Методические указания к самостоятельной работе

1. Вопросы по теме занятия 3 для самостоятельного изучения их студентами:

1. Что такое споры бактерий, каковы их свойства?

2. Каковы методы окраски и выявления спор?

3. Какова структура жгутиков?

4. Каковы функции спор?

5. Каковы функции жгутиков?

6. Что такое метод окраски по методу Нейссера?

7. Что такое метод окраски по методу Циля-Нильсена?

8. Каковы методы выявления и изучения спор?

9. Каковы методы выявления и изучения жгутиков?

2. Дома студенту необходимо письменно ответить на следующие вопросы (домашняя работа сдается преподавателю на занятии):

1. Необязательные структурные элементы бактерий (споры, жгутики)

2. Особенности расположения жгутиков

3. Методы окраски компонентов бактериальной клетки (заполнить таблицу 5):

Таблица 5

Компонент бактериальной клетки	Метод обнаружения, окраска
Жгутики
Внутриклеточные включения

Справочные и теоретические материалы

Окраска спор методом Ожешко: на нефиксированный препарат наливают несколько капель 0,5% раствора соляной кислоты и подогревают 1–2 мин над спиртовкой до закипания, остатки кислоты сливают; 2) промывают водой, сушат на воздухе и фиксируют в пламени; 3) окрашивают карболовым фуксином Циля с подогреванием до отхождения паров (3–5 мин); 4) обесцвечивают 5% раствором серной кислоты в течение нескольких секунд и промывают водой; 5) докрашивают метиленовой синью 3–5 мин. Споры окрашиваются в красный цвет, а вегетативные тела бактерий в синий цвет.

Окраска спор методом Ганзена (видоизмененный метод Циль-Нильсена): 1) фиксированный препарат окрашивают карболовым фуксином Циля с подогреванием (подогревают на пламени спиртовки до отхождения паров) и охлаждают в течение 2–3 минут, затем промывают водой; 2) обесцвечивают раствором серной кислоты, погружая 2–3 раза в раствор, и тщательно промывают водой; 3) окрашивают водно-спиртовым раствором метиленового синего 3–5 минут, промывают водой, высушивают, микроскопируют с иммерсией. Споры окрашиваются в красный цвет, вегетативные клетки – в синий.

Метод «Раздавленная капля»: на середину предметного стекла нанести петлей каплю исследуемого материала, накрыть ее покровным стеклом. В капле не должно быть пузырьков, жидкость не должна выходить за края стекла. Микроскопируют с иммерсией при опущенном конденсоре. В поле зрения видны бактерии, которые, передвигаясь с помощью жгутиков, совершают круговые и вращательные движения, могут пересекать все поле зрения.

Метод «Висячая капля»: используют специальные предметные стекла с углублением (лунка) в центре. Каплю исследуемого материала наносят на середину покровного стекла. Края лунки смазывают вазелином. Предметное стекло накладывают на покровное так, чтобы капля находилась в центре лунки. Затем стекло осторожно переворачивают и капля свободно свисает в центре герметически замкнутой полости лунки. Микроскопируют с иммерсией, наблюдая подвижность клеток.

Окраска жгутиков по методу Шамвелла: используют молодые 6–12-часовые культуры, выращенные на плотной питательной среде, из которых готовят суспензию. К суспензии приливают 0,5 мл стерильной теплой воды и ставят в термостат на 30–40 мин. За это время клетки переходят в воду. Каплю суспензии переносят на стекло, высушивают на воздухе, фиксируют парами 2% раствора осмиевой кислоты или парами 40% формалина 3–5 мин. Препарат обрабатывают 15 мин раствором 1, промывают раствором 2 и заливают им же на 7–10 мин. Раствор 2 сливают и мазок промывают водой. Далее препарат ополаскивают 2% водным раствором кристаллвиолета и окрашивают им же при нагревании до слабого образования паров в течение 3–5 мин. промывают водой, высушивают на воздухе и микроскопируют. На препарате видны клетки бактерий, окрашенные в ярко-фиолетовый цвет со жгутиками в виде тончайших сиреневых нитей.

ЗАНЯТИЕ 4

ТЕМА. Спирохеты. Классификация, морфология. Ультраструктура спирохет. Микроскопические методы исследования спирохет. Темное поле