Материалы и методы исследования

Группу обследуемых составили 358973 человека, допущенных к сдаче крови и плазмы в учреждениях службы крови Алтайского края. Гемокомпоненты 330542 доноров после проведения первичного лабораторного обследования были заложены на карантин, т.е. составили основу исследования по карантинизации. При этом гемокомпоненты остальных 28431 донора были сразу отбракованы и утилизированы в соответствии с нормативными документами службы крови и учитывались отдельно.

Материалом для исследований, как указано в дизайне работы, послужили донорские учетные записи в период с 1999 по 2009 г. Исследования проведены на базе АГМУ и государственных учреждений здравоохранения Алтайского края: АКСПК, БСПК (Бийская станция переливания крови), РСПК (Рубцовская станция переливания крови).

Группа доноров не была статичной и ежегодно обновлялась за счет новых доноров. У 330542 доноров (с учетом вторичного брака) было проведено 885402 донации (2,7 донаций на 1 донора). Перед каждой донацией доноров обследовали в соответствии с обязательными отраслевыми нормативными документами. При отсутствии маркеров гепатитов В и С, ВИЧ и сифилиса, повышения АЛТ и билирубина образцы гемокомпонентов закладывались на 6-месячное хранение.

Дизайн исследования. Общее количество обследованных лиц (n=358973). Проанализировано 327084 донорских учетных записи и 31889 записей отведенных от донации лиц (с учетом вторичного брака). Женщин – 189741 (58,01%), мужчин – 137343 (41,99%), возраст от 18 до 63 лет. Группа до 30 лет – 154155 (47,13%), старше 30 лет – 172929 (52,87%). Кадровые доноры – 279199 (85,36%), доноры резерва – 48047 (14,64%). Первичные доноры – 105518 (31,91%), повторные кроводачи – 225156 (68,09%).

Основными принципами выделения групп исследования были: получение допуска к донации крови и разрешение на применение гемокомпонентов в лечебной сети или запрет к донации и применению крови. Критерии включения в исследования были определены в связи с необходимостью оценки предполагаемого остаточного риска инфицирования гемокомпонентами при использовании начальной, базисной и оптимальной схем инфекционной безопасности. Для разработки схем инфекционной безопасности проведено динамическое исследование и сравнение групп доноров до карантинизации крови, в процессе применения карантина и после дополнительного введения входного ПЦР-контроля.

В исследовании доноры были сгруппированы следующим образом: 1) доноры нативных компонентов крови (n=330542); 2) доноры карантинизированных гемокомпонентов (n=225066); 3) доноры, обследованные ПЦР-контролем (n=157547).

Отведенные от донации лица (n=31889) были разделены на группы, в которых исследован первичный абсолютный и относительный брак крови и аналогично – вторичный брак донорской крови: 1) первично отведенные по относительным показаниям (n=11774); 2) первично отведенные по абсолютным показаниям (n=16657^); 3) вторично отведенные по абсолютным показаниям (n=3458).

Схематично этапы исследования представлены в виде рисунка 1.

Логика исследований

Рис. 1. Этапы исследования

Исследование посвящено изменению и поэтапному усовершенствованию системы обеспечения населения безопасными компонентами крови в Алтайском крае с 1999 по 2009 г. В работе представлены подходы к формированию схем обеспечения вирусной безопасности гемотрансфузий в условиях «промышленной» заготовки компонентов крови в Алтайском крае. Работа одобрена этическим комитетом АГМУ.

До 1999 г. в службе крови края использовалась начальная схема инфекционной безопасности, основанная на первичном клинико-лабораторном исследовании доноров. Оно включало анализ данных единого донорского центра, лабораторный скрининг маркеров инфекций.

Отведение от донаций производилось на основе обнаружения данных о гемотрансмиссивных инфекциях у донора в анамнезе, а выбраковка образцов гемопрепаратов и их утилизация – на основе лабораторных исследований, в первую очередь ИФА-маркеров ВИЧ, гепатитов В, С и сифилиса. Эта начальная схема обеспечения безопасности донорской крови не учитывала период серонегативного окна. В 1999 г. на ГУЗ АКСПК впервые была внедрена методика карантинизации плазмы, что послужило предпосылкой к широким исследованиям и промышленному внедрению этой технологии.

Первый этап исследования – с 2000 по 2006 г. – посвящен оценке остаточного гемотрансфузионного риска при промышленном использовании начальной схемы и разработке базисной схемы инфекционной безопасности крови. С 2000 г., наряду с общепринятыми методами обеспечения безопасности донорской крови, разработана и внедрена технология параллельной карантинизации свежезамороженной плазмы и эритроцитной массы. За время исследования обоснованы понятия «первичного» и «вторичного» брака донорской крови.

Первичный брак донорской крови – это суммарная частота выявленных маркеров гемотрансмиссивных инфекций (гепатитов В и С, ВИЧ, сифилиса) при стандартном исследовании лиц перед донацией.

Вторичный брак донорской крови – это суммарная частота дополнительно выявленных маркеров гемотрансмиссивных инфекций (гепатитов В и С, ВИЧ, сифилиса) у доноров в период хранения образцов крови в карантине.

Доноры, чьи гемокомпоненты были заложены на карантин, при последующих донациях обследовались в обычном режиме. Если выявлялись маркеры инфекций, то уничтожались и настоящий образец, и образцы, находящиеся на хранении в карантине.

На базе результатов выявления маркеров гемотрансмиссивных инфекций при карантине донорских гемокомпонентов от 1 до 6 месяцев выработан достаточный срок длительности процедуры хранения в карантине. Также оценена роль АЛТ как косвенного маркера гемотрансмиссивных инфекций.

На втором этапе – с 2007 по 2009 г. – на основе полученных данных о количестве не пришедших на повторное исследование доноров определен остаточный риск инфицирования реципиентов компонентами крови, не прошедшими карантин. Для минимизации риска к базисной схеме добавлен метод входного NAT-генотипирования (ПЦР-диагностики) компонентов донорской крови. В пилотном исследовании оценено диагностическое значение NAT-технологии в ИФА-положительных и ИФА-отрицательных случаях.

В 2009 г. в рамках реализации сегмента Приоритетного национального проекта «Здоровье» в крае применена технология УФО-облучения плазмы, обработанной метиленовым синим. На основе оценки остаточного гемотрансфузионного риска разработана и предложена к внедрению оптимальная схема инфекционной безопасности донорской крови.

На всех этапах исследовались: первичный брак донорской крови, вторичный брак ее компонентов, количество выявленных потенциально зараженных образцов во время карантинизации и остаточный риск инфицирования гемокомпонентов.

Обследование доноров проводили в соответствии с нормативными приказами Минздравсоцразвития для службы крови (приказы №282 от 28.09.98 г., №286 от 07.12.93 г., №193 от 07.05.2003 г., №364 от 14.09.2001 г.).

Обследование включало клинические исследования, изучение краевых электронных баз данных доноров, инфекционных больных и их контактных лиц. Лабораторные исследования включали, наряду с общепринятыми для доноров методиками общего и биохимического анализа крови, ИФА-исследование на сифилис, гепатиты В, С и ВИЧ и ПЦР-диагностику гепатитов В, С и ВИЧ-инфекции. В ИФА-методах использованы тест-системы производителей «OrganonTeknika», «Biomerieux», «Bio-Rad», «Вектор Бест», «ЭКОлаб», «Медико-биологический союз». При ПЦР-исследованиях использовался амплификатор С1000 в режиме «реального времени».

При обработке полученных результатов были использованы современные методы статистической обработки, оценки достоверности различий показателей между группами определялись по критерию Стьюдента (t) с вычислением показателя статистической достоверности (р). Достоверность также рассчитывалась по распределению Фарадея для крупных чисел. Кроме этого, применяли непараметрический метод Вилкоксона. Для статистической обработки результатов исследования использовали персональный компьютер IBМ PC с применением пакета программ Microsoft Office (Microsoft Excel XP, Microsoft Access XP), математические и статистические программы Mathematica 5.1 и SPSS 13.