5 курс / Пульмонология и фтизиатрия / Хроническая_обструктивная_болезнь_лёгких_перспективы

Приложение

Рис. 7. Характеристика эндотелиальных клеток Nectin2+ в лёгких самок мышей C57BL/6 на 45-е сутки эксперимента. Клетки анализировали методом проточной цитометрии с ис-

пользованием антител против CD45, CD31, CD34, CD146 и CD112 (Nectin2). (A) Установле-

ние фенотипа и качественный анализ экспрессии CD31 (APC) и CD34 (FITC); (B) Точечный график контроля изотипа для IgG2b (APC) и IgG2a (FITC); (C) Гистограмма изотипического контроля IgG2b (PE); (D) Гистограмма экспрессии CD112 (Nectin2) (PE); (E) влияние дофамина и спиперона на содержание зрелых эндотелиальных клеток и их предшественников (% от общего числа мононуклеарных клеток) в культуре мононуклеарных клеток, выделенных из лёгких самок мышей линии C57BL/6 с CSE/LPS индуцированной эмфиземой на 45-е сутки (М ± m). Представлены результаты 3 независимых экспериментальных серий. Группы: 1 группа – контрольная группа (CD31+ клетки до культивирования), 2 группа – CD31+ клетки после культивирования на 5 день, 3 группа – CD31+ клетки после культивирования со спипероном (10-7 М), 4 группа – CD31+ клетки после культивирования с дофамином (10-7 М), а группа 5 – клетки CD31+ после культивирования со спипероном (10-7 М) и дофамином (10−7 М). Достоверные различия * – по сравнению с 1-й группой. ● – по сравнению со 2-й группой (по критерию Манна–Уитни (p < 0,05)).

231

Хроническая обструктивная болезнь лёгких:

перспективы фармакологической регуляции стволовых клеток в клинике

Рис. 9. Измерения липидного профиля в крови самок и самцов мышей C57BL/6 на 189 сутки: (a) Уровень триглицеридов в сыворотке (Ммоль/л); (b) Уровень липопротеинов высокой плотности (Ммоль/л); (c) Уровень липопротеинов низкой плотности (Ммоль/л); (d) Уровень липопротеинов очень низкой плотности (Ммоль/л); (e) Отношение триглицеридов к липопротеинам высокой плотности (TG/HDL). Группы: контроль ‒ мыши интактного контроля, ожирение ‒ мыши с метаболическими нарушениями (МН) (ожирение и гипергликемия), CSE ‒ мыши с эмфиземой лёгких, ожирение+CSE ‒ мыши с МН и эмфиземой лёгких, ожирение+CSE+GLP-1 ‒ мыши с МН и эмфиземой лёгких в условиях введения GLP-1, ожи- рение+CSE+pegGLP-1‒мышисМНиэмфиземойлёгкихвусловияхвведенияpegGLP-1.Ре- зультаты представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего. Достоверные различия * ‒ с интактным контролем; ● ‒ с группой ожирения+CSE (по критерию Манна– Уитни (p < 0,05)). CSE, экстракт сигаретного дыма. Obesity, ожирение.

232

Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

Приложение

Рис. 10. Влияние глюкагоноподобного пептида-1 (GLP-1) и пегилированного GLP-1 (pegGLP-1) на индекс массы тела (ИМТ) и индекс Ли самцов и самок мышей C57BL/6 на 189 сутки: (а) ИМТ (г/см2); (б) Индекс Ли. Группы: контроль ‒ мыши интактного контроля, ожирение ‒ мыши с метаболическими нарушениями (МН) (ожирение и гипергликемия), CSE ‒ мыши с эмфиземой лёгких, ожирение+CSE ‒ мыши с МН и эмфиземой лёгких, ожи- рение+CSE+GLP-1 ‒ мыши с МН и эмфиземой лёгких в условиях введения GLP-1, ожире- ние+CSE+pegGLP-1 ‒ мыши с МН и эмфиземой лёгких в условиях введения pegGLP-1. Результаты представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего. Достоверные различия * ‒ по сравнению с интактным контролем (р<0,05); ● ‒ по сравнению с группой ожирения+CSE (по критерию Манна–Уитни (p < 0,05)). CSE, экстракт сигаретного дыма. Obesity, ожирение.

233

Хроническая обструктивная болезнь лёгких:

перспективы фармакологической регуляции стволовых клеток в клинике

Рис. 11. Площадь под кривой (AUC) самок и самцов мышей C57BL/6 во время теста на толерантность к глюкозе (188 сутки). Группы: контроль ‒ мыши интактного контроля, ожирение ‒ мыши с метаболическими нарушениями (МН) (ожирение и гипергликемия), CSE – мыши с эмфиземой лёгких, ожирение+CSE ‒ мыши с МН и эмфиземой лёгких, ожи- рение+CSE+GLP-1 ‒ мыши с МН и эмфиземой лёгких в условиях введения GLP-1, ожи- рение+CSE+pegGLP-1 ‒ мыши с МН и эмфиземой лёгких в условиях введения pegGLP-1. Результаты представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего. * ‒ достоверность различий по сравнению с интактным контролем (по критерию Манна–Уитни (p < 0,05)). CSE, экстракт сигаретного дыма. Obesity, ожирение.

234

Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

Приложение

Рис. 12. Морфологическое исследование лёгкого, полученное от самцов и самок мышей C57BL/6 (n = 6): (а) Микрофотография срезов левого лёгкого (нижнее легочное поле) (189 сутки). Ткани окрашивали гематоксилин-эозином; (b) Область расширенной эмфиземой лёгочной ткани (нижнее легочное поле) мышей из всех групп (на 148 сутки); (c) Область расширенной эмфиземой лёгочной ткани (верхнее легочное поле) мышей из всех групп (на p); (d) Область расширенной эмфиземой лёгочной ткани (среднее легочное поле) мышей из всех групп (189 сутки); (e) Область расширенной эмфиземой лёгочной ткани (нижнее среднее легочное поле) мышей из всех групп (189 сутки). Группы: контроль ‒ мыши интактного контроля, ожирение ‒ мыши с метаболическими нарушениями (МН) (ожирение и гипергликемия),CSE‒мышисэмфиземойлёгких,ожирение+CSE‒мышисМНиэмфиземойлёгких, ожирение+CSE+GLP-1 – мыши с МН и эмфиземой лёгких в условиях введения GLP-1, ожи- рение+CSE+pegGLP-1‒мышисМНиэмфиземойлегкихвусловияхвведенияpegGLP-1.Ре- зультаты представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего. Достоверные различия * – с интактным контролем, ● ‒ с группой ожирение+CSE (по критерию Манна– Уитни (p < 0,05)). CSE, экстракт сигаретного дыма. Obesity, ожирение.

235

Хроническая обструктивная болезнь лёгких:

перспективы фармакологической регуляции стволовых клеток в клинике

Рис. 13. Относительное содержание клеток, экспрессирующих антиген CD31 в лёгких, выделенных у самцов и самок мышей C57BL/6 при иммуногистохимическом окрашивании на специфический клеточный маркер: CD31 (189 сутки). Группы: контроль ‒ мыши интактного контроля, ожирение ‒ мыши с метаболическими нарушениями (МН) (ожирение и гипергликемия), CSE ‒ мыши с эмфиземой лёгких, ожирение+CSE ‒ мыши с МН и эмфиземой лёгких, ожирение+CSE+GLP-1 ‒ мыши с МН и эмфиземой лёгких в условиях введения GLP-1, ожирение+CSE+pegGLP-1 ‒ мыши с МН и эмфиземой легких в условиях введения pegGLP-1. Результаты представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего. Достоверные различия * – с интактным контролем, ● ‒ с группой ожирение+CSE (по критерию Манна–Уитни (p < 0,05)). CSE, экстракт сигаретного дыма. Obesity, ожирение.

236

Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

Приложение

Рис. 14. Характеристика популяции клеток, выделенных из лёгкого самца и самки мыши C57BL/6на189сутки.(a)Содержаниеэндотелиальныхпрогениторныхклеток(ЭПК)(CD45– CD31+CD34+); (b) содержание EPC (CD31+CD34+CD146+); (c) содержание предшественники ангиогенеза(CD45–CD309+CD117+);(d)содержаниеклетоквпросветезарождающегосясосу- да(CD31+CD34–);(e)содержаниесосудистыхгладкомышечныхклеток(CD31–CD34+CD146+);

(f) содержание перицитов (CD31–CD34–CD146+). Клетки анализировали методом проточной цитометрии с использованием антител к мышам CD31, CD34, CD45, CD146, CD117, CD309. Точечные графики являются репрезентативными для трёх независимых экспериментов со средним значением из трёх независимых экспериментов. Группы: контроль ‒ мыши интактного контроля, ожирение ‒ мыши с метаболическими нарушениями (МН) (ожирение и гипергликемия), CSE ‒ мыши с эмфиземой лёгких, ожирение+CSE ‒ мыши с МН и эмфиземой лёгких, ожирение +CSE+GLP-1 ‒ мыши с MН и эмфиземой легких в условиях введения GLP-1, ожирение +CSE+pegGLP-1 ‒ мыши с MН и эмфиземой легких в условиях введения pegGLP-1. Результаты представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего. Достоверные различия * – с интактным контролем, ● ‒ с группой ожирение+CSE (по критерию Манна–Уитни (p < 0,05)). CSE, экстракт сигаретного дыма. Obesity, ожирение.

237

Хроническая обструктивная болезнь лёгких:

перспективы фармакологической регуляции стволовых клеток в клинике

Рис. 15. Эффекты лечения GLP-1 и pegGLP-1 на эндотелиальных клетках CD31+, выделенных из лёгких самцов и самок мышей C57BL/6 на 189 сутки. Исследование in vitro: (а) Изображения клеток CD31+, окрашенных: Hoechst (синий) для идентификации клеточных ядер; CD34 FITC (зелёный) (Hoechst + CD34) составное изображение с использованием всех двух цветов. Все шкалы равны 100 м; (b–g) Эндотелиальные клетки CD31+ из лёгких предварительно культивировали в течение 5 дней, инкубировали с GLP-1 (10-7 М) или без GLP-1 (10-7 М) или pegGLP-1 (10-7 М) в течение 24 ч и затем метили Hoechst, сукцинимидиловым эфиром карбоксифлуоресцеина (CFSE) (b, e) CD34 FITC (c, f), АннексинVи 7-аминоактино- мицин D (7-AAD) (d, g) перед флуоресцентным микроскопическим анализом. (b) активность CFSE после культивирования клеток, выделенных из лёгкого интактных мышей; (c) уровень клеток CD34+ после культивирования клеток, выделенных из лёгкого интактных мышей; (d) количество клеток с апоптозом после культивирования клеток, выделенных из лёгкого интактныхмышей;(e)активностьCFSEпослекультивированияклеток,выделенныхизлёгкого мышей с MD и эмфиземой легких; (f) уровень клеток CD34+ после культивирования клеток, выделенныхизлегкогомышейсMDиэмфиземойлёгких;(g)количествоклетоксапоптозом после культивирования клеток, выделенных из лёгкого мышей с MD и эмфиземой легких. Результаты представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего. Достоверные различия * – с интактным контролем (по критерию Манна–Уитни (p < 0,05)).

238

Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/

Приложение

Рис. 17. Микрофотографии срезов лёгкого (среднее легочное поле), полученных от мы- шей-самок линии C57BL/6 интактного контроля (а, Intakt control), мышей с эмфиземой легких, вызванной введением эластазы (b, Lung emphysema) и мышей с эмфиземой легких в условияхвведенияТриамида(c,Lungemphysema+Treamid).Окраскагематоксилиномиэозином, ув. ×100. Препараты изготовлены на 21 сутки эксперимента. Содержание соединительной ткани в легких мышей в условиях эмфиземы на 3 (d), 14 (e) и 21 (f) сутки эксперимента. Результаты представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего. Достовер-

ные различия * – с группой «Intakt control» (р <0,05); ● –с группой «Lung emphysema» (р <0,05) (по критерию Манна–Уитни (p < 0,05)).

239

Хроническая обструктивная болезнь лёгких:

перспективы фармакологической регуляции стволовых клеток в клинике

Рис. 18. Средний линейный перехват (Mean linear intercept, Lm) у мышей-самок интактного контроля (Intakt control), мышей с эмфиземой лёгких (Lung emphysema), вызванной введением эластазы и мышей с эмфиземой лёгких в условиях введения Триамида (Lung emphysema+Treamid), для верхнего, среднего и нижнего лёгочного поля (a). Деструктивный индекс (Destructive index, DI) у мышей интактного контроля, мышей с эмфиземой лёгких, вызванной введением эластазы и мышей с эмфиземой лёгких, пролеченных Триамидом для верхнего, среднего и нижнего лёгочного поля (b). Количество капилляров (в 5 полях зрения) в верхнем, среднем и нижнем лёгочном поле у мышей интактного контроля, мышей с эмфиземой лёгких, вызванной введением эластазы и мышей с эмфиземой лёгких в условиях введения Триамида на 21 сутки эксперимента (c). Результаты представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего. Достоверные различия * – с интактным контролем; ● – с группой «Lung emphysema» (по критерию Манна–Уитни (p < 0,05)).

240

Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/