Раздел 5. Биоэнергетика

Рекомендации для самостоятельной работы

1. Подготовить устный ответ на следующие вопросы:

   1. Способы запасания энергии в клетке и пути биосинтеза АТФ (понятиие о фосфогенах, общее уравнение реакции синтеза АТФ в клетке, пути биосинтеза АТФ).

   2. Биологическое окисление (определение и локализация процесса, общее уравнение реакции, биологическая роль).

   3. Состав ЦПЭ: компоненты дыхательной цепи ферментной и неферментной природы; принцип, схема и структурная организация ЦПЭ.

   4. Окислительное фосфорилирование (определение и общее уравнение реакции, участки сопряжения БО и ОФ).

   5. Регуляция БО и ОФ и влияние различных факторов на эти процессы: гипоксии, а- и гиповитаминозы и обеспеченность организма минеральными веществами; коэффициент ОФ, дыхательный контроль, ингибирование.

Литература для подготовки:

1. Лекционный материал.

2. Комов В. П., Шведова В. Н. Биохимия. М.: Дрофа, 2004. С. 189-209.

3. Березов Т. Т., Коровкин В. Ф. Биологическая химия. М.: Медицина, 1998. С. 305-318.

Раздел 6. Обмен углеводов

РАБОТА 10. ГЛЮКОЗООКСИДАЗНЫЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЛЮКОЗЫ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ

Цель работы:ознакомиться с современным энзиматическим методом количественного определения глюкозы в биологических жидкостях, который широко применяется в клинической практике.

Задачи:

• определить содержание глюкозы в предлагаемых образцах;

• проанализировать полученные результаты и сделать вывод.

Принцип метода.Глюкозооксидаза катализирует окисление глюкозы кислородом воздуха с образованием эквимолярного количества пероксида водорода. Под действием пероксидазы перекись водорода окисляет фенол, который превращается в бензохинон, окрашенный в розовый цвет. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации глюкозы в пробе.

Ход работы.В три обычные химические пробирки наливают:

1. в опытную – 0,01 мл сыворотки крови или свежей мочи,

2. в стандартную – 0,01 мл стандартного раствора глюкозы,

3. в контрольную – 0,01 мл дистиллированной воды.

Во все пробирки добавляют по 2 мл рабочего реагента, смесь тщательно перемешивают и пробы помещают в термостат на 10 минут при 37°С. После окончания инкубации измеряют оптическую плотность опытной и стандартной пробы против контроля в кюветах на 5 мм (или 3 мм) при длине волны 490-510 нм (на ФЭКе).

Окраска стабильна в течение часа после окончания инкубации при условии отсутствия воздействия прямых солнечных лучей.

Примечание.Количество глюкозы в моче определяют только при положительной качественной реакции на глюкозу. Реакция считается положительной, если смесь из 0,01 мл исследуемой мочи и 0,5 мл рабочего реагента через 15 минут приобретает розовую окраску.

Результаты:расчёт концентрации глюкозы проводят по формуле:

С = Е_о/Е_ст × 10,

где Е_о– оптическая плотность опыта,

Е_ст– оптическая плотность стандарта,

10 – концентрация стандартного раствора глюкозы в моль/л.

Нормальное содержание глюкозы, определённое этим методом, в сыворотке или плазме крови здорового человека составляет 4,2-6,1 ммоль/л, в моче – <0,8 ммоль/л.

Выводы:

Рекомендации для самостоятельной работы

Подготовить устный ответ на следующие вопросы:

1. Классификация углеводов

2. Переваривание и всасывание углеводов (система ферментов, понятие о балластных веществах, пути всасывания глюкозы в ЖКТ).

3. Внутриклеточный метаболизм углеводов.

   1. метаболизм гликогена;

   2. метаболизм глюкозы: основные пути распада глюкозы в организме человека: апотомическийидихотомическийпути распада глюкозы (гликолиз, аэробный гликолиз, окислительное декарбоксили-рование пирувата, ЦТК); биосинтез глюкозы.

Литература для подготовки:

1. Лекционный материал.

2. Комов В. П., Шведова В. Н. Биохимия. М.: Дрофа, 2004. С. 222-283.

3. Березов Т. Т., Коровкин В. Ф. Биологическая химия. М.: Медицина, 1998. С. 319-362.