osobennosti

1 Пёстрый ряд:

Среда Гисса (агар,индикатор,углевод) исп.для изучения сахаролитических свойств бактерий. Изначально цвет среды Гисса зелёный(в данном примере)

МПБ с двумя индикаторами на индол(щавелевая кислота) - розовеет-если индол образуется- и сероводород(уксусно-кислый свинец) - чернеет,если выделяется сероводород... - для изучения протеолитических(способность разлагать белок) свойств бактерий.

Учет : сахароза,лактоза - не ферментируют

маннит,мальтоза,глюкоза - с образованием кислоты и газа

МПБ - сероводород...

S. parathyphi B.

2 Санитарная микробиология. Определение общих колиформных(ОКБ) бактерий в воде.

ОКБ - грам " - ",оксидаза " - " палочки,спор не образуют,способны расти на средах с лактозой(Эндо,Левина) и ферментировать лактозу в течение суток при Т- 37градусов.

есть ещё термотолерантныеколиформные бактерии(ТКБ) - они входят в состав ОКБ,но единственное чем они от них отличаются - ферментируют лактозу при Т - 44градуса.

Теперь сам метод - МЕТОД МЕМБРАННОЙ ФИЛЬТРАЦИИ:

З объёма воды по 100мл фильтруют через мембранные фильтры. Затем эти фильтры помещают на среду Эндо(состав - агар,индикатор - фуксин и лактоза). Чашку в термостат - Т 37градусов на сутки.

Учёт...

на данной чашки Петри (как вы видете) выросли 2 изолированные лактозоположительные колонии - темно-красные,вишнёвые с металлическим блеском.(примечание - если бы они были лактозоотрицательные - то колонии были бы бесцветные)

Дальше определяем:

-наличие или отсутствие оксидазы - полоску фильтровальной бумаги,смоченную реактивом помещают в чашку петри, материал из колонии штрихом наносят на эту полоску,если в течение минуты цвет с первоначального(вишневого)изменется на синий - значит - лактозоположительные. У нас получились лактозоотрицательные(цвет не менялся)

-какие они по Граму - из колонии мазок,окрашиваем по граму. Колиформные бактерии - грам " -"

-дальше надо определить ОКБ или ТКБ это

две пробирки со средой Гисса(углевод - лактоза)-в них делаем посев с колонии,одну инкубируем при Т37,другую при Т44. Где произошла ферментация лактозы(до кислоты и газа) - такие и бактерии, если при Т37 - ОКБ, если при 44 - ТКБ...у нас были ОКБ(откройте протоколы по санитарной и вспомните)

Потом подсчитывают ОКБ и ТКБ в 100 мл воды...

формула ОКБ =2*100/300 (эт сразу применительно к нашей чашке Петри)

2 - число выросших колоний

100 и 300 объёмы...получаем 0,7 КОЕ/100 мл - в норме в воде не должно быть ОКБ и ТКБ.

3 Санитарная микробиология - определение общего микробного числа воды(ОМЧ)

2х кратно(можно и больше) производят посев 1мл воды. Берут стерильные чашки Петри и вносят в каждую по 1мл воды,затем заливают агаром расплавленным и охлаждённым до 50 градусов(где-то 10 мл)...затем термостат 37 градусов на сутки...

Учёт - считаем выросшие колонии(и взависимости от того - сколько чашек Петри - находим среднюю - как - думаю - знаете) в норме ОМЧ не дожно превышать 50 КОЕ/1мл воды

4 Опять же она - санитарная микробиология:)))Определение общего микробного числа(ОМЧ) воздуха

Метод Коха (седиментационный)

обычный метод - суть - берут чашку Петри с питательной средой(состав среды зависит от предполагаемых микробов) , затем открывают и ставят на какую-либо поверхность(на определённое время),затем чашку закрывают - термостат - Т - 37 градусов на сутки

Учёт - считаем число выросших колоний - и подставляем в формулу Омелянского!

Закономерность,которую установил Омелянский - на поверхность 100см квадратных питательной среды за 5минут оседает такое количество бактерий,которое содержится в 10 л воздуха.

Формула Омелянского

ОМЧ=Х*5*100*1000/пи r квадрат(эт площадь чашки Петри)*10*t

5-100-10 цифры из правила Омелянского

Х - эт число колоний,выросших на чашке Петри - посчитайте

t - время(написано на чашке Петри) - на данной - 15минут.

сравниваем с нормами санпина - норма завит от помещения и оттого в какое время проводилось исследование до работы в данном помещении,во время работы.

5 РНГА (реакция непрямой гемагглютинации) для серодиагностики риккетсиозов.

компоненты реакции:

1.эритроцитарный диагнотикум риккетсиозный соответственно (это эритроциты,на поверхности которых адсорбированы Аг риккетсий)

2.исследуемая сыворотка ( в ней будем определять есть ли антитела к риккетсиям)

Сыворотка титруется(разводится - чем больше разведение,тем меньше соответственно в ней антител)

Учет любой реакции(напоминаю) начинается с контроля!

КА(контроль антигена,то есть эритроцитарногодиагостикума) - точка- эритроциты осели - отсутствие гемагглютинации..

разведение 1:1000 - гемагглютинация, 1:2000,1:4000 - тоже гемагглютинация - значит эритроциты с адсорбированными на них антигенами связались с антителами в сыворотке - агглютинация(пасивная или непрямая,потому что эритроциты связываются друг с другом под действием антител сыворотки),разведение 1:8000 - нет гемагглютинации

Титр (максимальное разведение сыворотки,при котором ещё наблюдается реакция гемагглютинации)- 1:4000...а диагностический титр на эту реакцию 1:1000, что позволяет нам поставить диагноз риккетсиоз

6 РСК - реакция связывания комплемента: используется в лабораторной диагностике многих инфекционных заболеваний(гонорреи,гриппа,аденовирусной инфекции)

Компоненты:

1. комплемент(система сывороточных белков,получен из крови морской свинки,у которой много комплемента,высушен специальным способом - белки всё-таки)компоненты комплемента С1-С9, мембранатакующий комплекс С5-С9...

2. антиген (заведомо известный конечно)

3. исследуемая сыворотка (в ней будем искать антитела)

4. гемолитическая система (состоит из эритроцитов барана и гемолитической сыворотки,которую получают путем иммунизации кролика эритроцитами барана) - для индикации реакции)))

2,3 пробирки - контроль сыворотки и контроль антигена - гемолиз или лаковая кровь,эритроциты гемолитической системы разрушились под воздействием мембранатакующего комплекса комплемента,почему так произошло???Комплементу не с чем было связываться в первую стадию реакции(а комплемент,надеюсь,выпомните может связываться с комплексом антиген-антитело,если он конечно образуется:)))) вот он во вторую стадию реакции и атаковал эритроциты - образовал в них поры-каналы и...гемолиз:)))

1 - опытная пробирка - там исследуемая сыворотка,заведомо известный антиген,гем - система,комплемент. Нет гемолиза - реакция положительная - что же произошло!!!Антитела,которые находятся в сыворотке связались с заведомо известным антигеном - образовался комплекс - Аг-Ат - к этому комплексу присоединился комплемент - и во вторую стадию реакции после добавления гем системы её разрушения не произошло - потому что комплемента нет свободного,он весь к комплексу присоединился,соответственно гемолиза нет!!!!...и вывод - в сыворотке крови присутствуют антитела к данному антигену.

7 Реакция Вассермана - диагностическая реакция на сифилис. В основе данной реакии - РСК,поэтому читайте предыдущий коммент:

напишу пробирки - не забывайте,что учитываем с контроля всегда

3 пробирка - контроль сыворотки - гемолиз

4 пробирка - контроль системы без комплемента - нет гемолиза

5 пробирка - контроль антигена(неспецифицеского кардиолипинового, получен из миокарда быка, гетероантиген) - гемолиз

1,2 опытные

1 - антиген специфический - то есть трепонемный - нет гемолиза

2 - антиген неспецифический (гетероантиген) - нет гемолиза

Реакция Вассермана положительная,в сыворотке присутствуют антитела к специфическому и неспецифицескому антигенам - диагноз сифилис подтверждён.

8 Определение чувствительности к антибиотикам - методом бумажных дисков:)))

Шпателем газоном производится посев исследуемых бактерий на чашку Петри с питательной средой,стерильнымпицетомпомещаюся бумажные диски с антибиотиками. И оцениваем по зоне задержки роста,критерии(измеряем диаметр линейкой,котораяприлагается,как было уже написано:)))

до 15мм-низкая

15-20мм-средняя

больше 20мм - высокая чувствительность к данному антибиотику....цифры могут отличаться!!!

9 Определение токсигенности дифтерийных бактерий:

Только токсигенные бактерии способны вызывать дифтерию

Бумажный диск - который в центре - пропитан антитоксином - содержит антитела к дифтерийному экзотоксину. А вокруг этого диска колонии дифтерийной палочки - если колонии выделяют экзотоксин,он поступает в питательную среду - взаимодействует с антитоксическими антителами - и образуются усики преципитации...вот таким образом определяют наличие токсина у дифтерийных бактерий

10 s. typhi

агар: глюкоза,маннит,мальтоза - до кислоты, сахарозу,лактозу не ферментируют!

на МПБ - сероводород.

11 e. coli

агар - главный признак - ферментирует лактозу до кислоты и газа. и индол на МПБ!

12 paratyphi A

именно А:отличается от В тем,что не выделяет сероводород.

13 Клауберга

состав среды - плотная дифференциально-диагностическая питательная среда для дифтерийных палочек, содержащая теллурит калия, глицерин и дефибринированную кровь; позволяет дифференцировать биовары дифтерийных палочек по морфологическим особенностям колоний: теллурит калия проникает в цитоплазму дифтерийной палочки и восстанавливается - поэтом колонии становятся чёрными, это у митис,а у гравис серые...

14 определение нарастания титра антител в парных сыворотках крови больного в реакции нейтрализации ЦПД)

1 сыворотка в начале заболевания; 2ая через 10 дней!