§2. Промикроскопировать готовые препараты-мазки туберкулезных бактерий, окрашенных по Цилю-Нильсену. Препараты зарисовать.

§3. Демонстрация роста туберкулезных бактерий на глицериновом бульоне, яичной среде Петраньяни и других средах.

§4. Перед исследованием мокроту выливают в чашку Петри, поставленную на темном фоне. Из мокроты необходимо выбрать гнойные комочки, приготовить препарат-мазок, окрасить по Цилю-Нильсену. Промикроскопировать, обратив внимание на наличие прямых или слегка изогнутых тонких палочек, часто зернистых, расположенных одиночно или группами. Палочки окрашены в красный цвет, а лейкоциты, посторонние бактерии и слизь - в синий. Препарат зарисовать.

Если содержание туберкулезных бактерий настолько мало, что их не удается обнаружить в мазках, пользуются одним из методов обогащения - методом осаждения или методом флотации.

Метод осаждения. К мокроте добавляют равное по объему количество однопроцентного едкого натра, плотно закрывают склянку и встряхивают ее в течение 5-15 минут до полного растворения мокроты, центрифугируют, сливают жидкость, осадок нейтрализуют 1-2 каплями десятипроцентного раствора соляной кислоты. Из осадка, в котором сконцентрированы туберкулезные бактерии, приготовляют мазки, окрашивают по Цилю-Нильсену и микроскопируют.

Метод флотации. Мокроту помещают во флакон или колбу с резиновой пробкой емкостью в 250 мл, добавляют равное количество 0,5-1% едкого натра, встряхивают 510 минут до полной гомогенизации. Колбу помещают в водяную баню и прогревают при 55°С в течение 30 минут, затем добавляют около 100 мл дистиллированной воды и 1-2 мл ксилола, бензина или газолина. Смесь встряхивают в течение 5-10 минут, еще вливают в колбу около 100 мл дистиллированной воды (до установления уровня жидкости в узкой части горловины) и оставляют при комнатной температуре на 20-30 минут. Образовавшийся сливкообразный слой переносят пипеткой на предметное стекло, которое кладут на крышку водяной бани, нагретой до 60°С. На высохший мазок наносят новые порции материала до тех пор, пока весь флотационный экстракт не будет перенесен на предметное стекло. Сухой препарат промывают эфиром для удаления ксилола или бензина, фиксируют на пламени, красят по Цилю-Нилъсену и микроскопируют.

§5. Знакомство с методом микрокультур для ускоренной диагностики туберкулеза. Демонстрационный препарат микрокультуры туберкулезной палочки промикроскопировать и зарисовать. Микрокультура возбудителя туберкулеза выглядит в виде тяжей или скоплений, состоящих из туберкулезных палочек.

§6. Промикроскопировать и зарисовать готовые препараты палочки проказы. В отличие от туберкулезной палочки возбудитель проказы располагается параллельными рядами (в виде пачек сигар), преимущественно внутри клеток.

§7. Ознакомление с составом и назначением следующих иммунопрепаратов: туберкулин Коха, очищенный туберкулин ррd-l, вакцина бжп.

Методы микробиологической диагностики туберкулеза.

А. Бактериоскопический.

Материал: гной, мокрота, моча и т.д.

Рисунок 1.

Б. Бактериологический.

Материал: гной, мокрота, моча и т.д.

Рисунок 2.

В. Биологический.

Материал: гной, мокрота, моча и т.д.

Рисунок 3.

Г. Аллергический.

Проба Манту, Пирке.

Рисунок 4. Микроорганизмы, вросшие при посеве материала из зева. Окраска по Граму.

Рисунок 5. Mycobacterium tuberculosis. Окраска по Циль-Нильсену.

Рисунок 6. Микрокультура Mycobacterium tuberculosis.

Рисунок 7. Mycobacterium leprae. Окраска по Циль-Нильсену.

Контрольные вопросы.

Каковы морфологические особенности туберкулезной палочки?

Каковы тинкториалыные свойства возбудителя туберкулеза?

Как растут туберкулезные палочки на жидких и твердых питательных средах?

Какие существуют типы туберкулезной палочки, и какова их роль в патологии человека?

По каким свойствам различают патогенные типы туберкулезных палочек?

Почему возбудители туберкулеза относительно устойчивы к воздействию внешних факторов?

Какие лабораторные животные чувствительны к туберкулезной палочке?

Как происходит заражение человека туберкулезом?

Каков характер фагоцитоза при туберкулезе?

Какова природа иммунитета при туберкулезе?

Какую роль играют лимфоциты в реакции повышенной чувствительности замедленного типа при туберкулезе?

Какова природа туберкулина, его назначение и применение?

Каковы факторы патогенности туберкулезной палочки?

Какие микробиологические методы применяются для диагностики туберкулеза?

Как осуществляется бактериоскопическая диагностика туберкулеза?

Какие методы используют для обогащения материала при бактериоскопической диагностике туберкулеза?

Как ставится биологическая проба для диагностики туберкулеза?

Как осуществляется ускоренная диагностика туберкулеза (метод микрокультур)?

Каково значение туберкулиновых проб в диагностике туберкулеза?

Какие препараты применяются для диагностики и специфической профилактики туберкулеза?

Каковы морфологические свойства возбудителя проказы?

Какие микробиологические методы используются для диагностики проказы?

Какие методы применяются для дифференциации палочки Гансена от туберкулезной палочки?

Какие иммунологические реакции используются для диагностики проказы?

По каким признакам отличают истинные туберкулезные бактерии от потенциально патогенных и сапрофитных микобактерий?

Почему необходимо определять чувствительность туберкулезных бактерий к антибиотикам?

Приложение к знятю13.

А. Микобактерии, потенциально патогенные для человека:

M. africanum M. intracellulare M. paratuberculosis

M. asiaticum M. kansasii M. scrofulaceum

M. avium M. leprae M. senegalense

M. bovis M. lepraemurium M. szulgai

M. chelonei M. malmoense M. tuberculosis

M. farcinogenes M. marinum M. ulcerans

M. fortuitum M. microti M. xenopi

M. haemophilium

Б. Схема идентификации микобактерий.

A. Скорость роста субкультур.

Медленно растущие Быстро растущие

(свыше 7 дней) (менее 7 дней)

Б. Пигментообразование

Нехромогенные хромогенные

B. Образование ниацина

Ниацинпозитивные Ниациннегативные

Г. Фотоактивация пигментообразования.

Нет эффекта Фотохромогены Скотохромогены

Mycobacterium tuberculorsis относится к медленно растущим нефотохромогенным ниацинпозитивным микобактериям.

Mycobacterium bovis относится к медленно растущим нефотохромогенным ниациннегативным микобактериям.

Для идентификаций других патогенных для человека микобактерий используются дополнительные тесты.

В. Методы дифференцирования истинных туберкулезных бактерий от потенциально патогенных и сапрофитных

микобактерий.

	Микобактерии
	туберкулезные	потенциально патогенные	сапрофитные
Корд-фактор (трегалозадимиколат)	+	-	-
Каталазная проба	- (±)	++	++
Отношение к красителям	адсорбируют	не адсорбируют	не адсорбируют
Вирулентность для морских свинок и кроликов	+	-	-
Ниациновая прба	+	-	-

ЗАНЯТИЕ 14.

Дата_______

Тема: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ ДИАГНОЗ ДИФТЕРИИ

(окончание).

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ ДИАГНОЗ РИККЕТСИНИОЗОВ.

План занятия.

А. Микробиологический диагноз дифтерии (окончание).

1. Регистрация результатов определения биохимической активности коринебактерий и пробы на токсигенность.

Б. Микробиологический диагноз сыпного тифа.

1. Микроскопия готовых препаратов-мазков риккетсий.

2. Серологическая диагностика сыпного тифа. Реакция агглютинации с риккетсиозным антигеном, РСК, РПГА, реакция иммунофлуоресценции (непрямой метод), иммуноферментный метод в модификации "захват" иммуноглобулинов класса М. Непрямая реакция гемолиза (эритроциты, сенсибилизированные риккетсиозным антигеном, 0,1 мл + инактивированная сыворотка 0.4 мл + 0,1 мл комплемента; смесь выдерживают при 37ºС в течение 30-60 минут и учитывают результаты. Реакция считается положительной при титре свыше 1:100).

Разбор с демонстрацией результатов серологических реакций.

Методические указания.

А. Микробиологический диагноз дифтерии (окончание).