3 курс / Фармакология / Диссертация_Сиротенко_В_С_Антитромбогенные_свойства_новых_трициклических

111

Таблица 5.11 Влияние соединения ДАБ-15 и клопидогрела в терапевтических дозах* на активацию P2Y12-рецепторов тромбоцитов крыс в кальциевой среде, индуцированную 200 нМ АДФ in vivo (M±m)

(n=6)

*-данные достоверны по отношению к контролю, критерийone-way ANOVA

с поправкой Бонферрони (p<0,05)

Примечания:n-число животных в группе; терапевтические дозы

(значенияED50антиагрегантной активности, полученные на модели АДФ-

индуцированной агрегации (5 мкМ) в опытах invivо).

5.2. Влияние производного диазепино[1,2-а]бензимидазола ДАБ-15 на тромбоксан-простациклиновый баланс в организме крыс

5.2.1. Влияние вещества ДАБ-15 на продукцию тромбоксана В2 в

тромбоцитах интактных крыс.

Исходный уровень тромбоксана В2 в интактных тромбоцитах крыс составил 802,9 пкг/мл (табл.5.12). При этом соединение ДАБ-15

практически не изменяло уровень тромбоксана В2. В интактныхтромбоцитах крыс, получавших вещество ДАБ-15, среднее значение уровня данного показателя составило 772,7 пкг/мл (табл. 5.12).

112

Препарат сравнения ацетилсалициловая кислота ингибировала

продукцию тромбоксана В2 в интактных тромбоцитах. Уровень последнего при этом составил 606,7 пкг/мл (табл. 5.12).

Таблица 5.12 Влияние соединения ДАБ-15 и ацетилсалициловой кислоты в терапевтических дозах* на уровень тромбоксана B2 в

интактных тромбоцитах крыс, in vivo (M±m) (n=6)

Примечания:n-число животных в группе; терапевтические дозы (значения

ED50 антиагрегантной активности, полученные на модели АДФ-

индуцированной агрегации (5 мкМ) в опытах in vivо).

В тромбоцитах животных, которые были простимулированы арахидоновой кислотой (контрольная группа), уровень тромбоксана В2

увеличивался в 11,5 раз по сравнению с исходом и составлял 9250,9 пкг/мл

(табл. 5.13).

Однократное внутрижелудочное введение исследуемого соединения в дозе 5,6 мг/кг приводило к значительному снижению продукции тромбоксана В2 в тромбоцитах, индуцированных арахидоновой кислотой. Уровень исследуемого продукта при этом уменьшался в 2,2 раза и составил 4271,8

пкг/мл (табл. 5.13).

Препарат сравнения ацетилсалициловая кислота, также приводила к резкому уменьшению выработки тромбоксана В2, однако при этом уменьшало его количество в 1,7 раза по сравнению с контрольными значениями, уступая по активности соединению-лидеру ДАБ-15.

Однократное внутрижелудочное введение ацетилсалициловой кислоты

113

приводило к ингибированию продукции тромбоксана В2 до 5495,3 пкг/мл

(табл. 5.13).

Таблица 5.13 Влияние соединения ДАБ-15 и ацетилсалициловой кислоты на продукцию тромбоксана B2 в тромбоцитах крыс,

стимулированных арахидоновой кислотой, в дозах ED50 антиагрегантной активности in vivo (M±m) (n=6)

*-данные достоверны относительно контроля, критерий one-way ANOVA (поправка Бонферони) (p<0,0001)

#-данные достоверны относительно ацетилсалициловой кислоты, критерий one-way ANOVA (поправка Бонферони) (p<0,0001)

Примечания:n-число животных в группе

5.2.2. Влияние вещества ДАБ-15 на продукцию 6-кето-простагландина

F1α

В ходе проведенного исследования был установлен исходный уровень

6-кето-простагландина F1α в плазме интактных крыс, который составил

22602,6 пкг/мл (табл. 5.14).

При действии тестируемого образца ДАБ-15 уровень 6-кето-

простагландина F1α недостоверно повышался до 27805,7 пкг/мл (табл. 5.14).

При однократном внутрижелудочном введении препарат сравнения ацетилсалициловая кислота в 1,7 раза снижала выработку 6-кето-

простагландина F1α. Уровень последнего при этом составлял 12507,6 пкг/мл

(табл. 5.14).

114

Таблица 5.14 Влияние соединения ДАБ-15 и ацетилсалициловой кислоты на продукцию 6-кето-простагландина F1α, в дозах ED50

антиагрегантной активности in vivo (M±m) (n=6)

*-данные достоверны относительно контроля, критерий one-way ANOVA (поправка Бонферони) (p<0,0001)

**-данные достоверны относительно АСК, критерий one-way ANOVA (поправка Бонферони) (p<0,0001)

Примечания:n-число животных в группе

5.3. Влияние нового производного диазепино[1,2-а]бензимидазола на

уровень кальция в тромбоцитах крыс

Различные пути активации тромбоцитов сводятся к увеличению концентрации внутриклеточного кальция, секретируемого из плотных гранул хранения. При участии ионов кальция происходят процессы агрегации тромбоцитов [Ngo A.T.P., 2018].

5.3.1. Действие соединения ДАБ-15 на общий уровень кальция

Перед проведением эксперимента было выявлено отсутствие хелатирующих свойств соединения ДАБ-15. На рисунке 5.1 показано, что в сравнении с ЭГТА соединение ДАБ-15 не обладает способностью связывать ионы кальция.

116

Таблица 5.15 Влияние соединения ДАБ-15 на уровень внутриклеточного кальция в тромбоцитах, индуцированного тромбином (0,5 ед./мл) в кальциевой среде in vitro (М±m) (n=6)

*-данные достоверны относительно контроля, критерий Манна-Уитни

(p<0,05)

Примечания:n-число проб в группе

5.3.2. Действие соединения ДАБ-15 на уровень внутриклеточного

кальция в тромбоцитах

Для более полной оценки влияния соединения ДАБ-15 на пул ионов кальция, было проведено исследование в условиях отсутствия кальция во внеклеточной среде. Буферный раствор, в котором находились отмытые тромбоциты, не содержал ионов кальция.

117

Исходный уровень кальция в интактных тромбоцитах составил 30,6

нМ. После стимуляции тромбоцитов тромбином содержание ионов кальция возросло до 128,6 нМ.

Исследуемое соединение ДАБ-15 проявило дозозависимое ингибирование выхода ионов кальция из клеточных депо. В конечной концентрации 100 мкМ уровень кальция составил 30,1 нМ, что соответствует

76,6% ингибирования. При изучении тестируемого образца ДАБ-15 в

концентрации 10 и 1 мкМ было установлено, что соединение снижает концентрацию ионов кальция на 41,7 и 16,5% соответственно. Величина IC50

для соединения ДАБ-15 составила 15 мкМ (табл. 5.16).

Препарат сравнения верапамил не оказал выраженного ингибирующего влияния на высвобождение кальция из клеточных депо. В концентрации 100

мкМ верапамил снижал содержание ионов кальция до 128,1 нМ, что составило 0,4% ингибирования (табл. 5.16).

118

Таблица 5.16 Влияние соединения ДАБ-15 на уровень кальция в тромбоцитах, индуцированный тромбином (0,5 ед./мл) в безкальциевой среде in vitro (M±m) (n=5)

*-данные достоверны относительно контроля, критерий Манна-Уитни

(p<0,05)

Примечания:n-число проб в группе

119

5.4. Влияние соединения ДАБ-15 на секрецию АТФ из гранул хранения

тромбоцитов.

Измерение уровня секретируемой АТФ из δ-гранул тромбоцитов проводилось люминисцентным методом детекции с использованием агрегометра Chronolog-700. На данном приборе возможна одновременная запись кривых секреции АТФ и агрегации тромбоцитов. Таким образом,

наряду с измерением уровня секреции АТФ проводили измерение значения импеданса под влиянием вещества ДАБ-15.

При стимуляции цельной крови раствором АДФ в концентрации 5 мкМ было установлено, что значение импеданса для интактных образцов в среднем составило 20,0 Ом. При добавлении в тест-систему 200 мкМ тестируемого образца ДАБ-15 наблюдалось снижение сопротивления цельной крови до 5,8 Ом (рис. 5.2, а). Это подтверждает выраженное антиагрегантное действие соединения-лидера.

Уровень секретируемой АТФ при стимуляции 5 мкМ АДФ в контрольных образцах в среднем составил 64,8 нМ. Соединение ДАБ-15 в

концентрации 200 мкМ подавляло секрецию АТФ до 38,5 нМ (рис. 5.2, б).