Оригинальные исследования

1, 2010

Цель исследования. Изучить на двух моделях

RU

Aim of investigation.

. To study at two models of

VESTI

иммунного гепатита у мышей (Т-клеточного и анти­

immune hepatitis (Т-cellular and antibody origin) in

тельного генеза) повреждение печени, активность

mice damage of the liver, activity and destruction of its

и гибель ее иммунокомпетентных клеток, тимуса и

immunocompetent cells, thymus gland and the spleen,

-

as well as the effect of curcumine — inhibitor of NF-κB

селезенки, а также влияние ингибитора активации

M

activation on development of pathological process.

NF-κB куркумина на развитие патологического про­

цесса.

.

Material and methods. An immune lesion of the

Материал и методы. Иммунное поражение

liver in mice of СВА line was invoked by Т-cellular mito­

печени у мышей линии СВА вызывали с помощью

gen concanavalin A and xenogenic anti-liver antibodies.

Т-клеточного митогена конканавалина А и ксено­

Study was carried out with application of histological,

генных противопеченочных антител. Исследования

cytological and biochemical methods.

проводили с применением гистологического, цито­

Results. In comparative studies features of hepa­

логического и биохимического методов.

titis development of cellular and antibody origin were

Результаты. В сравнительныхWWWисследованиях

revealed. At Т-cellular hepatitis cytolytic component

выявлены особенности развития гепатита клеточ­

of liver lesion, primary and secondary cell necrosis,

ного и антительного генеза. При Т-клеточном гепа­

depression of cytophagous activity of macrophages that

тите более выражены цитолитический компонент

causes preconditions for enhancement of inflammation

поражения печени, первичный и вторичный некроз

were more intensive. At hepatitis of antibody origin, at

клеток, угнетение фагоцитарной активности мак­

least at early stages, vascular and immunological reac­

рофагов, что создает предпосылки для усиления

tions are expressed in the liver.

воспаления. При гепатите антительного генеза, по

Conclusion. Curcumine, the inhibitor of NF-κB acti­

крайней мере на ранних этапах, выражены сосудис­

vation reduces preconditions for development of inflam­

тые и иммунные реакции на территории печени.

matory response at experimental Т-cellular hepatitis,

Заключение. Ингибитор активации NF-κB кур­

and has protective action for the liver.

кумин уменьшает предпосылки для развития воспа­

Key words: experimental immune hepatitis, con­

лительных реакций при экспериментальном Т-кле­

canavalin A, anti-liver antibodies.

точном гепатите, а также оказывает протективное

действие на печень.

Ключевые слова: экспериментальный иммун­

1, 2010

Оригинальные исследования

ммунное воспаление играет существенную

в свою очередь, активируют NF-κB, что может

роль в механизмах аутоиммунных забо-

приводить к порочному кругу усиления воспали-

Илеваний печени (первичный билиарный

тельного процесса.

цирроз, аутоиммунные гепатиты типа 1 и 2, пер-

Блокада активации NF-κB может оказаться

вичный склерозирующий холангит), а также при

перспективным методом терапии, однако требует

других видах ее патологии. Установлено участие

тщательного изучения, поскольку роль NF-κB,

Т-клеток, в частности Т-хелперов и натуральных

по крайней мере в печени, многогранна. Наряду

киллеров Т-клеток, в патогенезе аутоиммунного

с провоспалительным действием он способствует

гепатита [8, 16, 22]. Об участии гуморального

выживанию гепатоцитов, ингибируя их апопто-

звена иммунной системы в повреждении печени

тическую гибель через транскрипционную индук-

свидетельствуют гипергаммаглобулинемия, при-

цию различных супрессоров апоптоза [15, 23].

сутствие противопеченочных антител и повыше-

Показано, что NF-κB может быть как про-, так и

ние количества плазмоцитов в органе [7, 16, 22].

антиапоптотическим фактором в зависимости от

Роль и соотношение клеточных и гуморальных

природы сигналов клеточной гибели.

факторов в развитии аутоиммунных заболеваний

Одним из ингибиторов активации NF-κB явля-

печени могут определять стратегию терапевтичес-

ется куркумин, биологически активный компо-

ких воздействий и требуют дальнейшего изуче-

нент растения Curcuma longa L. Куркумин угне-

ния.

тает экспрессию генов ФНО-α и индуцибельной

Одним из фундаментальных механизмов функ­

циклооксигеназы, действует как антиоксидант и

ционирования иммунной системы, нарушение

модулятор пролиферации и апоптоза клеток [17].

которого может приводить к аутоиммунной пато-

Протективное

действие блокаторов

активации

логии, является поддержание клеточного гомео­

NF-κB было установлено в эксперименте при

стаза, необходимого баланса между пролифера-

различных поражениях печени – токсическом,

цией, дифференциацией, активацией и гибелью

вызванном введением четыреххлористого угле-

иммунокомпетентных клеток, в частности в пече-

рода, при ишемии-реперфузии, стеатогепатите

ни. Особенно важно изучать соотношение апо­

[14, 17, 18], а также на моделях аутоиммунных

RU

птотического и некротического путей клеточной

.

заболеваний, таких как болезнь Крона, иммунный

гибели, поскольку некроз клеток в отличие от

артрит [6, 11]. Влияние ингибиторов активации

апоптоза способствует развитию воспаления.

NF-κB при аутоиммунной патологии печени изу-

Существующие

экспериментальные модели

чено недостаточно.

аутоиммунного поражения печени не отражают

Целью наших исследований было изучить

-

VESTI

у мышей

полностью развитие аутоиммунной патологии у

на двух моделях иммунного гепатита

человека, но тем не менее позволяют отделитьMи

(Т-клеточного и антительного генеза)

поврежде-

.

ние печени, активность и гибель ее иммуноком-

изучить роль того или иного компонента иммунно-

го воздействия, в частности механизмов, опосредо-

петентных клеток, тимуса и селезенки, а также

ванных Т-клетками или антителами. Признанной

влияние ингибитора активации NF-κB куркумина

моделью иммунного гепатита у мышей стало

на развитие патологического процесса.

применение Т-клеточного митогена – конканава-

WWW

лина А (КонА) [20,

21]. Печень богата иммуно-

Материал и методы исследования

компетентными клетками, поскольку на ее тер-

ритории развертываются реакции защиты орга-

Исследования

проведены на

половозрелых

низма, связанные с поступлением из кишечника

самцах мышей линии СВА массой 18–22 г.

бактерий, токсинов, пищевых антигенов. Кроме

При работе

руководствовались

требованиями

того, в печени накапливаются Т-лимфоциты как

Европейской конвенции о защите позвоночных

следствие ее специфического кровоснабжения и

животных, используемых в экспериментальных и

функции по удалению активированных Т-клеток.

других научных целях (Страсбург, 1986).

Все это приводит к тому, что активация лимфоци-

Ксеногенные

противопеченочные

антитела

тов КонА вызывает провоспалительный цитокино-

получали путем внутривенной иммунизации кро-

вый ответ и агрессию лимфоцитов относительно

ликов породы шиншилла экстрактом мышиной

паренхимы. С целью воспроизведения иммунного

печени. Из сыворотки крови иммунизированных

гепатита антительного генеза применяют ксено-

кроликов с титром противопеченочных антител

генные противопеченочные антитела [1].

по реакции связывания комплемента 1:400–1:640

Одним из кардинальных регуляторов воспа-

путем высаливания сернокислым аммонием выде-

лительной реакции является ядерный фактор

ляли гамма-глобулиновую фракцию, которую

каппа В (NF-κB), который активирует экспрес-

использовали в качестве противопеченочных анти-

сию генов провоспалительных медиаторов – цито-

тел [1].

кинов (ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-8, ФНО-α), а также

Иммунное повреждение печени Т-клеточного

молекул адгезии, индуцибельных циклооксигена-

или антительного генеза вызывали однократным

зы и NO-синтазы [11, 13, 14]. ИЛ-1 и ФНО-α,

внутривенным введением КонА (Sigma, USA) в

Оригинальные исследования

1, 2010

дозе 0,6 мг на 20 г массы тела или противопече-

ночных антител в дозе 4,5 мг белка на 20 г массы

%

тела соответственно.

Контрольным

животным

250

вводили физиологический раствор. Исследования

проводили через 20 ч. Куркумин (Sigma, USA)

200

суспендировали в 5% этаноле и вводили внутри-

брюшинно (2 мг/20 г) за 2 ч до введения КонА

150

или антител и через 1 ч после. Контрольным

животным вводили растворитель куркумина – 5%

100

этанол.

Активность аланинаминотрансферазы (АлАТ),

50

аспартатаминотрансферазы (АсАТ) и щелочной

фосфатазы (ЩФ) в сыворотке крови определяли

0

по общепринятой методике [2]. Гистологическое

Контроль

КонА

КонА +

Антитела

Антитела +

куркумин

куркумин

исследование печени проводили на парафиновых

срезах при

окраске гематоксилином

и эозином.

Рис. 1. Изменение активности АлАТ в сыворотке

Оценивали

диффузную (количество

лейкоцитов

крови мышей (процент от контрольного уровня)

в 10 полях зрения ×40) и очаговую (количество

при введении КонА и противопеченочных антител,

инфильтратов в 10 полях зрения ×20) инфиль-

а также при действии куркумина в этих условиях

трацию печени. Из печени выделяли мононук-

**p<0,01, ***p<0,001 по отношению к контролю,

леарные клетки [9], подсчитывали количество

+++p<0,001 по отношению к действию КонА

больших, средних и малых лимфоцитов, плазмо-

цитов. Иммунофлюоресцентным методом опреде-

нарушением микроциркуляции. Однако при вве-

ляли количество мононуклеаров, экспрессирую-

дении КонА более отчетливо проявлялся цитоли-

щих ядерный антиген пролиферирующих клеток

тический компонент повреждения печени, тогда

(с помощью моноклональных антител ИПО-38).

как при введении антител преобладали дисцир-

RU

Апоптотическую и некротическую гибель моно-

.

куляторные изменения. При обоих воздействиях

нуклеаров печени, а также клеток, выделенных из

увеличивалась диффузная и очаговая инфильтра-

тимуса и селезенки, изучали путем прижизненной

ция печени лейкоцитами (рис. 2). Анализ рас-

двойной окраски флуоресцентными красителями

пределения инфильтратов на категории по коли-

нуклеиновых кислот Хёхст 33342 и йодид пропи

честву клеток в них показал, что при двух видах

-

диума [19].

VESTI

иммунного поражения увеличивалось количество

Все данные, выраженные в процентахM, подвер-

многоклеточных и уменьшалось количество мало-

.

клеточных инфильтратов, но более выраженным

гали арксинус-преобразованию Фишера [3]. Для

статистической обработки использовали одно-

такое перераспределение наблюдалось в условиях

факторный дисперсионный анализ ANOVA с

введения антител: количество инфильтратов с

дальнейшим сравнением средних значений по

более чем 50

клетками было большим, чем при

тесту Фишера с

использованием программы

«STATISTICA-6».

WWW

Инфильтрация печени

Результаты исследования

%

300

и их обсуждение

250

Введение как КонА, так и противопеченочных

200

антител приводило к повышению активности

АлАТ в сыворотке крови, в большей степени

150

выраженному при КонА (рис. 1). Показатель

100

АсАТ повышался в равной степени – с 2,0±0,2

мМ/л в час в контроле до 2,9±0,3 и 3,0±0,5 при

50

действии КонА и антител соответственно (р<0,05

0

в обоих случаях). Активность ЩФ повышалась

диффузная

очаговая

лишь при введении антител – с 2,1±0,1 мМ/л в

Контроль

КонА

Антитела

час в контроле до 2,9±0,1 при действии антител

(р<0,001).

Рис. 2. Диффузная (количество лейкоцитов в 10 полях

Гистоструктурные изменения в печени при

зрения ×40) и очаговая (количество инфильтратов в

введении КонА и антител имели черты как сход­

10 полях зрения ×20) инфильтрация печени при дей­

ства, так и различия. Для обоих видов поражения

ствии КонА и противопеченочных антител

была характерна белковая дистрофия паренхимы

По оси ординат – процент от уровня контроля.

с цитолизом и некробиозом отдельных клеток и

*p<0,05, **p<0,01 ***p<0,001 по отношению к контролю

1, 2010

Оригинальные исследования

%

леаров

печени

при обоих

видах

ее

иммунного

поражения: количество клеток, экспрессирующих

80

70

специфический

для

пролиферирующих

клеток

60

антиген, возрастало с 13,9±0,9% в контроле до

50

31,4±1,8 и 34,4±2,5% при действии КонА и анти-

40

тел соответственно (р<0,001 в обоих случаях).

Известно,

что

пролиферация

и

активация

30

иммунокомпетентных

клеток

приводит

к

уси-

20

лению

клеточной

гибели.

Это один из базовых

10

механизмов

поддержания

клеточного

гомеостаза

0

и ограничения чрезмерного развития иммунных

0–9 клеток

10–19 клеток 20–49 клеток

>50 клеток

Контроль

КонА

Антитела

реакций. Наши

исследования

выявили увеличе-

ние апоптоза мононуклеаров печени с 17,1±2,6%

Рис. 3. Распределение инфильтратов по количеству

в контроле до 34,1±2,2 и 25,5±2,8% при введении

КонА и антител соответственно (р<0,05 по отно-

клеток в них при действии КонА и противопеченоч-

шению к контролю в обоих случаях), однако в

ных антител

По оси ординат – процент от общего количества

большей степени апоптоз усиливался при КонА

инфильтратов. По оси абсцисс – количество клеток

(р<0,05 при сравнении с действием антител).

в инфильтратах разных категорий. *p<0,05, **p<0,01,

Ранее мы показали, что при иммунном пора-

***p<0,001 по отношению к контролю, +p<0,05,

жении печени процент мононуклеаров, экспрес-

+++p<0,001 по отношению к действию КонА

сирующих Fas-рецептор апоптоза, увеличивался

в большей степени при введении КонА, чем при

введении КонА (p<0,001) – рис. 3. При этом

введении антител [4]. В отличие от антител введе-

чаще отмечалось присутствие отдельных плазмо-

ние КонА усиливало гибель клеток и по некроти-

цитов и эозинофилов в составе инфильтратов сме-

ческому пути. При этом увеличивалось количест-

шанного типа, что является признаком активации

во мононуклеаров с цитологическими признаками

RU

иммунных процессов.

.

первичного некроза – с 2,2±0,4% в контроле до

При введении антител в отличие от КонА

10,4±1,0% при введении КонА (р<0,001), а также

выявлено увеличение количества плазмоцитов в

вторичного постапоптотического некроза с фраг-

составе мононуклеаров, выделенных из печени

ментированными ядрами и повреждением плазма-

(0,09±0,01% в контроле, 1,02±0,38% при введении

тической мембраны – с 0,25±0,17% в контроле до

-

VESTI

антител, р<0,01; 0,47±0,20% при действии КонА).

1,32±0,41% (р<0,05).

Только при

введении антител

обнаруживалосьM

Реакция

центрального

и

периферического

перераспределение

субпопуляций

.

органов иммунитета – тимуса и селезенки – при

лимфоцитов

печени в сторону увеличения процента малых,

введении КонА и антител также была различ-

более дифференцированных лимфоцитов (рис. 4).

ной. Только при КонА резко снижалась масса

Установлено

усиление пролиферации мононук-

тимуса и уменьшалось количество клеток в нем.

WWW

Иммунокомпетентные

клетки

при

КонА

гибли

как по апоптотическому, так и по некротическому

%

Лимфоциты

пути, наблюдалось усиление первичного и вторич-

60

ного некроза (рис. 5). Такое усиление некротичес-

50

ких процессов при действии Кон А приводило к

развитию воспаления в организме, подтверждени-

40

ем чего является увеличение процента нейтрофи-

30

лов, в том числе палочкоядерных, – с 3,1±0,5%

в контроле до 28,0±2,1% при КонА (р<0,001) при

20

снижении процента лимфоцитов.

10

Как

продемонстрировали

наши предыдущие

исследования, реакция перитонеальных макро-

0

средние

малые

фагов

при

двух видах иммунного

повреждения

большие

печени была разнонаправленной [5]: при КонА

Контроль

КонА

Антитела

фагоцитарная активность снижалась, при вве-

дении противопеченочных антител повышалась.

Рис. 4. Влияние КонА и противопеченочных антител

Учитывая

полифункциональность

макрофагов,

на количество больших, средних и малых лимфоци-

можно

предположить, что

при КонА-индуциро-

тов в мононуклеарных клетках печени

ванном

гепатите

уменьшение

их

фагоцитарной

По оси ординат – процент от количества лимфоци-

активности будет способствовать снижению эли-

тов, выделенных из печени. *p<0,05, **p<0,01 по от-

ношению к контролю, +p<0,05 по отношению к дей­

минации некротических клеток, что приведет к

ствию КонА

значительному

усилению

воспаления.

В

то

же

Оригинальные исследования

1, 2010

Некроз

Ингибитор активации NF-κB куркумин оказы-

вал протективное действие на печень (по данным

%

активности АлАТ) только при введении КонА (см.

12

рис. 1). При этом снижалась гибель клеток тимуса

10

и селезенки по некротическому пути (см. рис. 5).

8

Куркумин

ослаблял

воспалительную

реакцию

по показателям лейкограммы крови: снижалось

6

количество палочкоядерных нейтрофилов – с

4

28,0±2,1% при КонА до 17,7±1,7% при действии

куркумина (р<0,001). При введении куркумина

2

на фоне противопеченочных антител существен-

ных изменений этих параметров не происходило.

0

Селезенка

Таким образом, протективное действие куркуми-

Тимус

на проявлялось только в условиях выраженных

Контроль

КонА

КонА + куркумин

воспалительных реакций. Эти наши наблюдения

Антитела

Антитела + куркумин

могут быть сопоставлены с данными литературы

о том, что куркумин обладает более выраженным

Рис. 5. Некротическая гибель клеток тимуса и селе-

противовоспалительным

действием

при

остром

воспалении и вдвое меньшим – при хроническом

зенки при действии куркумина в условиях введения

КонА и противопеченочных антител

процессе [10, 12].

По оси ординат – процент от общего количества

Выявленные различия в развитии иммунного

клеток. *p<0,05, ***p<0,001 по отношению к контролю,

гепатита Т-клеточного и антительного генеза сви-

++p<0,01, +++p<0,001 по отношению к действию

КонА

детельствуют о том, что эти два вида иммунного

поражения печени в значительной степени опо­

время введение антител, которые являются мощ-

средуются разными сигнальными механизмами.

ными опсонинами и активаторами макрофагов,

Известно,

что активация Т-клеток митогеном

RU

может вызвать активацию иммунных процессов,

.

КонА приводит к синтезу ими целого ряда про-

в том числе на территории печени, что мы видели

воспалительных факторов, в первую очередь

по другим показателям.

цитокинов, оказывающих непосредственное вли-

Представленные данные свидетельствуют, что

яние на гепатоциты, а также вызывающих акти-

при иммунной патологии Т-клеточного или анти

вацию NF-κB и усиление каскада воспалительных

-

VESTI

тельного генеза помимо общих черт повреждения

как про-, так и антиапоптотических сигналов [13,

печени и гибели иммунокомпетентных клетокMиме-

20, 23]. При иммунном поражении печени анти-

.

телами, по крайней мере на ранних этапах, более

ются и существенные различия. Так, в первом слу-

чае (введение КонА) в изменении гистоструктуры

важным

патогенетическим

фактором

является

печени преобладал цитолитический компонент,

взаимодействие введенных ксеногенных антител с

что отражается на более значительном повышении

антигенами печени с вовлечением системы комп-

активности АлАТ в сыворотке крови. Наряду с

лемента и образованием иммунных комплексов.

WWW

апоптотической гибелью клеток наблюдается и их

некроз, который

является предпосылкой

разви-

Заключение

тия воспалительных реакций, что и проявляется

в существенном изменении лейкограммы крови.

Полученные данные о протективном действии

При иммунной патологии антительного генеза

куркумина на печень представляют эксперимен-

более выражены изменения сосудистого русла и

тальное обоснование для дальнейшего исследо-

предпосылки для развития иммунных реакций

вания возможности терапевтического применения

на территории печени (пролиферация мононук-

ингибитора активации NF-κB при аутоиммунном

леаров, образование многоклеточных смешанных

гепатите с активацией Т-клеточного звена имму-

инфильтратов, увеличение количества плазмоци-

нитета и выраженными воспалительными реак-

тов, активация макрофагов).

циями.

Список литературы

4.

Макогон Н.В., Павлович С.І., Бризгiна Т.М. и др.

1. Алексеева И.Н. Противопеченочные антитела и функ-

Пролiферацiя та загибель мононуклеарних клiтин печiн-

ки мишей за умов її iмунного ураження, викликаного

ции печени. – Киев: Наукова думка, 1980. – 184 с.

введенням конканавалiну А або протипечiнкових антитiл

2. Камышников В.С. Справочник по клинико-биохимичес-

// Фiзiол. журн. – 2008. – Т. 54, № 6. – С. 49–57.

ким исследованиям и лабораторной диагностике. – М.:

5.

Мартинова Т.В., Алексєєва І.М.

Функцiональна

МЕДпресс-информ, 2004. – 912 с.

активнiсть

перитонеальних макрофагiв

у

мишей при

3. Лакин Г.Ф. Биометрия. – М.: Высшая школа, 1980.

iмунному ушкодженнi печiнки клiтинного та антитiль-

– 293 с.

1, 2010

Оригинальные исследования

ного генезу // Фiзiол. журн. – 2008. – Т. 55, № 1.

15.

Luedde T., Trautwein C. Intracellular survival pathways

– С. 36–42.

in the liver // Liver International. – 2006. – Vol. 26.

6.

Cuzzocrea S., Chatterjee P.K., Mazzon E. et al.

– Р. 1163–1174.

Pyrrolidine dithiocarbamate attenuates the development

16.

Mackay I.R. Hepatoimmunology: a perspective //

of acute and chronic

inflammation // Br. J. Pharm.

Immunol. Cell Biol. – 2002. – Vol. 80, N 1. – Р. 36–

– 2002. – Vol. 135, N 2. – Р. 496–510.

44.

7.

Czaja A. Autoantibodies in autoimmune liver disease //

17.

Reyes-Gordillo K., Segovia J., Shibayama M. et al.

Adv. Clin. Chem. – 2005. – Vol. 40. – Р. 127–164.

Curcumin protects against acute liver damage in the rat

8.

Czaja A. Current concepts in autoimmune hepatitis //

by inhibiting NF-kB proinflammatory cytokines produc-

Ann. Hepatol. – 2005. – Vol. 4, N 1. – Р. 6–24.

tion and oxidative stress // Biochem. Biophys. Acta.

9.

Dong Z.J., Wei H.M., Sun R. et al. Isolation of murine

– 2007. – Vol. 1770. – Р. 989–996.

hepatic lymphocytes using mechanical dissection for

18.

Shen S-Q., Zhang Y., Xiang J-J. et al. Protective

phenotypic and functional analysis of NK1.1+ cells //

effect of curcumin against liver warm ischemia/reperfu-

World J. Gastroenterol. – 2004. –

Vol. 10,

N 13. –

sion injury in rat model is associated with regulation of

Р. 1928–1933.

heat shock protein and antioxidant enzymes // World

10.

Gao X., Kuo J., Jiang H. et al. Immunomodulatory

J. Gastroenterol. – 2007. – Vol. 13, N 13. – Р. 1953–

activity of curcumin: suppression of limphocyte prolife­

1961.

ration, development of cell-mediated cytotoxicity, and

19.

Shimizu S., Eguchi Y., Kamiike W. et al. Involvement

cytokine production in vitro // Biochem. Pharm. – 2004.

of ICE family proteases in apoptosis induced by reoxygen-

– Vol. 68. – Р. 51–61.

ation of hypoxic hepatocytes // Am. J. Phisiol. – 1996.

11.

Jiang H., Deng C-S., Zhang M., Xia J. Curcumin-

– Vol. 271, N 6. – Р. 949–958.

attenuated trinitrobenzene sulphonic acid induces chronic

20.

Tiegs G. Cellular and cytokine-mediated mechanisms of

colitis by inhibiting

expression of

cyclooxygenase-2

inflammation and its modulation in immune-mediated

// World J. Gastroenterol. – 2006. – Vol. 12, N 24.

liver injury // Z. Gastroenterol. – 2007. – Vol. 45, N 1.

– Р. 3848 – 3853.

– Р. 63–70.

12.

Kang B., Song Y., Kim K. et al. Curcumin inhibits Th1

21.

Tiegs G., Hentschel G., Wendel A. A T cell-depen-

cytokine profile in CD4+ T cells by suppressing interleu-

dent experimental liver injury in mice inducible by

kin-12 production in macrophages // British J. Pharm.

Concanavalin A // J. Clin. Invest. – 1992. – Vol. 90,

– 1999. – Vol. 128, N 2. – Р. 380–384.

N 1. – Р. 196–203.

13.

Koerber K., Sass G., Kiemer A.K. et al. In vivo regula-

22.

Washington M.K. Autoimmune liver disease: overlap and

tion of inducible NO synthase in immune-mediated liver

RU

outliers // Modern Pathology. – 2007. – Vol. 20, N 6.

injury in mice // Hepatology. – 2002. – Vol. 36, N 5.

– Р. 15–30.

– Р. 1061–1069.

23.

Wullaert A., van Loo G., Heyninck., Beyaert R. Hepatic

14.

Leclercq I.A., Farrell G.C., Sempoux C. et al. Curcumin

tumor necrosis.factor signaling and nuclear factor-κB:

VESTI

inhibits NF-κB activation and reduces the severity of

effects on liver homeostasis and beyond // Endocrine

experimental steatohepatitis in mice

// J.

Hepatol.

Reviews. – 2007. – Vol. 28, N 4. – Р. 365–386.

– 2004. – Vol. 41, N 6. – Р. 926–934.

-

M

.

WWW

Оригинальные исследования

1, 2010

По

традиции

на берегу Яузы (записки врача Главного военного

ежегодно

один из

клинического госпиталя им. Н.Н. Бурденко)».

первых

выпусков

Александр Израилевич внес большой вклад в

нашего

журнала

развитие отечественной гепатологии. Им подроб-

посвящен гепатоло-

но описаны неконъюгированные гипербилирубин­

гии.

Многие

годы

емии, одним из первых он показал связь рака

этотномерпланиро-

печени с хроническим вирусным гепатитом. Со

вал и готовил про-

своими учениками он на протяжении нескольких

фессор

Александр

десятилетий тщательно исследовал этиологическую

Израилевич

Хаза­

структуру циррозов печени. Им многое сделано в

нов,

который ушел

изучении алкогольной болезни печени. Александр

из жизни в сентябре

Израилевич – автор руководств и монографий,

2009

г. Александр

которые пользуются большой популярностью у

Израилевич – заме-

врачей и студентов вузов и факультетов последип-

чательный врач и

ломного образования. В течение 10 лет Александр

Александр Израилевич Хазанов

чудесный

человек

Израилевич был строгим и беспристрастным пред-

– прожил

очень

седателем научного комитета ежегодной конфе-

интересную и сложную жизнь. В годы Великой

ренции «Гепатология сегодня», являлся членом

Отечественной войны он ушел добровольцем на

редколлегии «Российского журнала гастроэнтеро-

фронт, защищал Москву, диплом врача полу-

логии, гепатологии, колопроктологии» с момента

чил уже после ранения. Практически вся его

его основания. Можно бесконечно много писать

профессиональная деятельность была связана с

и говорить о великом труженике и незаурядной

Главным военным клиническим госпиталем им.

личности, каким был Александр Израилевич.

Н.Н. Бурденко. Весной 1948 г. он стал его сотруд-

Редакционная коллегия «Российского журнала

ником – был ординатором, старшим ординатором,

гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктоло-

начальником гастроэнтерологического

отделения.

RU

гии» приносит соболезнование родственникам,

В 1956 г. защитил кандидатскую, а в 1982 г. –

.

коллегам и друзьям Александра Израилевича.

докторскую диссертацию.

Работа

в

госпитале

VESTI

нашла отражение в его книге «40 лет в Лефортово

УДК 616.36-06:[615.917:547.262].074

-

M

.

Лабораторная диагностика

WWW

1, 2010

Оригинальные исследования

включая 531 больного алкогольным ЦП, 189 пациен­

including 531 patients with alcoholic LC, 189 patients

тов с HBV ЦП и 258 человек с HCV ЦП. Обследованы

with HBV-related LC and 258 patients with HCV-related

103 пациента (разделены на две группы), употреб­

LC. One hundred and three patients taking alcohol (as

лявших алкоголь, для определения уровня углевод­

two subgroups) were tested for carbohydrate-deficient

но-дефицитного трансферрина – маркера хроничес­

transferrin – a marker of chronic alcohol intoxication.

кой интоксикации алкоголем. У 56 (54,4%) человек

In 56 patients (54,4%) asialoglycoside transferrin was

исследовали асиалогликозидный трансферрин, а у

studied, in 47 (45,6%) – all spectrum of sialoglycoside

47 (45,6%) – весь спектр дефицита сиалогликозид­

transferrin deficiency: a-, mono-, biand threesialo­

ного трансферрина: дефицит а-, моно-, ди- и триси­

transferrin deficiency.

алотрансферрина.

Results. Growth of alcohol consumption by popu­

Результаты. Увеличение потребления алкого­

lation in the country resulted in increase of number of

ля населением страны привело к росту больных

patients with alcohol-induced LC. It account for 3,5

алкогольным ЦП. От него умерло в 3,5 раза боль­

times more deaths (78,0%), than all viral LC. Results of

ше больных (78,0%), чем от всех вирусных ЦП.

these investigations demonstrated, that at testing only

Результаты этих исследований показали, что при

for asialotransferrin positive result was obtained only in

определении только асиалотрансферрина положи­

3 (5,4%) patients admitted to the hospital with severe

тельный результат был выявлен лишь у 3 (5,4%)

manifestations of acute alcoholic hepatitis. At assess­

больных, поступавших в стационар с выраженными

ment of integral deficiency of transferrin, changes have

проявлениями острого алкогольного гепатита. При

been found in 36 (76,6%) patients. It confirms high

определении суммарного дефицита трансферри­

diagnostic capacity of this method in testing for chronic

на патологические изменения были обнаружены у

alcohol intoxication.

36 (76,6%) больных. Это подтверждает достаточ­

Conclusion. In the last decade the number of

но высокую диагностическую способность данного

patients with alcohol-induced LC with lethal outcome

метода в тестировании хронической интоксикации

essentially exceeded number of patients, died of viral

алкоголем.

LC. Assessment of integral deficiency of transferrin

Заключение. В последнее десятилетие число

RU

is highly informative method of diagnostics of chronic

больных алкогольным ЦП с летальным исходом

alcohol intoxication

существенно превысило число умерших больных

Key words: alcohol consumption, alcohol-induced

вирусными ЦП. Определение суммарного дефици­

liver cirrhosis, acute.and chronic intoxication alcohol,

та трансферрина является высокоинформативным

VESTI

carbohydrate-deficient transferrin.

методом диагностики хронической интоксикации

алкоголем.

-

Ключевые слова: потребление алкоголя, алко­

гольный цирроз печени, острая и хроническая

.

интоксикация алкоголем, углеводно-дефицитный

трансферрин.

M

WWW

сновная

высокой [7]. Одна из главных причин этого кро-

причина развития алкогольного

цирроза печени (АЦП) – хроническая

ется в несоблюдении режима абстиненции, даже у

Оинтоксикация алкоголем. Как известно,

самых тяжелых больных в условиях стационара.

для здорового мужчины безопасной ежедневной

Более того, можно говорить о некотором ухуд-

дозой (по состоянию печени) считается 30 мл эта-

шении отношения больных и их родственников

нола. К явно токсическим относятся дозы свыше

к ограничению потребления алкоголя. Многие

50–60 мл этанола в день и, наконец, к цирро-

пациенты с тяжелыми формами АЦП стали в этом

генным – 80 мл и более. Такие дозы при дли-

плане прямо-таки бесцеремонными: найти пустую

тельном потреблении вызывают развитие АЦП у

или полупустую бутылку, флакон под подушкой

10–15% потребляющих (табл. 1) [8, 11–13, 22,

и даже пустую бутылку на полу рядом с кроватью

28, 31].

стало не редкостью. Произошло и некоторое изме-

Определенные представления о частоте хро-

нение состава «поставщиков» алкоголя. Ранее это

нической алкогольной интоксикации в СССР и

были главным образом приятели (собутыльники),

Российской Федерации дает кривая потребления

сейчас в этой роли нередко оказываются ближай-

алкоголя (этанола) в мл на одного человека в

шие родственники.

год (см. рисунок). В основном кривая составле-

Больные АЦП не верят в гепатотоксичность

на по данным Минздрава СССР и РФ, позднее

алкоголя. Сегодня даже в стационаре несоблю-

– Министерства здравоохранения и социального

дение режима абстиненции становится частой

развития [5].

причиной некурабельности или малой курабель-

Несмотря на очевидный прогресс лечения в

ности осложнений и активности цирротического

последние годы,

летальность от АЦП остается

процесса.

Оригинальные исследования

1, 2010

вина – основного алкогольного

напитка Франции. Общая смерт­

18

ность населения заметно возрос-

17

ла, а смертность от ЦП отчетливо

16

уменьшилась.

Кончилась

война,

15

существенно улучшилось питание

14

в год

13

населения, одновременно вос-

12

становилось

производство

вина

этанола

11

и смертность

от цирроза

снова

10

резко возросла.

9

Позднее в 1974 г. E. Rubin и

Литры

8

7

Ch. Lieber [27] описали

разви-

6

тие острого

алкогольного

гепа-

5

тита и АЦП за счет длительного

4

перорального

приема

алкоголя

3

2

обезьянами,

находившимися на

1

полноценном рационе.

1946

1956

1966

1976

1986

1996

2006 Годы

По рассматриваемой проблеме

с середины 70-х годов прошлого

Потребление алкоголя (этанола) в мл в СССР и РФ на одного человека

столетия в нашей стране подво-

дились итоги

ряда клинических

в год

исследований. А.И. Хазанов [13]

Для доказательности прямого повреждающего

изучил в стационаре 516 больных ЦП, из них

фактора алкоголя (этанола) необходимо вспом-

диагноз морфологически был подтвержден у 481

нить основополагающие научные исследования в

(93,2%). У 109 (21,1%) пациентов обнаружена

области алкогольной болезни печени (АБП).

алкогольная этиология болезни. А.С. Мухин [10]

RU

В 1961 г. A.G. Beckett и соавт. [20] впервые

.

обследовал 250 больных алкоголизмом. У каждого

описали острый алкогольный гепатит. Заболевание

из них проведена биопсия печени, у 110 (44%) –

возникает после массивного употребления алкого-

лапароскопия. Были выявлены все стадии АБП.

ля и часто протекает тяжело. Так был выявлен

Таким образом, к началу 80-х годов прошлого

элемент

(важный

этап)

алкогольной

болезни

столетия в стране сформировались четкие пред-

-

VESTI

печени, нередко резко убыстряющий прогресси-

ставления о

клинических особенностях стадий

рование заболевания.

M

(нозологических форм) АБП.

.

В многопрофильном стационаре нами был

В том же 1961 г. G. Penquignot [26] про-

анализировал ситуацию с алкогольной инток-

изучен 12-летний период (1996–2007 гг.) реги­

сикацией в период Второй мировой войны. В

страции клинико-лабораторных и эпидемиологи-

Парижском районе в это время резко ухудшилось

ческих данных у большой группы (978) больных

питание населения и одновременно более чем в

вирусными

и

алкогольным ЦП (табл.

2). При

10

раз

WWW

сравнении

первого (1996–2001 гг.) и

второго

сократилось

производство

виноградного

Таблица 1

Оценка различных уровней потребления алкоголя взрослым населением (21 год и старше)

Характер потребления алкоголя

Ежедневная доза этанола, мл

Характер алкогольного

повреждения печени

Мужчины

Женщины

Безопасный уровень для здорового

взрослого человека2) 3)

До 30,0

До 20,0

Как правило, отсутствует

Рискованный уровень

30,5–60,0

20,0–40,0

Стеатоз

Опасный уровень

60,0–80,0

40,0–60,0

Стеатогепатит

Циррогенный уровень:

Пенквино I

80,0–160,0

60,0–110,0

Цирроз

Пенквино II1)

Более 160,0

Более 110,0

Цирроз и острый алкогольный

гепатит

1,

2010

Оригинальные исследования

Таблица 2

Изменение распространенности алкогольного и вирусных циррозов печени

в стационаре при наблюдении за 12 лет (1996–2007 гг.)

Периоды наблюдения,

годы

Изменение частоты

Этиология ЦП

1996–2001

2002–2007

1996–2007

показателей во втором периоде

в сравнении с первым, %

n

%

n

%

n

%

Алкогольный

236

51,6

295

56,6

531

54,3

+25,0

HBV

102

22,3

87

16,7

189

19,3

–14,7

HCV

119

26,1

139

26,7

258

26,4

+16,8

HBV+HCV

221

48,4

226

43,4

447

45,7

+2,3

В с е г о …

457

100,0

521

100,0

978

100,0

+14,0

Таблица 3

Изменение летальности от алкогольного и вирусных циррозов печени

в стационаре при наблюдении за 12 лет (1996–2007 гг.)

Периоды наблюдения,

годы

Изменение частоты

Этиология ЦП

1996–2001

2002–2007

1996–2007

показателей во втором периоде

в сравнении с первым, %

n

%

n

%

n

%

Алкогольный

38

77,6

40

78,4

78

78,0

+5,3

HBV

7

14,3

6

11,8

13

13,0

–14,3

HCV

4

8,1

5

9,8

9

9,0

+25,0

HBV+HCV

11

22,4

11

21,6

22

22,0

–

В с е г о …

49

100,0

51

100,0

VESTI

+4,1

100

100,0

-

дает хорошие результаты. Определение алкоголя,

(2002–2007 гг.) периодов количество больных

увеличилось на 64 (6,5%) человека, главным обра

а также

группы

ферментов –

глутамилтранс-

.

пептидазы (ГГТП), амилазы,

аминотрансфераз

зом за счет алкогольного ЦП (+25,0%) и HCV ЦП

(+16,8%) при значительном уменьшенииMчисла

(аланинаминотрансферазы – АлАТ, аспартат­

WWW

аминотрансферазы – АсАТ) суммарно выявля-

больных HBV ЦП (–14,7%). Суммарно вирусные

ЦП (HCV+HBV) увеличились незначительно –

ет эту форму интоксикации у 80–85% больных

на 5 человек.

(табл. 5).

Алкогольный цирроз являлся причиной смер-

Повышенная концентрация этанола в сыво-

ти у 78,0% больных ЦП. От него умерло в 3,5

ротке крови сохраняется 8–24 ч после оконча-

раза больше больных, чем от всех вирусных ЦП

ния алкогольного эксцесса. Активность глутамил-

(табл. 3). В большей части случаев (81,4%) это

транспептидазы

обычно существенно превышает

были лица трудоспособного возраста. Средний

активность трансаминаз, особое диагностическое

возраст умерших от алкогольного ЦП был самым

значение имеет резкое снижение ее уровня на

молодым – 54,9±10,2 года.

фоне абстиненции.

Представленные в табл. 2 и 3 данные могут

Помимо этого проводят исследование содержа-

служить в известной мере показателями уровня

ния этилглюкуронида мочи. Его определяют через

алкоголизации населения страны. Следовательно,

несколько часов и в течение 5 сут после употреб-

своевременная диагностика алкогольной инток-

ления токсических доз алкоголя.

сикации до сих пор является актуальной и в

Совершенно иное положение при хронической

значительной степени трудной задачей [1–4, 6,

алкогольной интоксикации. Реально в этом отно-

13–18].

шении может приносить пользу только определение

В настоящем сообщении мы не будем касаться

ГГТП. Ее уровень повышается у 70% мужчин при

факторов длительности алкоголизации, а также

употреблении токсических доз алкоголя в течение

общеклинической диагностики алкогольной инто­

6–15 дней. Гиперферментемия может сохраняться

ксикации, они известны (табл. 4).

до 7–20 сут. Но недостаток этого метода, в первую

Не входили в объем нашего исследования и

очередь, заключается в его слабой специфичности:

вопросы этиологической

диагностики основного

высокие показатели ферментемии могут наблю-

заболевания. Общепризнано, что диагностика ост-

даться и при холестазе неалкогольного происхож-

рой алкогольной интоксикации в первые 12–48 ч

дения. Следовательно, необходимо применение

после употребления токсических

доз

алкоголя

иных средств диагностики.

Оригинальные исследования

1, 2010

Таблица 4

Общеклинические признаки интоксикации алкоголем

Интоксикация алкоголем

острая

хроническая

1.

Язык отечен, густо обложен белым налетом

1.

Контрактура Дюпюитрена – контрактура сухо-

жилий сгибателей рук

2.

Артериальная гипертензия (у лиц, не страдаю-

2.

Гинекомастия у мужчин

щих гипертонической болезнью), тахикардия

3.

Эмоциональная лабильность (возбуждение с эле-

3.

Сосудистые звездочки кожи – важный симптом

ментами эйфории или подавленность)

тяжелого, чаще алкогольного поражения печени

4.

Гепатомегалия

Показатель

Частота обнаружения или получения

патологических результатов, %

1.

Углеводно-дефицитный тест

75–100

2.

ГГТП

65–75*

3.

WWW

60–70

Средний корпускулярный объем эритроцитов

3.