку помещают несколько таких кусочков, наливают высоким столбиком 7—10 мл бульона, на поверхность его наслаивают вазелиновое или парафиновое масло.
Бульон с кусочками печени стерилизуют под избыточным давлением 0,1 МПа в течение 30 мин. С целью удаления из пробирки кислорода перед посевом среду кипятят 10 мин и быстро охлаждают водой.
Полужидкий агар для анаэробов. К МПБ добавляют 0,25—0,75% агар-агара и 1% глюкозы; рН среды 7,4. Среду разливают высокими столбиками в пробирки. Стерилизуют дробно текучим паром по 15—20 мин в течение 3 дней.
Среды для выращивания молочнокислых бактерий. Молоко (цельное).Нагревают до кипения. Наливают в тубусную склянку и ставят на 10—20 ч в холодное место для отстаивания сливок. По истечении этого времени через кран тубуса разливают обезжиренную часть молока по пробиркам, закрывают ватными пробками. Стерилизуют дробно при 100° С три дня по 20 мин или при 112° С однократно 30 мин.
Обезжиренное молоко. Для получения обезжиренного молока цельное молоко сепарируют и далее поступают так же, как при использовании цельного молока.
Гидролизованное молоко (по Богданову).Берут 1 л прокипяченногои остуженного до 45° С обезжиренного молока, устанавливают рН 7,6—7,8, добавляют 0,5 г порошка панкреатина (разведенного предварительно в небольшом количестве теплой воды) или 2—3 г измельченной поджелудочной железы и через несколько минут 5 мл хлороформа. После этого бутыль тщательно встряхивают, плотно закрывают корковой пробкой и помещают на 3 суток в термостат при температуре 40° С при ежедневном встряхивании жидкости. По истечении указанного срока с целью удаления хлороформа бутыль открывают, жидкость фильтруют и разбавляют в 2—3 раза водопроводной водой. Доводят рН среды до 7,0— 7,2 и стерилизуют.
Агар из гидролизованного м о л о к а.К гидролизованному молоку прибавляют 1,5—2% агара, расплавляют, разливают по пробиркам и стерилизуют под избыточным давлением 0,1 МПав течение 15 мин. На этой среде хорошо растут молочнокислые палочки.
Сывороточный агар. На 100 мл водопроводной воды берут 7,5 г агара, кипятят до полного растворения, добавляют воды до первоначального объема (т. е. в объеме, равном объему испарившейся воды), прибавляют 400 мл заранее приготовленной молочной сыворотки, подвергают действию текучего пара в течение 30 мин, фильтруют через слой ваты, разливают по пробирками стерилизуют под давлением 0,05 МПа в течение 30 мин.
Капустная среда. 200 г измельченной капусты (или люцерны) заливают 100 мл воды и кипятят в кастрюле 10 мин, отжимают через двойной слой марли. Полученную жидкость фильтруют и разводят в 2 раза водопроводной водой. Добавляют 2% глюкозы и 1% пептона, разливают по пробиркам и стерилизуют три избыточном давлении 0,05 МПа в течение 15 мин.
Среда для выращивания осмофильных дрожжей. Примерно в 1 л дистиллированной воды вносят 200 г предварительно подогретого меда, 1 г двуфосфорнокислого калия, 0,5 г сульфата магния, 0,5 г виннокислого аммония, 0,1 г хлористого натрия и 0,1 г хлористого калия. Все компоненты смешивают и стерилизуют под избыточным давлением 0,1 МПа в течение 20 мин.
Среда для выращивания галофилов. Используют обычные мясопептонные среды с добавлением от 10—15 до 20—30% поваренной соли. Кроме того, при изготовлении плотных питательных сред увеличивают и процентное содержание агара. Стерилизацию проводят под избыточным давлением 0,1 МПа в течение 20 мин.
Среды обогащения. Среда Мюллера. К 4,5 г химически чистого мела, предварительно простерилизованного сухим жаром, добавляют 90 мл МПБ и стерилизуют под избыточным давлением 0,1 МПа в течение-20 мин. Готовят: а) раствор гипосульфита (50 г чистого кристаллического гипосульфита заливают до 100 мл дистиллированной водой, стерилизуют текучим паром в течение 30 мин); б) раствор йода (20 г металлического йода и 25 г йодистого калия заливают до 100 мл дистиллированной водой). Перед посевом к бульону с мелом стерильно добавляют 10 мл раствора гипосульфита и 2 мл раствора йода. При добавлении каждого ингредиента смесь взбалтывают. Разливают по стерильным пробиркам или колбам.
Среда Киллиана. К 100 мл обычного МПБ стерильно добавляют перед использованием 1 мл водного раствора (1:1000) бриллиантового зеленого.