3 курс / Фармакология / Диссертация_Калитин_К_Ю_Противосудорожные_свойства_новых_парагалогенфенил

111

Таблица 5.4

Влияние вещества РУ-1205 в возрастающих дозах на гиперактивность, вызванную фенамином (6 мг/кг, и.п.) у мышей в актометре (M±m).

Примечание: * - статически значимо по отношению к интактной контрольной группе (р≤0,05, критерий Краскела-Уолиса с post-hoc тестом Данна); # - статистически значимо по отношению к группе фенамин+физ. р-р (р≤0,05, критерий Краскела-Уолиса с post-hoc тестом Данна).

5.4.2 Изучение влияния соединения РУ-1205 на эффекты L-ДОФА

Как правило, активность в данном тесте проявляют ингибиторы МАО,

которые потенцируют развитие стереотипных поведенческих реакций на фоне введения низких доз L-ДОФА [Андреева, Н.И., 2005].

В ходе эксперимента L-ДОФА в дозе 500 мг/кг вызывал развитие характерного стереотипного поведения, тогда как низкие дозы данного анализатора (100 мг/кг) не приводили к существенным изменениям поведенческой активности животных. Предварительное введение соединения РУ-1205 в дозах 1, 10 и 30 мг/кг не оказывало статистически значимого влияния на выраженность стереотипии в опытных группах по сравнению с негативным контролем (таблица

5.5).

Отсутствие статистически значимых признаков изменения поведения животных (в соответствии с оценочной шкалой по Т.А. Ворониной) в группах,

получавших меньшие подпороговые для стереотипной реакции дозы L-ДОФА,

позволяет с большой степенью вероятности исключить фармакологически значимую МАО-ингибирующую активность у изучаемого вещества.

112

Таблица 5.5

Влияние вещества РУ-1205 в возрастающих дозах на выраженность

Примечание: * - p<0,05 – статистически значимо по отношению к позитивному контролю (критерий Краскела-Уолиса с post-hoc тестом Данна).

5.4.3 Влияние соединения РУ-1205 на каталептогенный эффект

галоперидола

Каталепсия, свойственная для «типичных» нейролептиков, обусловлена

блокированием D2-рецепторов на уровне нигростриарной системы [Sanberg P. R. et al., 1988].

113

В результате проведенного эксперимента установлено, что тестируемое соединение РУ-1205 при интраперитонеальном введении в дозах 1, 10 и 30 мг/кг не вызывало статистически значимого изменения каталептогенных свойств галоперидола у мышей опытной группы в сравнении контрольными животными,

получавшими галоперидол (таблица 5.6).

Таблица 5.6

Влияние вещества РУ-1205 на каталепсию, вызванную галоперидолом (1 мг/кг, и.п.) у мышей (M±m).

Таким образом, на данной модели соединение РУ-1205 не оказывало антикаталептогенного действия. Результаты проведенного теста согласуются с работами других авторов. По данным Marin C. агонисты каппа-опиоидных рецепторов не влияют на каталептогенный эффект антагонистов D2-рецепторов

[Marin C., 1996].

5.4.4 Влияние соединения РУ-1205 на гиперкинез, вызванный 5-

гидрокситриптофаном у мышей

5-гидрокситриптофан (5-ГТФ) является аминокислотой, предшественником серотонина и повышает его межсинаптическую концентрацию в медиальной префронтальной коре [Lambe, E.K., 2000]. У животных эффекты 5-ГТФ проявляются в виде гиперкинеза – «встряхивания» головой. Агонисты каппа-

опиоидных рецепторов способны устранять данный гиперкинез [Marek, G. J., 2003;

Werkheiser, J. L., 2007].

115

5.4.5 Действие соединения РУ-1205 на эффекты резерпина

Резерпин вызывает истощение гранулярных депо катехоламинов

(дофамина, норадреналина и серотонина), как следствие, в этих системах наблюдается снижение нейромедиаторной передачи [Verheij, M.M., 2009]. Данный анализатор нарушает автономные нервные функции, что выражается гипотермией и блефароптозом [Воронина, Т.А., 2012]. Резерпиновая модель не является строго селективной, поскольку резерпин вызывает истощение депо сразу нескольких нейротрансмиттеров, тем не менее модель целесообразна в комплексе с другими тестами и позволяет косвенно судить о наличии моноаминергических компонентов

вспектре активности изучаемого вещества [Миронов А.Н., 2012].

Вгруппе контроля резерпин в дозе 2,5 мг/кг после интраперитонеального введения вызывал понижение ректальной температуры животных на 3˚С (р<0,05),

блефароптоз выраженностью в 2,8±0,5 балла (р<0,05). Соединение РУ-1205 в

диапазоне доз 1-30 мг/кг и.п. не оказывало влияния на степень выраженности гипотермии, блефароптоза и двигательных расстройств (таблица 5.8).

Таблица 5.8.

Влияние вещества РУ-1205 в возрастающих дозах на эффекты резерпина

(2,5 мг/кг и.п.), (M±SD).

Примечание: * - p<0,05 – статистически значимо по отношению к исходным данным (влияние резерпина, критерий Краскела-Уолиса с post-hoc тестом Данна).

116

Оценивая полученные результаты, можно заключить, что соединение РУ-

1205, вероятно, не оказывает достаточно выраженного влияния на моноаминергические системы мозга, ассоциированные с эффектами резерпина.

5.4.6 Эффект соединения РУ-1205 на ареколиновый тремор

М-холиномиметик ареколин индуцирует у мышей паркинсоноподобный гиперкинез в виде тремора [Lukomskaya, N. Ya., 2008]. Изменение выраженности данного эффекта ареколина на фоне введения других веществ может происходить при наличии у этих веществ М-холиноблокирующего или М-холиномиметического действия [Андреева, Н.И., 2005].

Ареколин при подкожном введении в дозе 25 мг/кг вызывал развитие генерализованного тремора у мышей. Соединение РУ-1205 в дозах 1, 10 и 30 мг/кг статистически значимо не влияло на латентный период и продолжительность ареколинового тремора (таблица 5.9).

Таблица 5.9

Влияние вещества РУ-1205 на выраженность ареколин-индуцированного (25 мг/кг, п.к.) тремора у мышей, (M±m).

Статистически значимого эффекта соединения РУ-1205 на данной модели

установлено не было, что указывает на отсутствие у вещества М-холинергической

активности.

5.4.7 Эффект соединения РУ-1205 на никотиновый тремор

Никотин является Н-холиномиметиком, который вызывает у мышей тремор

и судороги [Mansner, R., 1977]. Изменение выраженности эффектов никотина после

117

введения изучаемых веществ может расцениваться как признак холинергической активности, связанной с воздействием на Н-холинорецепторы.

После введения мышам Н-холиномиметика никотина в дозе 6 мг/кг подкожно отмечалось развитие тремора и судорог у 100% контрольных и опытных животных. Сочетанное введение соединения РУ-1205 в диапазоне доз 1-30 мг/кг и анализаторного вещества не вызывало статистически значимых изменений латентного периода и продолжительности тремора по сравнению с контрольной группой животных, получавшей никотин (таблица 5.10).

Таблица 5.10

Влияние соединения РУ-1205 в возрастающих дозах на никотиновый (6 мг/кг, п.к.) тремор и судороги у мышей (M±m).

Соединение РУ-1205 не оказывало статистически значимого влияния на эффект никотина, что служит свидетельством отсутствия у изучаемого вещества Н-

холинергической активности.

5.5 Заключение

Результаты проведенных исследований in vitro и in vivo свидетельствуют о взаимодействии соединения РУ-1205 с каппа-опиоидными рецепторами, при этом эффекты вещества устраняются после введения высокоселективного каппа-

антагониста норбиналторфимина. ЭК50 подавления электроиндуцированных сокращений семявыносящего протока кролика составила 2 нМ. Nor-BNI обратимая противосудорожная активность в тесте с бикукуллином (5,5 мг/кг и.п.) позволяет сделать вывод о том, что антиконвульсивное действие соединения РУ-1205 (10

118

мг/кг и.п.) реализуется преимущественно за счет активации каппа-опиоидных рецепторов.

Изученное соединение позволяет нивелировать искусственный дефицит ГАМК-ергического торможения в ЦНС. После провокации эпилептиформной активности пикротоксином, введение вещества РУ-1205 приводило к сокращению в 12 раз площади под кривой спектральной плотности до 0,15±0,1 mV2 в диапазоне

1-13 Гц на всех каналах, при этом механизм его действия не связан с активацией бензодиазепинового сайта и ГАМКA-ρ рецепторов.

На модели диализа и фиксации мембранного потенциала показано, что соединение РУ-1205 в диапазоне концентраций 1-1000 мкМ обладает выраженным мембранотропным действием на нейроны моллюска прудовика, обратимо подавляет натриевые (ЭК50 = 93,5 мкМ) и кальциевые токи (ЭК50 = 95,7 мкМ),

снижает специфические токи утечки, что также может лежать в основе его антиконвульсивного действия.

В исследованиях с использованием различных анализаторных веществ,

селективно влияющих на отдельные нейромедиаторные системы, было установлено, что соединение РУ-1205 реализует противосудорожный эффект с возможным вовлечением моноаминергических нейромедиаторных систем.

Выявленные нейрохимические закономерности позволяют выдвинуть предположение о ключевой роли каппа-опиоидной системы в механизме противосудорожного действия соединения РУ-1205 с вероятным сопутствующим влиянием на дофамин-, серотонин- и ГАМК-ергические структуры, а также токи

Na+ и Ca2+.

119

ГЛАВА 6. СОПУТСТВУЮЩИЕ, НЕЖЕЛАТЕЛЬНЫЕ И

ОБЩЕТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ СОЕДИНЕНИЯ РУ-1205

Исследования новых фармакологически активных веществ включают изучение их побочных, общефармакологических и нейротоксикологических свойств. Одной из главных проблем в применении многих антиконвульсивных средств является развитие толерантности к противосудорожному эффекту,

феномен «рикошета» и синдром отмены [Katzung B.G., 2018].

Большинство противосудорожных препаратов имеют узкую широту терапевтического действия и обладают выраженными токсическими свойствами,

поэтому изучение токсического действия и характера патологических изменений,

приводящих к гибели животных, является важным аспектом фармакологического исследования новых соединений [Арзамасцев Е.В., 2012].

Поскольку проявление различных токсических эффектов в дозах, меньших,

чем среднелетальная возможно до наступления гибели животных, целесообразным представляется использование схемы многотестового наблюдения по Ирвину

[Irwin S., 1964] для определения доз, с которых начинают развиваться нейротоксические и другие неблагоприятные эффекты.

6.1 Влияние соединения РУ-1205 на развитие толерантности к

противосудорожному действию, феномена «рикошета» и синдрома отмены

На данном этапе исследования была проведена оценка развития толерантности и синдрома «отдачи» при хроническом введении соединения РУ-

1205 и препарата сравнения диазепама. Результаты эксперимента представлены в таблице 6.1.

За день до введения изучаемых веществ исходный уровень порога для миоклонических судорог был определен титрованием коразола во всех группах мышей. В последующие дни у контрольных животных отмечалось незначительное снижение уровня судорожного порога, что может быть связано с явлением киндлинга.

120

Таблица 6.1

Влияние соединения РУ-1205 (TID200 31 мг/кг и.п.) и диазепама (TID200 5 мг/кг и.п.) на уровень судорожного порога в эквиваленте коразола (мг/кг) за день

до хронического введения изучаемых соединений, на 1, 14 и 28 день хронического введения, на 2, 4 и 7 дни после отмены хронического введения противосудорожных веществ (M±m).

Примечание: * – статистически значимые различия по сравнению с группой контроля в тот же день (p≤0,05, критерий Манна-Уитни); # – статистически значимые различия по сравнению с первым днем введения (p≤0,05, тест Вилкоксона для зависимых выборок).

В группе животных, которым инъецировалось соединение РУ-1205 (31

мг/кг, и.п.), пороговая доза коразола возросла до 87±5,0 мг/кг, что было в 3 раза выше по сравнению с контрольным значением (p<0,05). В дальнейшем уровень судорожного порога вышел на плато и сохранялся без существенных изменений.

Через сутки после отмены введения соединения РУ-1205 пороговая доза коразола статистически значимо не отличалась от уровня группы негативного контроля в тот же день.

Диазепам (5 мг/кг, и.п.) вызывал в первый день повышение судорожного порога в 3 раза по сравнению с группой контроля (p<0,05). Однако по сравнению с

1-м днем активность препарата сравнения статистически значимо (p<0,05)

снизилась на 21% и 44% к 7-му и 28-му дню хронического введения соответственно. На следующие сутки после отмены диазепама уровень судорожного порога мышей уменьшился до 23,0±4,5 мг/кг коразола, что было значительно ниже (p<0,05), чем в группе контроля в тот же день (28,9±4,8 мг/кг коразола).

При оценке признаков синдрома отмены на второй день после прекращения введения вещества РУ-1205 наличие прыжков, встряхиваний, тремора, стука