2. Материалы и методы исследования

В настоящей главе излагаются общие принципы постановки эксперимента, методы определения общего количества эритроцитов, содержания гемоглобина, общего числа лейкоцитов в крови и статистической обработки результатов исследований.

2.1. Общая характеристика экспериментального материала

Исследования проведены на белых крысах-самках в возрасте 6 месяцев линии Вистар, полученных из питомника Рапполово (г. Санкт-Петербург). Всего использовано 48 крыс.

При выборе крыс в качестве экспериментального материала, мы основывались на том, что крысы являются удобной моделью для изучения процессов адаптации организма к различным факторам среды. У крыс быстро проходят последствия хирургических вмешательств. Большое значение имеет и тот факт, что преимущественное количество опубликованных экспериментальных исследований выполнено на крысах. В связи с этим мы имеем возможность, сопоставить наши результаты с данными, полученными другими исследователями.

При работе с крысами полностью соблюдали международные принципы Хельсинской декларации о гуманном отношении к животным.

В соответствии с целью и задачами исследования крысы были разделены на 2 группы:

1. Контрольная – крысы, не подвергавшиеся воздействию моделируемого фактора, то есть интактные животные. 2. Экспериментальная – крысы, служившие объектом моделирования тренировочных циклов.

У всех крыс в условиях обычного светового режима и через 1, 2 и 3 недели после изменения режима освещения определяли суточную динамику содержания общего количества эритроцитов, содержания гемоглобина и общего числа лейкоцитов в крови.

2.2. Организация светового режима

Биологические ритмы квазипериодичны, то есть оценка их параметров возможна только на ограниченном отрезке времени. В хронобиологии анализ биоритмов осложняется в связи с влиянием на колебания дополнительных факторов в ходе эксперимента (взятие крови из хвостовой вены под эфирным наркозом). Поэтому для их изучения использовали метод временных серийных срезов. Для этого формировались группы животных, и проводилось так называемое «поперечное исследование». При таком подходе в каждый момент времени показатель регистрируется не у всех, а лишь у одного или нескольких членов группы. Обработка временного ряда, полученного этим способом, дает представление о группе как о едином целом. Результаты, полученные при таком исследовании, считаются групповыми (Катинас Г.С., Яковлев В.А., 1989; Карп В.П., Катинас Г.С., 1997; 2000).

Вначале все животные содержались в условиях обычного светового режима (свет : темнота 12 : 12), который наиболее часто используется в хронобиологических экспериментах (Ашофф Ю., 1964; Ашофф Ю., Вивер Р., 1984; Батурин В.А., Арушанян Э.Б., 1992; Laakso M.L., Alila A.и др. 1996; Murhy H.M.,Wideman C.H., Nadzam G.R., 1998). Свет автоматически включался в 8 ч и выключался в 20 ч. Затем производили изменение светового режима со смещением на 10 часов (темнота : свет 10 : 14). Свет выключался в 10 ч и включался в 20 ч.

В светлое время суток обеспечивалась постоянная освещенность приблизительно в 300 лк. Кормление и уход осуществляли ежедневно с 7 до 8 ч в привычном для животных режиме вивария. Обеспечивался свободный доступ крыс к пище и воде.

В наших экспериментах исследуемые показатели определяли каждые 4 часа в течение суток (в 10, 14, 18, 22, 2 и 6 часов).