Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Протоколы Мед Мод 1 13-14 final.docx
Скачиваний:
73
Добавлен:
09.05.2015
Размер:
12.95 Mб
Скачать

12. Дайте определение термину «полимеразная цепная реакция» и дать характеристику основным этапам пцр-исследования.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) ‑ ___________________________________________

_____________________________________________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Основные этапы пцр-исследования

Название этапа

Цель и характеристика

I

Предобработка клинического материала

II

Обратная транскрипция

Амплификация – это

1

Денатурация ДНК

2

Отжиг праймеров

3

Элонгация

III

Детекция продуктов амплификации

13. Назовите основные компоненты пцр-смеси.

_____________________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

14. Ознакомиться с разновидностями постановки пцр.

Название

Характеристика особенностей метода

ПЦР с обратной транскрипцией

Используют для изучения РНК содержащих вирусов. При помощи обратной транскриптазы на РНК синтезируется копия ДНК – кДНК, которую амплифицируютв стандартной ПЦР.

Мультипраймерная ПЦР

Одновременное использование нескольких пар праймеров позволяет приводить амплификацию нескольких генетических детерминант, что сокращает время и расход реактивов.

ПЦР в реальном времени

Используют для определения точечных мутаций в ДНК и количественного содержания ДНК в пробе, а также определения экспрессии генов. Существует два подхода:

- Taq-man методология. Основана на регистрации в процессе проведения ПЦР усиливающегося флуоресцентного сигнала, вследствие высвобождения флюоресцирующего вещества. Особенностью этой реакции является использование олигонуклеотидной пробы с присоединенными к разным концам молекулами сигнализатора и стабилизатора сигнала. Такая проба, связавшись с комплементарным участком ДНК, разрушается ДНК-полимеразой (проявляет экзонуклеазную активность), что приводит к высвобождению сигнализатора из-под действия стабилизатора сигнала, что сопровождается флюоресценцией.

- SYBR green методология. Регистрирует увеличение флюоресценции в результате присоединения флюорофора SYBR green к образуемым дуплексам ДНК с последующей его эмиссией.