5 курс / Пульмонология и фтизиатрия / Культуральные_методы_диагностики_туберкулеза

Суспензию переносят в стерильную пробирку, диаметр которой соответствует диаметру пробирки с оптическим стандартом мутности 5 ЕД. Затем микобактериальную суспензию титруют по стандарту мутности № 5 ГНИИСК (500 млн микробных клеток/мл, см. Приложение 6). Использованную пипетку опускают в емкость с дезинфицирующим раствором.

По окончании процедуры растирания и стандартизации по оптическому стандарту мутности № 5 всех взятых в опыт культур переходят к дальнейшему разведению этих суспензий.

Каждую отстандартизованную по оптическому стандарту мутности № 5 суспензию разводят в 10 раз стерильным физиологическим раствором. Для этого следует заранее приготовить ряд пробирок по числу исследуемых культур микобактерий, подписать на них номера культур и расставить их в штативе в порядке номеров регистрации. В каждую пробирку налить по 9 мл стерильного физиологического раствора.

При разведении приготовленных суспензий в каждую из подготовленных пробирок с физраствором следует внести стерильной пипеткой по 1 мл приготовленной по стандарту № 5 суспензии микобактерий соответствующего номера. Посев на среды с лекарственными препаратами производят из этих разведенных суспензий (суспензия, приготовленная по стандарту № 5 и разведенная в 10 раз).

Засев микобактериальной суспензии

Из пробирки с разведенной 1:10 микобактериальной суспензией набрать в мерную пипетку объемом 1–2 мл бактериальную суспензию и произвести засев по 0,2 мл (10 млн микробных клеток) в пробирки с контрольной средой Левенштейна–Йенсе- на и пробирки, содержащие ПТП в определенных концентрациях. Суспензию вносят на верхнюю треть косяка во все пробирки с питательной средой, приготовленной для определения ЛЧ культуры данного номера, тщательно сверяя номер культу-

ры засеваемой суспензии с номерами, написанными на пробирках. Во избежание ошибок все пробирки, подготовленные для засева одной культуры, следует расставлять в одном ряду штатива.

Каждую засеянную суспензией пробирку закрывают ватно-марлевой, резиновой или недренированной силиконовой пробкой и ставят в вертикальный штатив, с тем чтобы за время постановки опыта суспензия равномерно стекала по поверхности косяка среды к дну пробирки.

По завершении засева всех суспензий засеянные пробирки перемещают в горизонтальные штативы и помещают для инкубирования в термостат при температуре 37 °С. При этом поверхность косяка питательной среды должна находиться в горизонтальной плоскости, а наклон штатива должен исключить смачивание пробки материалом засева; засеянная суспензия должна равномерно покрывать всю поверхность косяка среды.

Через 2–3 суток можно перевести пробирки в вертикальные штативы, однако эта процедура не носит обязательного характера, так же, как и замена ватно-марлевых пробок на резиновые или силиконовые. Это объясняется тем, что при постановке опытов по определению ЛЧ продолжительность инкубации посевов при 37 °С, как правило, не превышает 3–4 недель, и в течение этого периода среда сохраняет свою влажность.

ВНИМАНИЕ! При исследовании лекарственной чувствительности нескольких штаммов МБТ на всех пробирках для приготовления микобактериальной суспензии

и пробирках с плотной питательной средой должны быть заранее надписаны номера культур микобактерий, соответствующие лабораторному регистрационному журналу. Во избежание контаминации для каждой культуры должна быть заготовлена своя стерильная пробирка с физраствором. Не используйте физраствор из одного сосуда

для разведения суспензий различных культур!

Оценка результатов определения лекарственной устойчивости

Оценку результатов определения лекарственной устойчивости микобактерий производят через 3 недели инкубации в термостате. При плохом росте МБТ на контрольной питательной среде следует выждать еще 1–2 недели до получения выраженного роста в контроле, после чего выдают окончательный ответ.

При использовании метода абсолютных концентраций культура МБТ счита­ ется устойчивой, если на питательной среде с определенным препаратом вырас­ тает 20 и более колоний микроорганизмов при обильном росте на контрольной пробирке (без препарата).

Использование дополнительных концентраций препаратов

Кроме критических концентраций при использовании метода абсолютных концентраций в ряде случаев целесообразно использовать и дополнительные концентрации ПТП для определения порога устойчивости. Это дает возможность клиницисту варьировать дозировки и лекарственные режимы за счет повышения дозы, методов введения и использования аддитивных и синергидных свойств различных комбинаций ПТП. Например, устойчивость МБТ к изониазиду в ряде случаев может быть преодолена путем применения повышенных доз и внутривенного введения противотуберкулезного препарата.

Таким образом, при диагностической необходимости по запросу клинициста возможно проводить исследование лекарственной чувствительности микобактерий к следующим дополнительным концентрациям противотуберкулезных препаратов:

изониазид – 10 мкг/мл;

этамбутол – 5 мкг/мл.

2.7.6. Альтернативные методы исследования лекарственной чувствительности микобактерий

Кроме непрямого метода абсолютных концентраций для определения ЛЧ МБТ мо-

гут быть использованы альтернативные методы:

метод пропорций;

метод коэффициента устойчивости;

методы с использованием автоматизированных и полуавтоматизированных систем: BACTEC 460ТВ; BBL MGIT и BACTEC MGIT 960 (BD); MB/BacT (BacT/ Alert 3D);

ускоренный биохимический метод с использованием реактива Грисса;

прямой метод абсолютных концентраций.

132 Культуральные методы диагностики туберкулеза

Из классических культуральных методов наиболее известны метод пропорций и метод коэффициента резистентности, которые позволяют установить, какая часть микобактериальной популяции в процентном отношении является устойчивой к данному препарату.

Исследование лекарственной чувствительности микобактерий методом пропорций

В отличие от непрямого метода абсолютных концентраций при исследовании ЛЧ микобактерий методом пропорций микобактериальную суспензию готовят, исходя не из 5 мг/мл, а 1 мг/мл полувлажного веса культуры.

Метод приготовления суспензии тот же, что и для метода абсолютных концентраций. Приготовленную микобактериальную суспензию разводят до концентрации 104 и 106 и высевают суспензию в двух разведениях по 0,2 мл на пробирки с контрольной питательной средой Левенштейна–Йенсена и с противотуберкулезными препаратами.

Культура микобактерий считается устойчивой, если на среде с ПТП первого ряда вырастает более 1% КОЕ по сравнению с количеством КОЕ на контрольной питательной среде (критерий устойчивости). Критерием устойчивости для препаратов второго ряда является 10% содержание устойчивых бактерий в исследуемой популяции.

Метод пропорций более трудозатратный по сравнению с методом абсолютных концентраций. Кроме того, манипуляции с разведением микобактериальной суспензии повышают риск внутрилабораторного инфицирования персонала.

Исследование лекарственной чувствительности микобактерий методом коэффициента резистентности

Сущность метода заключается в определении минимальной ингибирующей концентрации (МИК) противотуберкулезных препаратов для клинических штаммов микобактерий и соотношения МИК тех же препаратов для заведомо чувствительного лабораторного штамма микобактерий (как правило, H37Rv). Это самый трудозатратный и дорогостоящий метод, так как требует использования большого количества пробирок с питательной средой, поэтому он применяется в основном для научных исследований.

2.7.7. Ускоренный метод определения лекарственной чувствительности микобактерий туберкулеза с помощью реактива Грисса

Краткая характеристика метода

Существенным недостатком определения ЛЧ МБТ методом абсолютных концентраций, который в настоящее время используется в большинстве бактериологических лабораторий противотуберкулезных учреждений России, являются длительные сроки исследования.

Использование жидких сред и автоматизированных систем позволяет заметно сократить сроки исследования ЛЧ МБТ, однако автоматические анализаторы и расходные материалы к ним являются дорогостоящими и для практических учреждений здравоохранения не всегда доступны.

В ЦНИИТ РАМН был разработан ускоренный метод определения ЛЧ МБТ на плотных питательных средах, который позволяет сократить сроки получения результатов на среде Левенштейна–Йенсена до 8–12 суток за счет использования биохимической реакции, выявляющей ферментативную активность жизнеспособных микобактерий при отсутствии видимого роста культуры. Метод основан на определении нитратредуктазной активности микобактерий туберкулеза с помощью реактива Грисса. При добавлении последнего в пробирку, где имеется рост микобактерий туберкулеза, происходит нитратредуктазная реакция, приводящая к изменению цвета реактива Грисса и питательной среды с конденсатом.

Предлагаемый метод является модификацией традиционного метода абсолютных концентраций и наряду с ним может быть рекомендован к применению во всех бактериологических лабораториях противотуберкулезных учреждений России. Ускоренный метод Грисса может использоваться выборочно, в частности для тех случаев, когда врачу необходимо срочно получить результаты ЛЧ МБТ (например, для больных с остропрогрессирующими формами туберкулеза).

Процент совпадения результатов при использовании традиционного и ускоренного методов определения ЛЧ МБТ составляет (по некоторым данным) 96,6%. Частота и спектр лекарственной устойчивости МБТ, определенные традиционным и ускоренным методами, не имеют достоверных различий. Таким образом, ускоренный метод определения ЛЧ МБТ является достаточно точным и не уступает по чувствительности традиционному методу абсолютных концентраций, обеспечивая полноценное определение спектра лекарственной устойчивости. Кроме того, использование предлагаемого ускоренного метода является экономически выгодным, поскольку позволяет сократить стоимость анализа, как по сравнению с традиционным методом абсолютных концентраций, так и, безусловно, с методами, использующими автоматизированные системы.

Описание метода

В основе метода лежит использование нитратредуктазной активности микобактерий туберкулеза в качестве критерия их роста на плотных яичных средах с небольшим количеством конденсата.

Культуры микобактерий туберкулеза, обладающие положительной нитратредуктазной активностью, характеризуются способностью редуцировать нитраты в нитриты. В качестве индикатора разложения нитрата калия или нитрата натрия используется стандартный реактив Грисса в виде 7,5% водного раствора. При закапывании реактива Грисса в пробирку, где имеется рост микобактерий туберкулеза, происходит его взаимодействие с образовавшимися нитритами, и поверхность среды и конденсат в пробирке окрашиваются в ржаво-красный цвет. Таким образом, использование биохимической реакции с реактивом Грисса позволяет зафиксировать размножение микобактерий туберкулеза при отсутствии видимого роста культуры.

Данный метод пригоден для определения ЛЧ микобактерий туберкулеза человеческого вида, имеющих в своем составе фермент нитратредуктазу. В связи с тем что микобактерии бычьего вида этим методом определить невозможно, в состав диагностического ряда, используемого для определения ЛЧ, включена пробирка с TCH (тио- фен-2-карбоксил-гидразид) для дифференциации M. tuberculosis от M. bovis. Отсутствие роста на среде с ТСН и отрицательная нитратредуктазная реакция характеризу-

134 Культуральные методы диагностики туберкулеза

ют штаммы M. bovis. Рост на среде с ТСН и положительная нитратредуктазная реакция позволяют идентифицировать микобактерии как M. tuberculosis.

Для определения ЛЧ МБТ ускоренным методом используется плотная яичная среда Левенштейна–Йенсена с добавлением нитрата калия или нитрата натрия в количестве 1 г на 1 литр готовой среды. Среду Левенштейна–Йенсена готовят в соответствии со стандартной прописью и способом приготовления. В готовую к свертыванию среду вносят нитрат калия или натрия из расчета 100 мг на 100 мл среды. Для повышения гарантии стерильности питательных сред указанное количество нитрата может быть введено в объеме 1 мл 10% раствора, предварительно прокипяченного 5 минут.

Комплект для определения ЛЧ МБТ ускоренным методом состоит из 2 контрольных пробирок, не содержащих препаратов, ряда пробирок с противотуберкулезными препаратами, а также одной пробирки с TCH и одной пробирки с салициловокислым натрием.

Для определения ЛЧ МБТ ускоренным методом в каждую из пробирок комплекта перед посевом вносят по 0,2–0,3 мл физиологического раствора или любой жидкой питательной среды (желательно после этого выдержать пробирки в течение суток в горизонтальном положении). Затем в каждую пробирку комплекта засевают по 0,2 мл стандартной суспензии клинического изолята микобактерий туберкулеза и помещают пробирки в термостат для инкубации.

Для ускоренного определения ЛЧ МБТ используют реактив Грисса в двух модификациях:

1)7,5% раствор стандартного реактива Грисса, выпускаемого промышленно. Он представляет собой смесь 1-нафтиламина (α-нафтиламина) (10 г) с сульфаниловой кислотой (100 г) и винной кислотой (890 г). 7,5% раствор реактива Грисса готовится на стерильной дистиллированной воде и может храниться в холодильнике, в посуде из темного стекла, до 2 недель.

2)Реактив Грисса готовят в лаборатории на основе 5-нормального раствора ледяной уксусной кислоты (143 мл ледяной уксусной кислоты довести дистиллированной водой до 500 мл). Далее приготовить растворы А и Б.

Раствор А: 2 г сульфаниловой кислоты растворить в 250 мл 5Н уксусной кислоты. Раствор Б: 1,25 г 1-нафтиламина (α-нафтиламина) растворить в 250 мл 5Н уксусной кислоты.

Растворы А и Б хранить в посуде из темного стекла в холодильнике 1 год (или до появления осадка). Перед употреблением растворы А и Б смешиваются в рав-

ных объемах. Полученный реактив Грисса используют сразу.

Ускоренное определение ЛЧ МБТ на плотной питательной среде Левенштейна– Йенсена проводят на 8–12-е сутки от момента посева.

В одну из контрольных пробирок от каждой выделенной культуры закапывают с помощью медицинской капельницы 2–3 капли 7,5% раствора Грисса. При появлении в контрольной пробирке в течение последующих 1–3 минут красного или ржаво-красно- го окрашивания поверхности среды и конденсата, а также изменении цвета реактива в пробирке от слабо-красного (розоватого) до ржаво-красного, реактив Грисса закапывают в опытные пробирки с препаратами и салициловокислым натрием и учитывают результат нитратредуктазной реакции по окрашиванию поверхности среды и жидкости.

При наличии роста микобактерий туберкулеза в пробирке с препаратом происходит изменение окраски среды и реактива, которая варьирует от малинового до бурого. При отсутствии роста микобактерий туберкулеза реактив Грисса не меняет цвет, а поверхность среды приобретает ярко-синий цвет или слабо-фиолетовое окрашивание либо не меняет окраски (рис. 38).

Микобактерии считаются устойчивыми к испытуемому препарату, если интенсивность окрашивания реактива и среды в пробирке с препаратом соответствует интенсивности окраски в контрольной пробирке. Если среда и реактив в пробирке с препаратом не меняют окраски либо имеют слабо-розовое окрашивание, то микобактерии считаются чувствительными к данному препарату. В качестве отрицательного контроля для микобактерий туберкулеза служит пробирка с салициловокислым натрием. В качестве положительного контроля для микобактерий туберкулеза служит пробирка с ТСН, которая окрашивается так же, как и контрольная, не содержащая препаратов.

Штамм МБТ, устойчивый ко всем препаратам

Штамм МБТ, чувствительный ко всем препаратам

Штамм МБТ, устойчивый к RIF

Рис. 38 Тестирование ЛЧ МБТ с помощью реактива Грисса

Если на 8–12-й день от момента посева (первое тестирование) в контрольной пробирке отсутствует реакция с раствором Грисса, то проводят повторное закапывание реактива во вторую контрольную пробирку еще через 5 дней культивирования от момента первого тестирования. При повторной отрицательной реакции в контрольной пробирке определение ЛУ МБТ проводят обычным методом (по видимому росту) в установленные сроки.

Отсутствие нитратредуктазной активности у некоторых исследуемых культур может объясняться их замедленными ростовыми свойствами и низкой нитратредуктазной активностью, которая определяется только при повторном тестировании (на 13– 17-е сутки от момента посева культуры).

1 6 Культуральные методы диагностики туберкулеза

В процессе определения ЛУ МБТ ускоренным методом проводят также первичную идентификацию выделенных культур. Для дифференциации микобактерий туберкулеза человеческого и бычьего видов от других микобактерий используется среда с салициловокислым натрием. Среда с этим препаратом ингибирует рост M. tuberculosis и M. bovis. Наличие роста на этой среде характерно для атипичных (нетуберкулезных) микобактерий. Для дифференциации M. tuberculosis от M. bovis используют комбинированную среду с ТСН и нитратом калия или нитратом натрия. M. tuberculosis в отличие от M. bovis растет на среде с ТСН. Кроме того, присутствие в среде нитрата позволяет с помощью реактива Грисса провести определение нитратредуктазной активности, свойственной M. tuberculosis, но не M. bovis.

Использование предлагаемого метода определения ЛЧ МБТ позволяет приблизительно в 2,5 раза сократить сроки получения результатов. Ускоренный метод прост в выполнении, не требует дополнительных сред и дорогостоящих реактивов, доступен для любой микробиологической лаборатории и сокращает время проведения анализа до 8–12 суток вместо 21–28 суток, как при использовании традиционного метода абсолютных концентраций, что позволяет врачу своевременно назначить рациональный режим химиотерапии. Кроме того, параллельно, предлагаемый метод позволяет провести первичную идентификацию между микобактериями человеческого и бычьего видов и атипичными (нетуберкулезными) микобактериями.

2.7.8. Исследование лекарственной чувствительности микобактерий прямым методом абсолютных концентраций

Основным недостатком традиционных культуральных методов определения ЛЧ МБТ, таких, как непрямой метод абсолютных концентраций и альтернативные методы (пропорций и коэффициента устойчивости), является их чрезвычайная длительность. Результаты исследования ЛЧ выросшей культуры МБТ учитываются через 3– 4 недели инкубации в термостате, поэтому необходимая коррекция химиотерапии может быть проведена в лучшем случае лишь через 2–2,5 месяца от момента поступления в лабораторию диагностического материала.

Для ускорения исследований может быть использован прямой метод абсолют­ ных концентраций. При постановке данного метода производится прямой посев осадка обработанного детергентами диагностического материала одновременно на контрольную питательную среду и среды с соответствующими противотуберкулезными препаратами. Параллельно производится посев материала на стандартные питательные среды (с целью получения культуры для постановки традиционного непрямого метода абсолютных концентраций).

Культура микобактерий считается устойчивой, как при непрямом методе абсолютных концентраций, если на среде с ПТП вырастает 20 и более колоний.

Преимущества данного метода заключаются в сокращении времени проведения исследования, расходных материалов (в два раза) и трудозатрат.

Однако прямой метод абсолютных концентраций может быть использован только для исследования бактериоскопически положительного материала с массивностью бактериовыделения не менее ++. В этом случае повышается риск контаминации. Кроме того, следует учитывать, что при этом методе производится недозированный посев, что может затруднить интерпретацию результатов. Поэтому в ряде случаев

полученные результаты могут оказаться недостоверными. В сомнительных случаях рекомендуется повторить исследование лекарственной чувствительности со штаммом микобактерий, выделенным от больного.

Метод носит предварительный характер и увеличивает стоимость исследования ЛЧ МБТ в целом.

2.7.9. Контроль качества исследования лекарственной чувствительности микобактерий

Для обеспечения достоверности получаемых результатов необходимо проводить контроль качества выполняемых лабораторией тестов по исследованию лекарственной чувствительности микобактерий.

Внутрилабораторный контроль качества сред для определения ЛЧ методом абсолютных концентраций

Необходимо проверять качество каждой партии сред для определения лекарственной чувствительности микобактерий.

С этой целью каждая партия вновь приготовленной питательной среды должна быть проверена на стерильность (инкубация в термостате).

Также для каждой партии среды при тестировании ЛЧ клинических образцов необходимо одновременно провести тест на чувствительность стандартного штамма M. tuberculosis H37Rv ко всем исследуемым противотуберкулезным препаратам. Если среда с препаратами приготовлена правильно, то контрольная культура не должна расти при тех концентрациях препаратов, при которых не растут чувствительные к данному препарату штаммы. Появление роста контрольного штамма в пробирке с препаратом указывает на то, что при приготовлении среды с препаратом была допущена ошибка, или на то, что неправильно приготовлена бактериальная суспензия.

Для более полной оценки качества сред рекомендуется при постановке тестов на ЛЧ для клинических изолятов наряду с тестированием стандартного чувствительного штамма провести тест на чувствительность со стандартными штаммами, устойчивыми к тем препаратам, к которым должна быть установлена чувствительность клинических образцов.

При отсутствии в лаборатории стандартных (коллекционных) штаммов лаборатория может использовать выделенные от пациентов штаммы, которые в многократных исследованиях подтверждают свою чувствительность и/или устойчивость.

Регистрация результатов ВЛК каждой партии сред должна производиться в журнале приготовления сред.

Внутрилабораторный контроль качества включает в себя также регулярную проверку используемого лабораторного оборудования – АСПС, термостатов, рН-метра, автоматических дозаторов, стандартов мутности и др.

Внешняя оценка качества

Внешняя оценка качества исследований ЛЧ обеспечивается внешней лабораторией, которая, например, является членом супранациональной лабораторной сети.

138 Культуральные методы диагностики туберкулеза

В РФ, начиная с 2005 г., в рамках Федеральной системы внешней оценки качества совместно с супранациональными лабораториями ВОЗ проводится независимая оценка качества исследований ЛЧ с использованием наборов контрольных образцов (международные панели из 20 тест-штаммов для профессионального тестирования).

2.8. Регистрация бактериологических исследований

иих результатов

Вотличие от исследований методом прямой микроскопии при регистрации бак­ териологических исследований каждому исследованию диагностического материа­ ла присваивается индивидуальный номер.

Все поступившие в лабораторию образцы (за исключением выбракованных) должны быть зарегистрированы в Журнале регистрации исследований. Исследованию поступившего образца должен быть присвоен лабораторный номер. Нумерация исследований должна начинаться в первый рабочий день года и продолжаться непрерывно в течение всего года. Регистрационный номер, присвоенный образцу, должен быть нанесен на контейнер с образцом и сопровождать его на всех этапах бактериологического исследования: на центрифужной пробирке, в которой образец центрифугируют после деконтаминации, на пробирках с ростовой средой, на предметных стеклах, на которые наносится материал для микроскопии перед посевом и для подтверждения принадлежности выросшей культуры к кислотоустойчивым бактериям (окраска по Цилю–Нильсену).

ВЖурнал регистрации исследований из направления вносятся данные о пациенте. Необходимо наиболее полно внести эти данные, поскольку лабораторный журнал может стать единственным источником данных о бациллярном больном туберкулезом. В некоторых лабораториях дополнительно ведется журнал выделенных культур, в который вносят все данные о пробах, из которых были выделены культуры микобактерий.

Данные о враче или медицинском учреждении необходимы для того, чтобы: 1) передать результаты исследования направившему материал врачу;

2) в случае выбраковки результатов (пророст, неудовлетворительная деконтаминация, прочее) сообщить о случившемся лечащему врачу и совместно принять решение о целесообразности повторного исследования.

Вграфе «Диагностический материал» указывается вид диагностического материала в соответствии с направлением.

Вграфе «Цель исследования» отмечают галочкой случаи ранее не леченных (н/л)

иранее леченных (р/л) больных в соответствии с отметкой в направлении. В случае

контроля химиотерапии в соответствующих клетках формы (н/л или р/л) указывают регистрационный номер больного (из направления).

Данные о виде диагностического материала и целях исследования необходимы для проведения ретроспективного анализа эффективности работы лаборатории (см. раздел «Обеспечение качества исследований»).

В графе «Результат микроскопии» указывают результат микроскопии препаратов из диагностического материала (прямая микроскопия) или из осадка деконтаминированного материала после центрифугирования в соответствии с полуколичествен-

ной градацией (см. раздел 3.7.1 учебного пособия «Выявление туберкулеза методом микроскопии» и раздел 5.3 учебного пособия «Люминесцентная микроскопия»).

В графе регистрации роста указывается интенсивность роста для каждой из использованных сред по полуколичественной шкале.

«Интенсивность роста»:

(1+) 1 – 20 КОЕ;

(2+) 21 – 100 КОЕ;

(3+) > 100 КОЕ.

Вжурнале необходимо также зарегистрировать время появления роста или, в случае отсутствия роста, даты выдачи заключения об этом. Прежде чем дать отрицательный результат, необходимо убедиться в отсутствии роста очень медленно растущих микобактерий после 10 недель культивирования.

Впримере Журнала регистрации, приведенном выше (форма 1), журнал располагается на развороте страниц.

Внекоторых лабораториях дополнительно ведется журнал выделенных культур, в который вносятся только те номера исследований, которые дали положительные результаты.

Еслилабораториясаманепроводитвидовуюидентификациюиисследованиялекарственной чувствительности выделенных культур, а пересылает их в лабораторию более высокого уровня, результаты исследования этой лаборатории должны быть внесены в графу «Комментарии» с указанием лаборатории, выдавшей результаты исследований.

Исследования лекарственной чувствительности и результаты видовой идентификации выделенных культур регистрируются в специальном журнале (форма 2). Нумерация исследований в этом журнале ведется с начала каждого календарного года непрерывно.

Порядковый номер регистрации исследования из Журнала регистрации исследований лекарственной чувствительности наносится на пробирки для определения лекарственной чувствительности и/или для видовой идентификации. В журнал также вносится и регистрационный номер бактериологического исследования из Журнала регистрации бактериологических исследований, для того чтобы установить соответствие между исследованием лекарственной чувствительности и/или видовой идентификации и образца от пациента.

Вслучае если лаборатория получает культуры, выделенные в других лабораториях, в журнал вносится регистрационный номер культуры, присвоенный ей выделившей ее лабораторией, с индексом, позволяющим однозначно идентифицировать лабораторию, направившую культуру для исследования.

Для однозначного определения пациента, из диагностического материала которого выделена исследуемая культура, целесообразно переписать из Журнала регистрации бактериологических исследований в Журнал регистрации исследований лекарственной чувствительности его фамилию, имя, отчество и адрес.

Всоответствующие графы лаборатория вносит название применяющихся для дифференциации методов. В журнале регистрации исследования лекарственной чувствительности должны быть приведены названия противотуберкулезных препаратов и их концентрации, к которой определяется чувствительность выделенной культуры. В ячейках, соответствующих исследуемой культуре и препарату, указывают количество колоний, выросших на пробирке с препаратом. Интенсивность роста

всоответствии с полуколичественной шкалой указывают в графе «Контроль».

140 Культуральные методы диагностики туберкулеза