osn_san_mikr

203

Выявление Listeria monocytogenes в пищевых продуктах

Навеску продукта 25,0см3 вносят в 225,0см3 жидкой среды обогащения (бульон Фразера с эскулином)

Посевы инкубируют при 30-310С в течение 24-26 часов

Рост листерий характеризуется почернением питательной среды.

Независимо от наличия изменений 1,0см3 посева пересевают в 10,0см3 одной из сред обогащения (с эскулином).

Посевы инкубируют при 37-380С в течение 48 часов

Делают посев на селективно-диагностическую среду для выделения чистой культуры

При отсутствии роста характерных колоний для листерий дают заключение об отсутствии

Listeria monocytogenes.

Если через 24 часа обнаружен рост черных колоний характерных для листерий, то проводят их идентификацию по тестам:

отношение к окраске по Граму, наличие спор и капсул, каталазная активность, подвижность бактерий при 22-230С и 37-380С, нитратредуцирующие свойства и т.д.

Если в посевах обнаружены грамположительные короткие тонкие неспорообразующие палочки, не имеющие капсулы, каталазоположительные, подвижные при 22-230С, неподвижные при 37-380С, не восстанавливающие нитраты в нитриты,

то это указывает на принадлежность выделенных бактерий к роду Listeria

204

Определение бактерий рода Proteus

0,5мл анализируемой взвеси вносят в конденсационную воду свежескошенного МПА

Посевы инкубируют при 370С 18-24 часа

при наличии ползучего вуалеобразного налета с голубым оттенком культуру микроскопируют и изучают ее подвижность в препарате «висячая» капля

изучают биохимические свойства (ферментацию глюкозы, мочевины, лактозы, маннита)

Если обнаружены полиморфные грамотрицательные палочки, имеющие ползучий рост, Глюкоза + Мочевина + Лактоза + Маннит –

это указывает на наличие бактерий рода Proteus

205

Определение E.сoli в продуктах детского питания

10,0г сухого детского продукта растворяют в 30,0см3 фосфатного буфера (рН 7,0)

термостатируют при 370С в течении 24 часов

1,0см3 раствора засевают в колбу с 9,0см3 среды Кесслера с лактозой и поплавком

инкубируют при 440С в течение 24 часов

При просмотре посевов учитывают, что эшерихии на Эндо дают красные с металлическим блеском колонии.

Если при микроскопии мазков из этих колоний обнаружены грамотрицательные неспорообразующие палочки, то все типичные колонии идентифицируют

в первую очередь по следующим тестам (ИМАЦ-тест): Реакция на индол Реакция с метиловым красным Реакция Фогес-Проскауэра

Утилизация цитрата (среда Симмонса)

Если из продукта выделены грамотрицательные неспорообразующие палочки, продуцирующие газ на лактозе при 440С, образующих индол, дающих положительную

реакцию с метиловым красным, отрицательную реакцию Фогес-Проскауэра и не растущих на среде Симмонса, считают, что

в 10,0г продукта содержится E.coli

206

Определение бактерий рода Salmonella в пищевых продуктах

Навеску продукта засевают в пептонную воду 1:9 (рН 7,0-7,2)

Инкубируют при 370С в течение 18-20 часов

Отбирают 10,0см3 и засевают в 100,0см3 магниевой или селенитовой среды

Инкубируют при 370С в течение 18-20 часов

Культуру пересевают на висмут-сульфитный агар, среду Эндо

Инкубируют при 370С в течение 18-20 часов

На ДДС (висмут-сульфитный агар) отмечают рост колоний характерных для сальмонелл

Проводят дальнейшее исследование по общепринятой схеме с изучением биохимических и антигенных свойств бактерий

Ответ записывают так:

«Бактерии рода Salmonella не обнаружены (или обнаружены) в х г (см3) продукта»

207

Определение коагулазоположительных стафилококков в пищевых продуктах

10,0г навески продукта без предварительной обработки помещают в колбу с 90,0см3 фосфатного буфера или

1,0г навески продукта с предварительной термической обработкой помещают в колбу с 9,0см3 фосфатного буфера

термостатируют при 370С в течение 18-24 часов

1,0см3 смеси переносят в пробирку с солевым бульоном (1:10)

инкубируют при 370С в течение 24 часов

посев на чашки со средой Байрд-Паркер или ЖСА для выделения чистой культуры

инкубируют при 370С в течение 18-24 часов

из подозрительных на стафилококк колоний готовят мазки, окрашивают по Грамму и микроскопируют.

При обнаружении грамположительных кокков, расположенных в виде скоплений, делают пересев на скошенный агар (МПА с 0,1% глюкозой) для накопления чистой культуры и инкубируют при 370С в течение 24 часов.

Выделенную чистую культуру пересевают на среду Гисса с маннитом или мальтозой, разлитую высоким столбиком (посев производят уколом) и снова инкубируют при 370С в течение 24 часов.

В случае роста стафилококков на среде Гисса с маннитом или мальтозой наблюдается ферментация или окисление углевода, сопровождающиеся изменением цвета среды.

Выделенную чистую культуру также обязательно исследуют на наличие фермента плазмокоагулазы, для чего ставят реакцию плазмокоагуляции

положительная реакция плазмокоагуляции свидетельствует о присутствии в продукте коагулазоположительных стафилококков

отрицательная реакция плазмокоагуляции свидетельствует об отсутствии в продукте коагулазоположительных стафилококков

208

Определение B.cereus в продуктах детского питания

0,1см3 из разведения 1:10 засевают на поверхность среды Донована (2 чашки). Посевы инкубируют при 300С в течение 24-96 часов

Из колоний готовят мазки, окрашивают по Граму, на наличие спор, и микроскопируют: B.cereus – грамположительные спорообразующие палочки

3-5 колоний пересевают на скошенный агар для накопления чистых культур посевы инкубируют при 300С 24-48 часов

у выделенных чистых культур:

определяют подвижность методом «висячей капли», после чего их засевают на:

кровяной агар среду с маннитом среду Кларка

(для постановки реакции Фогес-Проскауэра)

посевы инкубируют при 300С 24-48 часов

если обнаружен рост колоний типичных для B.cereus, грамположительные спорообразующие палочки,

подвижные обладающие гемолитической активностью,

обладающие лецитиназной активностью ферментирующие маннит дающие положительную реакцию Фогес-Проскауэра

дают заключение о присутствии в продукте B.cereus

Подсчет обнаруженных в продукте бактерий вида B.сereus проводят путем умножения количества типичных выросших на среде Донована колоний на соответствующее разведение, и затем пересчитывают в расчете на 1,0г или 1,0см3 исследуемого продукта.

209

Определение Pseudomonas aeruginosa

в парфюмерно-косметической продукции

10,0cм3 пробы из разведения 1:10 вносят в стеклянный флакон объемом 200,0см3,

содержащий 100,0см3 МПБ с 0,1% глюкозой (среда накопления)

смесь перемешивают и инкубируют при 370С в течение 24 часов

при наличии признаков роста на МПБ с 0,1% глюкозой (диффузное помутнение)

петлей делают высев на МПА с 0,1% глюкозой (для выделения чистой культуры) инкубируют при 370С в течение 24 часов

колонии пересевают на скошенный агар (МПА с 0,1% глюкозой) для накопления чистой культуры.

инкубируют при 370С в течение 24 часов.

Накопленные культуры проверяют на:

–чистоту культуры (микроскопия)

–наличие цитохромоксидазы (оксидазный тест)

оксидазоположительные культуры пересевают на среду Кинг-А (среда для выявления пигмента пиоцианина).

Инкубируют при 370С в течение 24-48 часов и при 420С в течение 24 часов

Обнаружение грамотрицательных неспорообразующих палочек, дающих положительную оксидазную реакцию, образующих пигмент, дающих рост при 420С, свидетельствует о том, что данное парфюмерно-косметическое средство контаминировано P.aeruginosa.

210

Схема проведения анализа консервов на промышленную стерильность

Осмотр, регистрация, санитарная обработка

Проверка герметичности

Термостатирование консервов

Определение внешнего вида консервов после термостатирования

микроскопирование посевов, определение спорообразующей способности микроорганизмов

определение группы, семейства, рода или вида микроорганизмов, отсутствие микроорганизмов, опасных для здоровья потребителей

оценка промышленной стерильности

212

10.Лаборант провел исследование воды на содержание общих и термотолерантных колиформных бактерий методом мембранных фильтров. Через 3 фильтра профильтровали по 100,0мл воды, после чего их поместили на среду Эндо, после инкубирования на одном из них выросло 2 колонии.

Укажите формулу, по которой лаборант должен подсчитать число общих и термотолерантных колиформных бактерий.

Подсчитайте результат, сопоставьте с нормативом и сделайте заключение.

11.В новом районе застройки появились случаи пищевой токсикоинфекции, вызванные сальмонеллами. По эпидпоказаниям необходимо срочно исследовать воду водоема, в которой заболевшие дети купались.

Какие санитарно-показательные микроорганизмы нормируются для водоема?

Какие документы регламентируют нормы их содержания в воде?

12.Определите, соответствует ли используемая питьевая вода санитарномикробиологическим нормативам.

Если нормативы не соблюдены, то опишите ход дальнейших действий?

13.Вам дано задание провести санитарно-микробиологическое исследование воды.

Какое оборудование используют для забора проб?

Куда и в каком количестве осуществляется первичный посев?

14.Лаборант отобрал пробы питьевой водопроводной воды в 9 часов утра, а в лабораторию он доставил их в 16 часов. В течение 2 часов пробы хранились в холодильнике, а остальное время ушло на транспортировку воды.

Какими нормативными документами регламентируется это исследование?

15.Помощник санитарного врача отобрал пробу воды из разводящей сети городского водопровода: обжег кран при помощи тампона, смоченного в спирте, снял пробку с флакона вместе с бумажным колпачком, открыл кран, заполнил бутыль водой и заткнул пробкой.

Найдите ошибку в его действиях.

Укажите, какими нормативными документами регламентируется забор воды.

16.При исследовании воды на молокоперерабатывающем заводе были получены следующие результаты: БГКП – отсутствуют; ОМЧ воды составляло 210 КОЕ/мл. Оцените результаты и дайте заключение.