5 курс / Пульмонология и фтизиатрия / Лабораторная_служба_в_программах_борьбы_с_туберкулезом_ВОЗ_культуральное

КУЛЬТУРАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ

60

ЛАБОРАТОРНАЯ СЛУЖБА В ПРОГРАММАХ БОРЬБЫ С ТУБЕРКУЛЕЗОМ

Добавьте во флакон с культурой микобактерий 1 мл стерильной дистиллированной воды. При наличии сливного роста колоний проткните биомассу бактерий пастеровской пипеткой в нескольких местах, чтобы обеспечить контакт воды с питатель-

ной средой

Положите пробирку горизонтально, чтобы жидкость покрыла всю поверхность питательной среды

Оставьте на 30 минут для экстракции ниацина. Если колоний мало, время экстракции может быть увеличено

Поставьте пробирки в вертикальное положение на 5 минут, чтобы вода полностью

стекла на дно

Перенесите 0,5 мл экстракта в чистую пробирку с завинчивающейся крышкой

Добавьтепоследовательно 0,5 мл 4%-го раствора анилина и

0,5мл 10%-го раствора бромида цианогена

Закройте пробирку и контролируйте появление желтого окрашивания (обозначает положительный результат теста) в течение 5 минут. Желтое окрашивание появляется в виде кольца на границе соприкосновения двух реагентов, а если пробирку встряхнуть – в виде столбика жидкости желтого цвета

Добавьте 2–3 мл 4%-го раствора NaOH в каждую пробирку и затем выбросьте пробирки в контейнер для отработанной посуды

61

КУЛЬТУРАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ

Добавьте во флакон с культурой микобактерий стерильный изотонический раствор хлорида натрия. При наличии сливного роста колоний проткните биомассу бактерий пастеровской пипеткой в нескольких местах, чтобы обеспечить контакт воды с питательной средой

Положите пробирку горизонтально, чтобы жидкость покрыла всю поверхность питательной среды

Оставьте на 30 минут для экстракции ниацина. Время экстракции может быть увеличено, если колоний слишком мало

Поставьте пробирки в вертикальное положение на 5 минут, чтобы вода полностью стекла на дно. Перенесите 0,5 мл экстракта в чистую пробирку с завинчивающейся крышкой

62

ЛАБОРАТОРНАЯ СЛУЖБА В ПРОГРАММАХ БОРЬБЫ С ТУБЕРКУЛЕЗОМ

Поместитеполоску в пробирку

так, чтобы ее

идентификационный конец был

сверху(стрелка на полоске может

показывать, каким концом

следует вводить ее в пробирку) и

немедленно герметично закройте

пробирку. Не допускайте

попадания жидкости на среднюю часть полоски

Оставьте при комнатной температуре на 15–20 минут. Периодически слегка встряхивайте пробирку, но не переворачивайте ее

Контролируйте (лучше на белом фоне) появление желтого окрашивания на дне пробирки (желтый цвет означает положительный результат теста). Если желтое окрашивание появилось на самой полоске, выбросьте эту пробирку (в этом случае появление желтого окрашивания может быть обусловлено окислением химических веществ, особенно в верхней части полоски)

Нейтрализуйте полоски 10%-м раствором NaOH или выбросьте их в контейнер со щелочным дезинфектантом

63

КУЛЬТУРАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ

64

ЛАБОРАТОРНАЯ СЛУЖБА В ПРОГРАММАХ БОРЬБЫ С ТУБЕРКУЛЕЗОМ

Внесите 0,2 мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия в пробирку с завинчивающейся крышкой

С помощью бактериологической петли или лопатки суспендируйте в этом растворе четырехнедельную культуру микобактерий (используйте две петли/лопатки биомассы бактерий)

Добавьте 2 мл субстрата NaNO3

Хорошо встряхните и оставьте на 3 часа в водяной бане при температуре 37°С

1 капля соляной кислоты 2 капли сульфаниламида 2 капли N-нафтилэтилендиамина

Добавьте в следующем порядке:

1 каплю разведенной соляной кислоты (хорошо встряхните

пробирку); 2 капли 0,2%-го раствора

сульфаниламида;

2 капли 0,1%-го раствора N-нафтилэтилендиамина

Немедленно проконтролируйте появление розового или красного окрашивания, сравнив его интенсивность с цветовым стандартом

65

КУЛЬТУРАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ

66

ЛАБОРАТОРНАЯ СЛУЖБА В ПРОГРАММАХ БОРЬБЫ С ТУБЕРКУЛЕЗОМ

67

КУЛЬТУРАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ

Внесите 0,2 мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия в пробирку с завинчивающейся крышкой

С помощью бактериологической петли или лопатки суспендируйте в этом растворе четырехнедельную культуру микобактерий (используйте две петли/лопатки биомассы бактерий)

Добавьте 2 мл субстрата NaNO3

Хорошо встряхните и оставьте на 3 часа в водяной бане при температуре 37°С

Добавьте в пробирку небольшое количество кристаллического реагента (на кончике лопаточки). Количество реагента не имеет особого значения

Немедленно проконтролируйте появление розового или красного окрашивания, сравнив его интен- сивность с цветовым стандартом

Модифицированный метод с использованием бумажных полосок

В настоящее время для определения способности бактерий восстанавливать нитраты можно использовать коммерческие бумажные полоски. При использовании данной модификации нитратредуктазного теста надежные результаты получаются в тех случаях, когда микобактерии интенсивно редуцируют нитраты (например, M. tuberculosis). Поэтому при идентификации микобактерий туберкулеза этот метод дает вполне приемлемые результаты и позволяет сократить трудозатраты, хотя стоимость бумажных полосок значительно выше.

68

ЛАБОРАТОРНАЯ СЛУЖБА В ПРОГРАММАХ БОРЬБЫ С ТУБЕРКУЛЕЗОМ

Внесите 1 мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия в пробирку с завинчивающейся крышкой

С помощью бактериологической петли или лопатки суспендируйте в этом растворе четырехнедельную культуру микобактерий (используйте две петли/лопатки биомассы бактерий)

С помощью стерильного пинцета

аккуратновнесите в пробирку

бумажную полоску для нитратре-

дуктазного теста; при этом не

допускайте увлажнения полоски

каплями жидкости на стенках пробирки

69