9.Простые методы окраски, основные красители.

Препараты окрашивают анилиновыми красителями. С химической точки зрения различают кислые, основные и нейтральные красители. Основные красители, у которых красящая часть молекулы заряжена положительно, более активно вступают в соединение с отрицательно заряженной бактериальной клеткой.

Окраска бактерий является сложным физико-химическим процессом. При взаимодействии красителя с веществами клетки микроорганизма образуются соли, обеспечивающие прочность окраски. Отношение разных видов микроорганизмов к красителям называют тинкториальным свойством.

Наиболее широко применяются следующие красители: красные (фуксин основной, фуксин кислый, сафранин, нейтральный красный, конго красный); синие (метиленовый синий, толуиди- новый синий, трипановый голубой и др.); фиолетовые (генциановый, метиловый или кристаллический); желто-коричневые (везувин, хризоидин).

Простые методы окраски позволяют определить наличие бактерий в препарате, их форму, размеры и взаиморасположение клеток. Для окраски этими методами используют, как правило, один краситель, позволяющий отличить частицы от неокрашенного фона.

Для приготовления фенолового фуксина Циля, отличающегося стойкостью при хранении, используют основной фуксин. Бактерии и другие микроорганизмы окрашиваются фуксином Циля в красный цвет.

Основной фуксин 1 г

Спирт этиловый (95%-й) 10 мл

Фенол кристаллический 5 г

Глицерин 3—4 капли

Вода дистиллированная 100 мл

Фуксин с кристаллами фенола и несколькими каплями глицерина растирают в ступке до гомогенной массы, понемногу добавляя спирт, затем, не прекращая перемешивания, постепенно доливают дистиллированную воду. Краситель выдерживают 48 ч при комнатной температуре и фильтруют. Срок хранения длительный.

Фуксин Пфейффера

Фуксин Циля 1 мл

Вода дистиллированная 9 мл

При окраске фуксином Пфейффера следует использовать свежеприготовленный раствор.

Насыщенный спиртовой раствор метиленового синего

Метиленовый синий 10 г

Спирт этиловый (95%-й) 100 мл

Щелочной раствор метиленового синего по Леффлеру

Насыщенный спиртовой раствор метиленового синего 30 мл

Натрия (калия) гидроксид (1%-й) 1 мл

Дистиллированная вода 100 мл

Водно-спиртовой раствор метиленового синего

Насыщенный спиртовой раствор метиленового синего 10 мл

Дистиллированная вода 100 мл

Старые растворы этого красителя обладают лучшей красящей способностью.

Фиксированный препарат помещают мазком вверх на подставку. На всю поверхность мазка пипеткой наносят раствор красителя. Фуксином Пфейффера окрашивают 1 — 2 мин, щелочным раствором метиленового синего Леффлера или водно-спиртовым раствором метиленового синего — 3 — 5 мин. После окраски краситель сливают, препарат промывают водой, высушивают между листками фильтровальной бумаги и микроскопируют с использованием иммерсионного объектива.

Прижизненная окраска микроорганизмов. Окраску производят метиленовым синим, нейтральным красным и другими малоядовитыми красителями в разведении 1:10 ООО. Для этого на предметном стекле смешивают каплю исследуемого материала с раствором красителя и накрывают покровным стеклом. Микроскопируют с объективом 40х.

Окраска по методу Бури. При негативном способе окраски живых бактерий по этому методу бактерии остаются неокрашенными на темном фоне. В каплю туши, разведенную 1:10 дистиллированной водой, вносят исследуемую культуру и равномерно распределяют петлей или краем предметного стекла. Мазок сушат на воздухе и микроскопируют с иммерсионной системой. Вместо туши иногда используют нигрозин, конго красный и др.