2 курс / Нормальная физиология / Высшая_Нервная_Деятельность_и_физиология_поведения
.pdf
МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ МОЗГА in vitro
Методы молекулярно-биологические:
экспрессия генов: гибридизация in situ; ПЦР в реальном времени
экспрессия белков: иммуногистохимия; вестерн-блоттинг.
Экспрессия ТГ и ГР в синем пятне ствола мозга
Semi-quantitative RT-PCR
Gene X beta-actin
Real-time RT-PCR
Gene X |
beta-actin |
Одновременный анализ множества генов:
1.Микрочипы
2.RNA-sequencing (Illumina, Solid) (NGS – Next Generation Sequencing)
Модификации экспрессии генов
Подавление экспрессии |
|
Усиление экспрессии |
|
|
(Оverexpression) |
|
|
|
Постоянное Временное (Нокаут)
РНК-интерференция (Нокдаун)
Условный нокаут
(Conditional Knockout)
Снижение функции гена/белка |
|
Активация функции гена/белка |
|
|
|
Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/
СОЗДАНИЕ НОКАУТА
Механизм РНК-интерференции
siRNA
(Нобелевская премия 2006 К. Файер, Е. Мелло)
RNA-Induced
Silencing Complex
Блокировка транскрипции и =>трансляции
Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/
Inhibition of α2А-АRs expression by RNA interference in vivo in the brain of 5-day old rats
|
|
SALINE (100%) |
|
|
|
|
dsRNA - UNRELATED |
|
|
|
|
|
|
|
% |
|
siRNA |
* |
- p<0.05 |
|
||||
|
|
|||
|
|
|
|
100 |
|
|
|
|
|
|
|
* |
|
|
|
* |
|
|
* |
Behavior of adult |
male rats in elevated |
|
* |
|
plus-maze after knock-down of brain |
||
50 |
|
|
|||
|
|
2A-ARs during neonatal life |
|||
|
|
|
|
||
|
|
|
|
Intact |
|
|
|
|
|
Saline |
|
0 |
|
|
150 |
Unrelated ODN |
15 |
|
|
|
|||
Brainstem |
Cortex |
Brainstem |
Cortex |
Antisense ODN |
|
mRNA
Receptors
Seconds
100 |
Numbers |
|
10 |
50 |
5 |
0 Time in the open arms |
Exploratory head deaps |
Shishkina et al., 2004
CRE-LoxP system
Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/
Brainbow
Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/
ОПТОГЕНЕТИКА |
«Одна из основных задач науки – |
|
измерить то, что измеримо, |
|
и сделать измеримым то, что |
|
ещё не измерено» |
|
Г. Галилей |
«..Оптогенетика -..это подарок Бога нейрофизиологам»
(Р. Десемон, директор Института мозга, МТИ)
Карл Диссерот (в центре)
с К. Шенойем и Д. Хендерсоном, Стэнфорд, Калифорния
Нейроны головного мозга; оранжевым окрашены ядра клеток,
синим — аксональные отростки (Фото Thomas Deerinck, NCMIR.)
|
РОДОПСИН |
|
|
Открытие родопсинов: |
|
|
|
|
1971 - бактериальный |
каннало- |
гало- |
бактерио- |
GPCR |
1977 - галородопсин |
|
- |
|
|
2002 - каналородопсин |
Na+ |
Cl- |
H+ |
|
|
|
|
|||
|
|
|
|
2005 – начало Оптогенетики |
Gq, i, s |
(Nature Methods, 2010) |
Число публикаций
2012 187
2013 347
2014 413
2015 878
2016 926
Рекомендовано к изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/