Оксигемометрия – определением гемоглобина в крови

Осуществляется 2-мя способами: 1) по Сали, 2) фотометрическим методом при помощи гемоглобинометра МиниГЕМ.

По Сали:

1. В среднюю пробирку прибора Сали налить 0,1% р-р HCl до нижней метки

2. Капилляром набрать кровь из флакона (0,02 мл) и перенести в р-р кислоты

3. Размешать содержимое пробирки

4. Оставить на 5-10 минут (так гемоглобин превратится в соляно-кислый гематин темно-коричневого цвета)

5. Добавить к содержимому пробирки по каплям дистиллированную воду, каждый раз перемешивая стеклянной палочкой.

6. Довести до цвета стандарта

Результат: прочитать цифру на средней пробирке прибора Сали, соответствующую уровню полученного раствора. Только нужно перевести г/мл в г/л, просто умножить на 10. (Норма гемоглобина: м. – 130-160 г/л, ж. – 120-140 г/л).

Фотометрический метод:

1. Установка оптического нуля.

Чистую кювету наполнить дистиллированной водой и проводят измерение плотности в приборе. Если шкала показывает от -1 до +1, то идем дальше.

2. Определение гемоглобина.

А) В две пробирки налить по 2 мл 0,04% р-ра аммиака

Б) взять кровь капилляром для гемометра Сали до метки и вылить в каждую пробирку

В) тщательное перемешать

Г) перелить смесь в оптическую кювету из одной пробирки (вторая для надежности)

Д) кювету перемещают в ячейку прибора

Е) после звукового сигнала появляется число, соответств. Концентрации гемоглобина в 1 л крови.

Определение скорости оседания эритроцитов

1. В капилляр для СОЭ набрать р-р цитрата натрия до метки 50 (Р) и выдуть на часовое стекло, капилляр промыть цитратом

2. Набрать дважды кровь в капилляр до метки К, выдуть на часовое стекло с каплей цитрата

3. Перемешать

4. Набрать капилляр до метки К (0)

5. Поставить в штатив прибора Панченкова на 1 ч.

Результаты: норма: м – 2-10 мм/ч, ж – 2-15 мм/ч.

Определение осмотической резистентности эритроцитов

1. В каждую пробирку (их 8, в которых находятся р-ры с разной С NaCl – 0.8-0.1%) с помощью капилляра поместить по 0,02 мл крови

2. Перемешать

3. Оставить на 30 минут

Результат: норма ОРЭ – 0,35-0,45% от NaCl (или мин. – 0,46-0,48%, макс. – 0,32-0,34%). Нет гемолиза – мутная окраска, частичный гемолиз – окраска прозрачно-розовая, полный гемолиз (концентрация 0,3-0,1% NaCl – лаковая кровь.

Подсчет эритроцитов в камере Горяева

1. Притереть покровное стекло к камере Горяева для создания над сеткой камеры высотой 0,1 мм.

2. Налить в пробирку 4 мл 3% р-ра NaCl

3. Набрать кровь в капилляр (из гемометра Сали) до метки 0,02 мл

4. Перенести ее в пробирку

5. Перемешать (кровь развели в 200 раз)

6. Разведенную кровь поместить в камеру Горяева с помощью стеклянной палочки

7. При малом увеличении в микроскопе рассмотреть сетку в камере и

8. найти ЛЕВЫЙ ВЕРХНИЙ БОЛЬШОЙ КВАДРАТ, деленный на маленькие

9. перевести его в поле зрения

10. поставить на большое увеличение

11. посчитать эритроциты в 5 больших квадратах, разделенных на 16 маленьких по диагонали, используя правило Егорова.

Формула для подсчета эритроцитов

Эр = А*200*4000*10 в 6 степени/80

Норма эритроцитов у м. = 4,5-5,0*10 в 12 л, у ж – 4,0-4,5*10 в 12 л.