3 курс / Фармакология / Диссертация_Потапова_А_А_Нефро_и_гепатозащитное_действие_сухого

92

тамола, патологические изменения выражены не резко. Балочная архитектоника печени изме-

нена умеренно. Синусоидальные капилляры умеренно расширены. Наблюдались лишь началь-

ные проявления гидропической дистрофии в форме просветления цитоплазмы клеток, преиму-

щественно по их периферии. Ядра гепатоцитов в большинстве своем сохраняли обычную структуру и размеры. Центральные вены имели небольшое количество эритроцитов. Патологи-

ческие включения в цитоплазме клеток не наблюдались. Лимфоцитарной инфильтрации не бы-

ло. Участков некрозов не обнаружено (рисунок Б.19 приложения Б). Количество некротизиро-

ванных гепатоцитов составило 1,8± 0,15%.

В группе животных, получавших СЭ-2-ГП-β-ЦД внутрибрюшинно в дозе 15 мг/кг на фоне введение парацетамола, гистологическая картина была аналогична предыдущей группе.

Балочная структура печени изменена умеренно. Синусоидальные капилляры несколько расши-

рены. Определялись первичные проявления гидропической дистрофии. Цитоплазма клеток по перифирии была просветлена. Ядра гепатоцитов сохраняли обычную структуру и размеры.

Центральные вены содержали умеренное количество крови. Патологические включения в цито-

плазме клеток не наблюдались. Лимфоцитарной инфильтрации не было. Участков некрозов не обнаружено (рисунок Б.20 приложения Б). Число некротизированных гепатоцитов равнялось

1,2±0,11%.

В группе животных, получавших препарат сравнения легалон перорально в дозе 100 мг/кг на фоне введение парацетамола, наблюдались более выраженные признаки гидропической дис-

трофии, чем в двух предыдущих экспериментальных группах. Причем гидропическая дистрофия имела диффузный характер. Большинство гепатоцитов находилось в состоянии достаточно вы-

раженной гидропической дистрофии, однако значительно менее выраженной, чем в контроле.

Балочная структура печени также была нарушена в меньшей степени, чем в контроле, тем не менее, достаточно явно просматривалась. Центральные вены и кровеносные сосуды триад были заполнены аморфным депозитом. Ядра большой части гепатоцитов находились в стадии карио-

рексиса и кариолизиса. В зоне портальных трактов наблюдалась повышенная лимфоцитарная инфильтрация (рисунок Б.21 приложения Б). Процент некротизированных гепатоцитов составлял

3,5±0,42%, что было достоверно выше, чем у животных, получавших СЭ ШБ и СЭ-2-ГП-β-ЦД на

94% и 192%.

Таким образом, гистологические исследования печени свидетельствуют, что поражение парацетамолом проявляется значительными структурными изменениями и гидропической дис-

трофией, ярко выраженными на гистологической картине срезов.

Изучаемые соединения оказывают защитное действие при данном типе поражения, ко-

торое проявляется в уменьшении степени дистрофии тканей и нормализации ее структуры. При этом, как и в случае биохимических данных, на гистологической картине печени животных, по-

93

лучавших легалон, восстановительные процессы выражены в меньшей степени, чем у крыс, по-

лучавших СЭ ШБ и СЭ-2-ГП-β-ЦД перорально и внутрибрюшино.

Гистоморфологическая картина печени была также исследована в группах после кур-

сового применения (14 дней) только СЭ ШБ перорально или СЭ-2-ГП-β-ЦД внутрибрюшинно в оптимальных терапевтических дозах .

На микропрепаратах печени крыс после курсового введения СЭ ШБ перорально цен-

тральные вены округлой или овальной формы, содержали небольшое количество эритроцитов.

Гепатоциты в печеночных балках тесно прилегали друг к другу по ходу балок. Между печеноч-

ными балками были хорошо видны синусоиды, которые имели мягкую извитость и были сво-

бодны от содержимого. Гепатоциты имели равномерную гомогенную окраску, цитоплазма со-

держала нежную зернистость. Печеночные дольки прилегали так, что плавно переходили одни в другие. Междольковые перегородки тонкие и едва различимы, ровные. Печеночные балки имели радиальную ориентацию. Большинство клеток содержало одно ядро. В портальных зонах отчетливо различались триады. Признаков воспалительных, дистрофических, некротических и других патологических изменений не обнаружено (рисунок Б.16 приложения Б).

При обзорном исследовании на гистологических препаратах печени крыс, получавших СЭ-2-ГП-β-ЦД внутрибрюшинно, выявлена равномерная окраска по всей площади срезов. Цен-

тральные вены были округлой или овальной формы, содержали большое количество эритроци-

тов. Гепатоциты в печеночных балках тесно прилегали друг к другу по ходу балок. Между пе-

ченочными балками были хорошо видны резко расширенные синусоиды, с грубой извитостью,

свободные от содержимого. Гепатоциты имели равномерную гомогенную окраску, цитоплазма содержала зернистость. Радиальная ориентация печеночных балок не нарушена. Ядра правиль-

ной округлой формы, размещены в центре цитоплазмы. В портальных зонах отчетливо разли-

чались триады. Сосуды печени не гиперемированы. Просветы сосудов триады зияли, правиль-

ной округлой формы. Вокруг зоны триад определялась небольшая лимфоцитарная инфильтра-

ция. Признаков дистрофических и некротических изменений гепатоцитов не обнаружено (ри-

сунок Б.17 приложения Б).

Таким образом, на гистологической картине печени крыс, получавших СЭ ШБ и СЭ-2-

ГП-β-ЦД, воспалительных, дистрофических, атрофических, некротических, склеротических и других патологических изменений в исследуемых органах не обнаружено.

5.3 Влияние СЭ ШБ и СЭ-2-ГП-β-ЦД в сравнении с легалоном на интенсивность пере-

кисного окисления липидов и антиоксидантную систему при повреждении печени пара-

цетамолом у крыс

Как видно из таблицы А.4 приложения А, у крыс после введения парацетамола наблю-

далось значительное накопление ДК в печени на 324% по сравнению с интактными животны-

95

52% и 57% и в 3,1 и 2,5 раза соответственно по сравнению с контрольными животными и до-

стоверно не отличались от уровня интактных животных. Активность СОД повышалась на 48%

и 85% соответственно, достигая значения нормы только в случае внутрибрюшинного введения СЭ-2-ГП-β-ЦД. Активность Г-S-Т полностью нормализовалась под влиянием СЭ ШБ, а при введении СЭ-2-ГП-β-ЦД поднималась даже выше нормы на 59% и была достоверно более вы-

сокой, чем при введении СЭ ШБ на 37%, что отмечалось и при введении СЭ-2-ГП-β-ЦД на фоне сулемового нефроза (см. главу 4.3).

При введении препарата сравнения легалона содержание ДК снижалось на 57%, не до-

стигая значения интактных животных и оставаясь достоверно более высоким, чем у животных,

получавших СЭ-2-ГП-β-ЦД на 124%. Активности каталазы и СОД возрастали на 29% и 102%

соответственно, не отличаясь от нормы. При введении легалона достоверно в меньшей степени

(на 37%), чем при введении СЭ ШБ и СЭ-2-ГП-β-ЦД нормализовалось содержание GSH в пече-

ни, повышаясь по сравнению с контролем на 95%, но оставаясь достоверно ниже, чем у ин-

тактных крыс на 31%. При этом активность Г-S-Т увеличивалась на 200%, достоверно не отли-

чаясь от здоровых животных и животных, получавших СЭ ШБ, но была достоверно ниже на

34%, чем у животных после внутрибрюшинного введения СЭ-2-ГП-β-ЦД.

5.4 ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В результате проведенных нами исследований установлено, что при токсическом пора-

жении печени парацетамолом наблюдается развитие цитолиза (АлАт на 699%, АсАт на 201%),

холестаза (ЩФ и ОБ на 101% и 307%), нарушение белково-синтетической функции печени,

накопление в ней триглицеридов (на 336%) с выраженной гидропической дистрофией и разви-

тием фокального колликвационного некроза, выявляемых на гистологической картине печени.

Лечебно-профилактическое применение у крыс СЭ ШБ в дозе 300 мг/кг и СЭ-2-ГП-β-

ЦД в дозе 15 мг/кг на фоне поражения печени парацетамолом оказывает выраженное гепато-

протекторное действие. При внутрибрюшинном введении СЭ-2-ГП-β-ЦД наблюдается более эффективная нормализация по сравнению с легалоном содержания общего и прямого билиру-

бина в сыворотке крови, а при пероральном – еще и активностей ЛДГ и γ-ГТ. В отношении дру-

гих исследованных биохимических показателей достоверных отличий между СЭ ШБ, СЭ-2-ГП-

β-ЦД и легалоном не выявлено.

Таким образом, при поражении печени парацетамолом СЭ ШБ, СЭ-2-ГП-β-ЦД так же,

как и легалон, практически в равной степени способствуют нормализации белковосинтетиче-

ской функции, показателей липидного и углеводного обменов, но в достоверно большей степе-

96

ни, чем легалон препятствуют развитию холестаза, а также цитолиза - при пероральном приме-

нении СЭ ШБ.

По коэффициенту гепатопротекции с учетом всех биохимических показателей СЭ ШБ

(75±4,0%) и СЭ-2-ГП-β-ЦД (68±5,0%) обладают одинаковой выраженностью гепатозащитного действия, которая сравнима с таковой легалона (65±4,2%), но легалон не устраняет гипербили-

рубинемию.

В работе Ажуновой Т.А., 1987 [2] было установлено, что курсовое введение экстракта ШБ в дозе 300 мг/кг оказывает выраженное фармакотерапевтическое влияние на функциональ-

ное состояние печени при ее поражении парацетамолом, снижая явления цитолиза, благоприят-

но воздействуя на желчеобразовательную и желчевыделительную функции печени и препят-

ствуя накоплению в организме продуктов ПОЛ, но сравнение его эффективности с эталонными препаратами авторами не проводилось.

Полученные данные о недостаточной эффективности легалона в отношении устранения гипербилирубинемии согласуются со сведениями литературы и ранее проведенными исследо-

ваниями о том, что препараты на основе расторопши пятнистой не в полной мере предотвра-

щают развитие холестаза. Так, в работах показано сохранение повышенного уровня прямого и непрямого билирубина при введении карсила на фоне поражения печени СС14 [42,54,55,57,58] и

повышенной активности γ-ГТ при алкогольной интоксикации[24,42,48,51]. В других экспери-

ментальных исследованиях и в клинической практике также установлено, что применение дан-

ных препаратов не всегда приводит к нормализации содержания билирубина и его фракций при заболеваниях печени. Например, назначение в клинике силимарина в течение 1 мес. лишь у

55% больных привело к нормализации уровня ОБ [75]

Гистоморфологическая картина печени на фоне поражения парацетамолом свидетель-

ствует о более эффективном гепатозащитном действии СЭ ШБ и СЭ-2-ГП-β-ЦД, чем препарата легалон, на фоне введения которого сохранялись более выраженные признаки гидропической дистрофии, сохранение нарушений балочной структуры и достоверно более высокий процент некротизированных гепатоцитов.

Курсовое применение СЭ ШБ перорально и СЭ-2-ГП-β-ЦД внутрибрюшино не оказыва-

ет влияния на здоровую печень по комплексу биохимических показателей и гистоморфологи-

ческой картине печени, что является обязательным требованием к потенциальным гепатопро-

текторам.

Нами также установлено, что при поражении печени парацетамолом наблюдается ин-

дукция окислительного стресса: значительное накопление продуктов ПОЛ – ДК (на 324%) с

уменьшением активностей ферментов антиоксидантной системы: каталазы, СОД и Г-S-Т, а

также значительным снижением содержания GSH на 65% в печени, что согласуется с данными

97

литературы. Как известно, истощение GSH при введении высоких доз парацетамола вызвано образованием высокореактивного метаболита парацетамола NAPQI, который необратимо свя-

зывается с GSH, что ведет к усилению ПОЛ в силу значительного снижения АОЗ [256], т.к. GSH является важным компонентом АОС. Антиоксидантные свойства глутатиона восстанов-

ленного определяются как непосредственным взаимодействием с АФК и обменными реакциями с дисульфидными связями, так и обеспечением функционирования ряда ферментов глутатионо-

вого цикла, из которых главным является Г-S-Т. Основная функция Г-S-Т в печени - защита клеток от ксенобиотиков и продуктов ПОЛ посредством их восстановления при участии GSH

[144,220].

Как правило, в здоровом организме механизм защиты для нейтрализации и предотвра-

щения производства свободных радикалов с помощью эндогенной АОС «работает» эффектив-

но. При использовании же высоких доз парацетамола баланс между генерацией АФК и меха-

низмом антиоксидантной защиты может нарушаться [148], что приводит к развитию оксида-

тивного стресса, накоплению токсичных метаболитов и развитию некроза. Кроме окислитель-

ного стресса, как указывают [203, 255], поражению печени парацетамолом, способствует и пря-

мое токсическое действие метаболита NAPQI с последующей активацией воспалительного ме-

диатора ФНО-α, что приводит к повреждению клеток печени и их гибели.

Полученные нами результаты свидетельствуют, что исследуемые нами субстанции и эталонный гепатопротектор легалон препятствуют развитию окислительного стресса, что явля-

ется, по нашему мнению, важнейшим механизмом их гепатозащитного действия. Введение СЭ ШБ и СЭ-2-ГП-β-ЦД способствует снижению содержания ДК в печени, отражающих интен-

сивность ПОЛ (на 59% и 81% соответственно), увеличивает или полностью нормализует актив-

ности таких антиоксидантных ферментов, как СОД и каталазы, что отмечается в наших иссле-

дованиях и при введении легалона. Но значительно более эффективно, чем легалон, СЭ ШБ и СЭ-2-ГП-β-ЦД способствуют усилению глутатионового звена АОЗ, повышая содержание GSH

в 3,1 и 2,5 раза и активности Г-S-Т на 233% и 355% соответственно, тогда как легалон увеличи-

вает эти показатели в 1,95 раза и на 200% соответственно по сравнению с патологическим кон-

тролем.

При этом введение СЭ-2-ГП-β-ЦД на фоне поражения печени парацетамолом повышает сниженную при патологии активность Г-S-Т даже достоверно выше интактных значений на

59%, что отмечается, как продемонстрировано в главе 4, и на фоне поражения почек хлоридом ртути (II). Индукция данного фермента, по-видимому, вносит существенный вклад в усиление ферментативной системы антиоксидантной защиты и повышает способность организма к пре-

одолению окислительного стресса [206].

98

Снижение интенсивности ПОЛ, индуцированного парацетамолом, и уменьшение окис-

лительного стресса в печени животных под влиянием флавоноидов при интоксикации высоки-

ми дозами этого препарата установлено и рядом других исследований [265, 147, 253]. Некото-

рые авторы считают, что первостепенное значение для поддержания про- /антиоксидантного баланса в организме при помощи активных компонентов ряда растительных препаратов имеет их прямое антиоксидантное действие, что приводит к снижению содержания АФК, выделяю-

щихся в результате метаболизма парацетамола [143], защищает от окислительного поврежде-

ния и поддерживает активность таких антиоксидантных ферментов, как СОД и каталаза, участ-

вующих в ликвидации АФК и органических перекисей из клеток [216]. Не исключено, что бай-

калин, основной компонент СЭ ШБ, при введении в организм снижает свободнорадикальное окисление путем прямого антиоксидантного действия, выступая в качестве «ловушки» свобод-

ных радикалов, образующихся при метаболизме парацетамола, и уменьшая накопление про-

дуктов ПОЛ.

С другой стороны, немаловажное значение для преодоления окислительного стресса при парацетамоловой интоксикации имеет усиление байкалином глутатионового звена эндоген-

ной АОС: поддержание необходимого уровня GSH (защита от истощения) и активности Г-S-

Т, которая использует GSH для связывания высокореактивного метаболита парацетамола

NAPQI. Способность байкалина предотвращать истощение глутатиона восстановленного при ацетаминофен-индуцированном поражении печени у мышей продемонстрирована и в работе

[212].

Таким образом, можно предполагать, что механизм гепатопротекторной, как и нефро-

протекторной (см. главу 4) активности байкалина заключается в его способности тормозить ин-

дуцированный различными факторами окислительный стресс путем: 1) непосредственного ан-

тиоксидантного действия; 2) индукции в организме системы АОЗ.

Эта гипотеза согласуется с работами, в которых показано, что гепатопротекторные свой-

ства связаны как с увеличением антиоксидантной защиты, так и со снижением in vivo свобод-

норадикального окисления [143, 164, 257, 263].

Исходя из полученных нами результатов, чрезвычайно важным для защиты против окис-

лительного стресса следует считать именно активирование эндогенной защитной системы и оп-

тимизацию ее работы. Так, СЭ ШБ и СЭ-2-ГП-β-ЦД в большей степени, чем легалон и урокам,

усиливают систему АОЗ в печени и почках, обладая при этом и более выраженной гепатоза-

щитной и нефрозащитной активностями.

99

ГЛАВА 6 СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ГЕПАТОНЕФРОЗАЩИТНОГО ДЕЙСТВИЯ СУХОГО ЭКСТРАКТА ШЛЕМНИКА БАЙКАЛЬСКОГО, ЕГО ВОДОРАСТВОРИМОЙ ФОРМЫ, ЛЕГАЛОНА И УРОКАМА ПРИ СОЧЕТАННОМ ПОРАЖЕНИИ ПЕЧЕНИ И ПОЧЕК ЦИКЛОФОСФАНОМ

6.1 Сравнительное изучение гепатонефрозащитного действия СЭ ШБ, СЭ-2-ГП-β-ЦД, ле-

галона и урокама при применении циклофосфана

Как следует из данных таблицы А.5 приложения А, однократное введение циклофосфана вызвало повышение в сыворотке крови активностей АлАт на 39%, АсАт на 22% (со снижени-

ем коэффициента де Ритиса на 25%), ЛДГ на 58% и ЩФ на 21%, а также повышение количе-

ства общего билирубина на 45%, в основном, за счет прямой фракции (+64%), что характерно для синдромов цитолиза и холестаза. Кроме того, у животных контрольной группы по сравне-

нию с интактными крысами (таблица А.6, приложения А) в сыворотке крови возрастала кон-

центрация креатинина на 32% и мочевины на 41%, увеличивалась концентрации креатинина в моче на 49% и снижался такой показатель, как СКФ в 1,7 раза, что свидетельствовало о нару-

шении экскреторной функции почек. Интоксикация животных ЦФ сопровождалась также угне-

тением диуреза, свидетельствующим о снижении водовыделительной функции почек: у живот-

ных контрольной группы объем выделяемой мочи уменьшился на 27%. Основные нарушения белкового, липидного и углеводного обменов, которые наблюдались при введении ЦФ, заклю-

чались в следующем: отмечалось повышение содержания в сыворотке крови холестерина на

17%, глюкозы на 24%, ТРГ - на 60%, а в печени наблюдалось увеличение содержания ТРГ на

277% и снижение количества гликогена на 71%. Одновременно в сыворотке крови наблюда-

лось снижение количества общего белка (-14%) и белковых фракций (альбуминов на 19%, гло-

булинов на 18%).

Таким образом, регистрируемые изменения биохимических показателей при введении циклофосфана у крыс свидетельствовали о развитии поражения печени и почек: наличие син-

дромов цитолиза и холестаза, жировой дистрофии печени, нарушения желчесекреторной, бел-

ково-синтетической и гликогензапасающей функций печени, азотонемического и нефротиче-

ского синдромов.

При исследовании гистологической картины этих органов после введения циклофосфа-

на были выявлены патологические изменения в печени и почках. Как видно из рисунка Б.22

приложения Б, в печени наблюдались ярко выраженные структурные нарушения с гидропиче-

ской дистрофией. Была резко изменена балочная система печеночных долек. Клетки печени находились в состоянии паренхиматозной дистрофии. Гепатоциты были увеличены в размерах,

набухшие. Цитоплазма большей части гепатоцитов утратила естественную зернистость и хро-

матофилию. Синусоидные капилляры печеночных балок заметно расширены. В отдельных зо-