2 курс / Микробиология 1 кафедра / Доп. материалы / Диагностика_инфекций,_передаваемых_половым_путём_Хворик_Д_Ф

51

—проведение амплификации;

—детекция и учет продуктов амплификации. Технология проведения этапов анализа описана в соответствующих инструкциях и рекомендациях производителей тест-систем.

Организацию работ на всех этапах, а также обеззараживание проб необходимо проводить в соответствии с Инструкцией МЗ РБ «Организация работ в лабораториях, использующих метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)» per. № 090-1008 от 13.11.2008 г.

Учет и оценка Результаты амплификации анализируют с помощью: результатов гель-электрофореза, флуоресцентного ПЦР детектора

или с использованием амплификатора с детекцией продуктов амплификации в режиме реального времени. Проведение учета и оценки полученных результатов осуществляется согласно инструкциям производителей тест-систем.

52

выполнение требований хранения и доставки материала в лабораторию;

выполнение требований маркировки проб и соответствия маркировки пробы маркировке направления;

контроль реагентов (внешнее состояние, срок годности), условия и сроки хранения;

качество лабораторной посуды.

Мероприятия аналитического этапа:

включение официально зарегистрированных контрольных материалов;

соблюдение технологии выполнения процедуры в соответствии с инструкцией производителя тест-систем;

учет результатов с контрольным материалом и испытуемым образцом в соответствии с официально признанными критериями.

Внутренний контрольный образец, добавляемый на стадии выделения нуклеиновой кислоты, позволяет судить о наличии в пробах веществ, ингибирующих ПЦР, а также о качестве пробоподготовки.

Технология проведения реакции амплификации подразумевает обязательную постановку наряду с опытными пробами положительных и отрицательных контрольных образцов. Положительный контроль этапа амплификации включает в себя все компоненты реакции, но вместо материала клинического образца, прошедшего пробоподготовку, вносится контрольный препарат нуклеиновой кислоты.

Отрицательный контроль включает в себя все компоненты реакции, но вместо материала клинического образца, прошедшего пробоподготовку, вносится буфер или деионизованная вода. Отрицательный контроль необходим для проверки компонентов реакции на отсутствие в них

53

—правильность внесения результатов в бланк исследования и формулировка лабораторного заключения;

—своевременное доведение информации до врача, назначившего исследование.

54

Однако, учитывая распространенность смешанных инфекций, частой встречаемости «атипичных» трихомонад, при сомнительных результатах культурального исследования для дополнительного контроля следует проводить ПЦР-диагностику в комплексе с микроскопией [18, 49].

Заслуживает внимания алгоритм диагностики УТ у мужчин и женщин (рисунки 3 и 4), предложенный Р.А.Раводиным (2005).

55

Рисунок 3 – Алгоритм диагностики УТ у мужчин

56

Таблица 15 – Клинический протокол диагностики пациентов с УТ [27]

58

Урогенитальный кандидоз

Эпидемиология урогенитального кандидоза.

Урогенитальный кандидоз чаще встречается у женщин, реже – у мужчин. Заболевание составляет до 40% в структуре инфекционной патологии нижнего отдела гениталий (Прилепская В.Н., Байрамова Г.Р., 1995). Подсчитано, что из 100 млн ежегодных визитов к врачам по поводу вагинита около 2025% обусловлены вульвовагинальным кандидозом [31]. Установлено, что 75% женщин переносят в течение своей жизни по крайней мере хоть один эпизод вульвовагинального кандидоза, а у 40-50% из них развивается один рецидив заболевания (Harley R., De Louvois J., 1979; Reed B.D., 1992).

Заболеваемость вульвовагинальным кандидозом в США насчитывает около 13 млн случаев в год, что составляет около 10% женского населения страны. Урогенитальный кандидоз наиболее часто регистрируется в странах с жарким климатом и низкими санитарно-гигиеническими условиями. В последние годы появились стертые и атипичные формы данной патологии, а также хронические, резистентные к проводимой терапии разновидности заболевания [2, 19, 21, 26, 62].

Вульвовагинальный кандидоз поражает женщин репродуктивного возраста, причем увеличение частоты кандидоза отмечается ближе к 20 годам с пиком заболевания в следующие 20 лет, снижаясь после менопаузы [15, 48, 62].

Характеристика возбудителя. Первые упоминания о кандидозе появились еще в трудах Гиппократа и Галена. Впервые клиническая картина вульвовагинита была описана в 1792 г. (Frank), а в 1794 г. (Wilkinson) впервые установил ее грибковую этиологию. Возбудителем урогенитальных кандидозов наиболее часто является Candida albicans. В настоящее время описано более 170 биологических видов дрожжеподобных грибов, среди которых в подавляющем большинстве случаев (85-90%) преобладают Candida albicans. Среди остальных видов Candida клиническое значение имеют преимущественно С.glabrata (или С.torulopsis) (5-10%), С.tropicalis (3-5%), С.parapsilosis (3-5%), С.сrusei (1-3%), С.guilliermondi, значительно реже – С.pseudotropicalis и Saccharomyces cerevisiae. Среди

59

перечисленных дрожжеподобных грибов С.albicans является наиболее патогенным [21, 31].

Факторы патогенности С.albicans можно разделить на 3 группы: изменчивость и значительную лабильность морфофизиологических свойств клетки, рецепторы адгезии и литические ферменты. Изменчивость С.albicans обеспечивается многими генетическими и регуляторными механизмами и позволяет выживать в различных патологических условиях (воздействие температуры, кислотности, содержания кислорода и др. вредных факторов). В зависимости от условий среды возбудитель может переходить от дрожжевой формы к плесневой

иобратно, способен изменять фенотип или структуру поверхности, т.е. рецепторы и антигены [2, 4, 31, 62].

Наличие факторов адгезии (к фибриногену, ламинину, фибронектину, факторам системы комплемента) способствует быстрому прикреплению с последующей инвазией и развитием «антигенной мимикрии». У С.albicans описано 9 протеиназ, способных разрушать кератин, белки эндотелия и соединительной ткани, факторы плазмы крови, комплемента и фрагменты иммуноглобулинов. Имеются также фосфолипазы, разрушающие фосфолипиды клеточных мембран, гиалуронидазу

игемолитический фактор. Среди факторов патогенности данного гриба следует отметить устойчивость к противогрибковым средствам: способность к их ускоренному выведению,

изменению или амплификации внутриклеточной мишени

[4, 34, 45].

Данные возбудители относятся к условно-патогенным растительным микроорганизмам. Кроме сапрофитирования в окружающей среде на субстратах живой и неживой природы, они довольно часто выделяются с поверхности кожных покровов и слизистых оболочек человека. Дрожжеподобные грибы рода кандида являются одноклеточными микроорганизмами. Все виды Candida существуют в форме почкующихся клеток. Их диаметр колеблется в пределах от 1,5 до 10 мкм. При этом многие виды образуют псевдомицелий, представленный вытянутыми дрожжевыми клетками. От настоящего мицелия их отличает отсутствие септ (перегородок). С. albicans – единственный в роде Candida вид, способный к образованию истинного мицелия, для

60