5 курс / Пульмонология и фтизиатрия / Лабораторная_служба_в_программах_борьбы_с_туберкулезом_ВОЗ_культуральное

ЛАБОРАТОРНАЯ СЛУЖБА В ПРОГРАММАХ БОРЬБЫ С ТУБЕРКУЛЕЗОМ

2

2 . 1

11

ЛАБОРАТОРНАЯ СЛУЖБА В ПРОГРАММАХ БОРЬБЫ С ТУБЕРКУЛЕЗОМ

2 . 2

13

ОРГАНИЗАЦИЯ РАБОТЫ ЛАБОРАТОРИИ И ОБОРУДОВАНИЕ

Дезинфицирующий раствор

2 . 3

2.3.1

14

ЛАБОРАТОРНАЯ СЛУЖБА В ПРОГРАММАХ БОРЬБЫ С ТУБЕРКУЛЕЗОМ

2.3.2

17

ОРГАНИЗАЦИЯ РАБОТЫ ЛАБОРАТОРИИ И ОБОРУДОВАНИЕ

Скорость вращения ротора, необходимую для получения требующейся ОСЦ, можно определить по следующей формуле:

ОСЦ

об/мин = 1000

1.12 Rmax

Если величина ОСЦ будет недостаточной, многие микобактерии после центрифугирования останутся в суспензии и будут удалены вместе с надосадочной жидкостью. Для получения оптимального результата при выделении культуры микобактерий необходимо добиться осаждения 95% бактериальных клеток. Для этого требуется использовать ОСЦ, равную 3000 g. Многие старые центрифуги, до сих пор используемые в бактериологических лабораториях, имеют не более 2300–3000 об/мин, т. е. позволяют получить ОСЦ, равную всего лишь 1500–2000 g. Большинство лаборантов, применяющих такие центрифуги, обрабатывают исследуемые пробы в течение 15 минут, что позволяет добиться осаждения не более 75–84% бактерий.

В зависимости от типа ротора в нерефрижераторной центрифуге и скорости его вращения температура воздуха в центрифуге и соответственно температура исследуемого образца может повышаться на 4–18°С. При этом температура образца в угловом роторе меняется незначительно, однако температура содержимого пробирки в крестовине с отклоняющимися центрифужными стаканами может превышать 40°С, если центрифуга используется повторно 5 раз и более. В этом случае, даже если время центрифугирования образца не превышает 15 минут, количество погибающих бактерий может возрасти с 13% при комнатной температуре 20°С до 22–30% при увеличении температуры до 30–40°С. Поэтому чрезвычайно важно центрифугировать исследуемые образцы в течение фиксированного времени (15 минут) и использовать высокую ОСЦ (3000 g) для достижения 95% седиментации. Применение угловых роторов позволяет свести до минимума нагревание образца, обусловленное сопротивлением воздуха.

Под воздействием центробежной силы стеклянные пробирки могут разрушиться. При этом происходит разбрызгивание жидкости и образование аэрозоля. Поэтому при обработке потенциально инфекционного материала необходимо использовать пластиковые пробирки с завинчивающимися пробками.

Ротор центрифуги перед началом работы должен быть хорошо уравновешен. Если этого не сделать, может возникнуть сильная вибрация, которая приведет к разрушению ротора. Если проводится исследование одной пробы, то с противоположной стороны ротора должна быть помещена аналогичная пробирка, имеющая такую же массу. Проще всего это сделать, если на центрифужных пробирках имеются метки, указывающие одинаковые объемы жидкости. В качестве дополнительной меры предосторожности можно использовать такой прием: в уравновешивающую пробирку наливают не воду, а 70% этиловый спирт; это снижает риск лабораторного заражения в случае повреждения пробирки.

Никогда не прикасайтесь к ротору, который еще продолжает вращаться, так как это не только может послужить причиной травмы, но и привести к ресуспендированию осадка из-за резкой остановки пробирки. Некоторые центрифуги оборудованы специальным тормозом, который обеспечивает плавную остановку ротора.

2.3.3Термостат с температурой 35–37°С

Инкубацию посевов производят при температуре 35–37°С в течение 8 недель. Существуют лабораторные термостаты различных размеров. Как правило, лучше всего приобрести самую большую модель, какую можно без проблем разместить в лаборатории и на какую имеются средства. В термостатах с маленьким объемом при откры-

18

ЛАБОРАТОРНАЯ СЛУЖБА В ПРОГРАММАХ БОРЬБЫ С ТУБЕРКУЛЕЗОМ

2.3.4

19