Сдавливание срезов при резке 2
15. Срез, сдавленный до 55% длины блока. Кристаллы поперек среза все еще различимы. Срезы образуют ленту, соединяясь поперек в серединах срезов. Деформации лучше заметны в конце первого среза (нижний), чем в начале второго
16. Сильно сжатый срез, 82%. Потеряны все структуры, кроме сердцевин трех или четырех кристаллов и прилежащих
пластинок.
51
Ткани, залитые в парафин 1
•Ткани, залитые в парафин представляют собой сетчатую и неравномерную структуру и пустоты, заполненные парафином. Свойства - сопротивляемость, плотность и твердость зависят от первичной природы элементов ткани прижизненных и коллоидных и химических повреждений от фиксации, проводки, просветления и пропитывания.
•Устойчивость к резке состава из парафина и сети ткани отличается от парафиновой среды.
•Расколы на сетчатой структуре ткани получаются не так легко, как в парафине, если ткань не хрупкая, передний угол небольшой или температура резки значительно ниже точки плавления парафина.
•Твердые ткани - участки, заполненные желтком, коллоид и т.п., могут расщепляться на сегменты, в то время как парафиновый матрикс регулируется потоком плавных перемещений.
•Хрящ или целлоидиновый матрикс, пропитанный парафином, в свою очередь может проявлять поток пластичных перемещений, в то время как парафиновый матрикс расслаивается на сегменты.
•Массы соединительной ткани могут реагировать на силы резки
разрывом фиброзных волокон и поверхность среза будет |
|
непрозрачной, а поверхность блока разрушенной. Следующий срез |
|
будет сделан через неадекватно поддерживаемую ткань. |
52 |
|
Ткани, залитые в парафин 2
•Из-за переменных сопротивлений тканей, количество укороченных срезов может быть незначительным или большим; сдавление ткани случается гораздо реже расширения или сдавления чистого парафина
•Эмбриональные ткани, однако, так слабо противостоят резке, что срезы ведут себя подобно чистому парафину; сморщивание в срезах после расправления на воде очень редко случается.
•эффективная резка требует примерно одинаковых пластических и эластических свойств и от ткани, и от заливочной среды. Исключение чрезмерного уплотнения фиксацией и другими процедурами, пропитывание парафином с низкой точкой пластичности и заливка тугоплавким парафином и соответствующая температура резки могут быть необходимыми требованиями для получения хороших срезов.
•В процессе резки характерно закручивание срезов; частички ткани и заливочной среды деформируются синхронно с деформациями закручивания.
•Если срезы тонкие или подогреты на воде, они разравниваются, но процесс расправления не имеет того же самого типа пластических изменений, которые вызваны резкой, и могут произойти поперечные разломы. Коллоид щитовидной железы и внутрисосудистые свертки, как заметно под микроскопом, часто обнаруживают этот дефект.
•Незначительные деформации резки, хоть и имеются, но трудны для распознавания, поскольку на дефекты резки наслаиваются изменения из-за набухания коллоида в процессе расправления срезов и окраске. Все это отчасти маскирует и компенсирует дефекты резки. 53
Последовательность операций микротомии
•Охладить блок (оставить в морозилке до утра)
•Настроить микротом, подогреть воду в ванне.
•Если нужно, срезать лишний парафин с боков и лицевой части блока скальпелем.
•Включить режим грубой резки и срезать лишний материал до необходимой глубины (обычно достаточно 10-15 движений при 30 мкм).
•Резать 5-6 тонких срезов, до полировки поверхности блока. Выбросить эти срезы.
•Резать срезы необходимой толщины. Для обычных диагностических целей и иммуногистохимии достаточно толщины 3-4 мкм.
•Расправить срезы на поверхности воды и выловить их на стекло. Стекло со срезами извлекать почти вертикально.
•Промокнуть торец стекла фильтровалкой.
•Подписать стекло и сушить вертикально при 60оС 20-30 мин.
•Блок сложить в архив.
54
Артефакты микротомии 1
Поверхность блока не была отполирована перед получением этого тонкого среза. Дырки – следы грубой резки толстых срезов. Первые 5-6 тонких срезов нельзя использовать для дальнейшей работы.
Первый срез в серии срезов всегда толще, чем установлено на микротоме (из-за теплового расширения парафина). Его тоже лучше не использовать.
55
Артефакты микротомии 2
Грязь на режущей кромке ножа или зазубрины.
Возможно, остатки солей из буфера при плохой промывке материала перед проводкой.
56
Артефакты микротомии 3
Материал сдавлен ножом на вырезке (до фиксации). Неадекватный график проводки или грязные реагенты Неполное расправление срезов в водяной бане.
Слишком горячая вода в бане или длительное плавание среза в ней.
57
Артефакты микротомии 4
Избыточное обезвоживание или просветление (в ксилоле) материала.
Слишком холодный блок
Плохо затянуты зажимы ножа и держателя.
Неправильный угол наклона.
58
Артефакты микротомии 5
Плохо затянуты зажимы ножа и держателя. Слишком плотный образец – дефекты проводки Срез сделан слишком быстро.
Недостаточный угол наклона ножа. Проблемы с микротомом.
59
Причины
• Быстрое охлаждение высоких (до 2 см) блоков.
•Чрезмерное сдавливание блока в зажиме микротома.
•Неадекватный состав парафина.
Трещины в блоке
Решения
•Не допускать быстрого охлаждения высоких блоков.
•Зажимать блок в зажиме прочно, но не избыточно.
• Пользоваться парафином с
пластификаторами.
Примечание
Такой проблемы нет при заливке в формы и кольца на заливочном центре при использовании специальных заливочных сред.
60