25

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Лабораторные животные

Эксперимент реализован на 442 крысах-самцах линии Wistar, m = 170-190

грамм (на модели необратимой окклюзии общих сонных артерий), m = 220-240

грамм (на модели окклюзии средней мозговой артерии), полученных из ФГУП «Питомник лабораторных животных «Рапполово» (Всеволожский район, Ленинградская область). Лабораторных животных содержали в контролируемых условиях вивария при влажности 65±5%, температуре воздуха 22±2ºC и

естественной смене свето/темнового режима со свободным доступом к воде и еде.

Все манипуляции, проводимые над животными, не противоречили требованиям Международной Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных целей (Strasbourg, 22 June, 1998.), Приказу МЗ РФ № 199н от 01.04.2016 г. «Об утверждении правил надлежащей лабораторной практики» и ГОСТу 33044-2014. Экспериментальные особи были размещены в макролоновых клетках с решетчатыми стальными крышками и углублением для корма. В качестве подстилочного материала были использованы сухие нехвойные автоклавированные опилки. Еженедельно менялись клетки, поилки и подстил для крыс. Протокол заседания научного этического комитета ПМФИ-филиала ФГБОУ ВО ВолгГМУ Минздрава России №17 от 10.12.2016 г.

2.2.Характеристика исследуемых соединений

Впроцессе экспериментального исследования было проведено изучение церебропротекторного действия производных пиримидин-4(1H)-она, синтезированных на кафедре органической химии ПМФИ-филиала ВолгГМУ МЗ РФ под руководством профессора Кодониди И.П., за что выражаем ему и коллективу кафедры искреннюю благодарность. Все 10 исследуемых соединений (лабораторные шифры: PIR-4, PIR-5, PIR-6, PIR-7, PIR-8, PIR-9, PIR-10, PIR-14, PIR-20, PIR-23) вводились внутрибрюшинно. В качестве растворителя данных соединений использовали воду очищенную с твином-80 в эквивалентной дозе (0,1

27

2.3. Дизайн исследования

Изучение церебропротекторной активности производных пиримидин-4(1H)-

она условно можно разделить на 3 блока (табл. 2):

1.Скрининговое исследование на модели глобальной ишемии головного мозга с целью поиска наиболее активного вещества для дальнейшего изучения.

2.Углубленное изучение церебропротекторного действия выбранного соединения-лидера на модели фокальной ишемии головного мозга.

3.Изучение потенциальных механизмов реализации церебропротекторного действия соединения-лидера из ряда производных пиримидин-4(1H)-она.

При проведении скринингового этапа работы и все исследуемые соединения

(доза 50 мг/кг) [19, 41] и препараты сравнения вводились внутрибрюшинно в течение десяти дней до моделирования ишемии головного мозга.

Углубленное изучение церебропротекторного действия соединения-лидера проводилось на модели фокальной церебральной ишемии, экспериментальная субстанция и препараты сравнения вводились сразу после операции и ежедневно в течение 3-х суток. В данном блоке оценивали влияние изучаемых объектов на неврологический, поведенческий, сенсомоторный дефицит, влияние на антитромботическую и вазодилатирующую функцию, степень отека и некроза тканей головного мозга, а также проводили гистологический и морфометрический анализ. В качестве препаратов сравнения на данном этапе и в ходе скрининговых исследований были использованы кавинтон (3,2 мг/кг) [35], так как он является препаратом первой линии при цереброваскулярных нарушениях [172] и оказывает положительное влияние на когнитивный дисбаланс [247], а также циннаризин (5,6

мг/кг) [61] исходя из схожести структуры, и как следствие возможности однонаправленного механизма действия.

Третий этап исследований построен на моделировании фокальной церебральной ишемии, введении изучаемых объектов сразу после операции и ежедневно 3-е суток и оценке потенциально возможных механизмов действия,

таких как антиоксидантная и антирадикальная активность, влияние на кальций-

28

опосредованное повреждение головного мозга, концентрацию лактата и

потребление глюкозы, а также изменение содержания маркеров апоптоза.