- •1. Взаимодействие фотонов оптического излучения с молекулами. Квантово-механические основы и последствия.
- •1.1. Основные характеристики оптического излучения
- •1.2. Основные квантово-механические механизмы взаимодействия оптического излучения с атомами и молекулами
- •1.3. Электронные переходы в атомах и молекулах при поглощении квантов оптического излучения.
- •2. Законы поглощения света веществом. Спектрофотометрический анализ. Особенности спектрофотометрии биологических объектов. Некоторые специальные методы спектрофотометрического анализа.
- •2.1. Количественное описание поглощения света растворами. Закон Бугера-Ламберта-Бера.
- •2.2. Условия выполнения закона Бугера-Ламберта-Бера.
- •2.3. Качественный и количественный спектрофотометрический анализ.
- •2.3.1. Качественный спектрофотометрический анализ.
- •2.3.2. Количественный спектрофотометрический анализ.
- •2.4. Некоторые специальные методы спектрофотометрии
- •2.5. Особенности спектрофотометрии биологических объектов
- •Оптические неоднородности
- •3. Вторичное излучение света молекулами объекта. Люминесцентный анализ и особенности его использования для исследования биологических объектов.
- •3.1. Явление фотолюминесценции
- •3.2. Электронные переходы в возбужденной молекуле. Законы люминесценции.
- •3.3. Зависимость интенсивности фотолюминесценции от концентрации люминесцирующих молекул. Люминесцентный анализ.
- •3.4. Методы регистрации фотолюминесценции. Спектрофлуориметры. Особенности флуориметрии биологических объектов.
- •3.5. Время жизни возбужденного состояния молекул. Связь между временем жизни возбужденных состояний и квантовым выходом фотолюминесценции.
- •3.6. Влияние окружения люминесцирующих молекул на параметры фотолюминесценции. Флуоресцентные зонды и метки.
- •3.7. Причины снижения интенсивности фотолюминесценции в биологических объектах. Тушение фотолюминесценции. Миграция энергии электронного возбуждения.
- •3.8. Поляризация фотолюминесценции.
- •3.9. Замедленная флуоресценция и фосфоресценция.
- •3.10. Хемилюминесценция биологических систем. Хемилюминесцентный анализ.
- •3.11. Проточная цитофлуориметрия.
- •3.12. Влияние размера люминесцирующей полупроводниковой частицы на ее свойства как люминофора. Квантовые точки.
- •В обычных полупроводниках радиус экситона Бора (ах) определяет размер областей электронного возбуждения.
- •Применение квантовых точек в качестве флуорофоров в медицине и биологии
- •Молекулярные сенсоры
- •Молекулярная диагностика
- •Гибридные молекулярные устройства
- •4.Биофизические основы некоторых фотобиологических процессов. Применение оптического излучения в медицине.
- •4.1. Общие закономерности фотохимических процессов в биомолекулах.
- •4.1.1. Кинетика однофотонных необратимых фотохимических реакций
- •4.1.2. Кинетика однофотонных обратимых фотохимических реакций
- •4.1.2. Кинетика многофотонных фотохимических реакций
- •4.2. Спектры действия фотопревращений молекул и фотобиологических процессов.
- •4.2.1 Спектры действия фотобиологических эффект при небольшой постоянной дозе облучения
- •4.2.2.Спектры действия при постоянной величине фотобиологического эффекта.
- •4.2.3.Спектры действия биологических ответов, зависящих от скорости фотопревращения активных молекул.
- •4.3. Фотомодификация олигомерных и однокомпонентных белков под действием ультрафиолетового излучения.
- •4.3.1. Естественное (солнечное) ультрафиолетовое излучение.
- •4.3.2. Кинетика фотоинактивации белковых молекул.
- •4.3.3. Природа первичных продуктов фотолиза аминокислот и их остатков в белках.
- •Значения для
- •4.4. Действие ультрафиолетового излучения на биологические мембраны.
- •4.5. Действие ультрафиолетового излучения на нуклеиновые кислоты.
4.1.2. Кинетика однофотонных обратимых фотохимических реакций
Во многих случаях фотохимические процессы в биологических объектах носят обратимый характер и могут быть описаны схемой:
Иными словами, поглощение первого кванта излучения h1 молекулой М приводит к появлению продукта Р, который, поглотив второй квант излучения h2, трансформируется обратно в исходную молекулу М.
При подобных реакциях изменение концентрации молекул М (dN) во времени при облучении может быть описано следующим выражением:
(124)
(125)
В выражениях (124) и (125) - поперечное сечение фотомодификации молекулы М, а п – аналогичное поперечное сечение молекул продукта Р.
Решение дифференциального уравнения (125) после ряда алгебраических преобразований можно привести к виду:
(126)
При желании из уравнения (126) можно рассчитать концентрацию продукта Р (Nп=N0-N) при любой дозе облучения.
4.1.2. Кинетика многофотонных фотохимических реакций
Ряд фотохимических реакций протекают после поглощения исходной молекулой М последовательно более одного кванта излучения. Чаще всего это наблюдается в тех случаях, когда молекула после поглощения первого фотона переходит в долгоживущее триплетное состояние. Но, если интенсивность действующего на образец излучения достаточно высока, поглотить второй квант может и синглетно-возбужденная молекула. Результатом являются процессы, схема которых приведена ниже:
(а)
(б)
Суть этих процессов состоит в следующем: после поглощения первого фотона (h1) молекула М переходит в состояние триплетного (а) или синглетного (б) возбуждения. Эти возбужденные молекулы, в свою очередь, могут поглотить второй квант (h2), вследствие чего электрон в них переходит на следующий возбужденный уровень (триплетный Т1 или синглетный S2, см. рис. 1). Именно такая, «сверхвозбужденная», молекула и претерпевает структурную перестройку, приводящую к формированию продукта Р.
Кинетика подобных процессов может описана следующим выражением (рассматриваются триплетные возбуждения, но эти же выражения применимы и для синглетно-возбужденных состояний):
(127)
В выражении (127) NT – количество молекул в триплетном состоянии, qT – квантовый выход генерации триплетных состояний после поглощения молекулой М кванта h1, 1 – константа скорости образования конечного продукта Р (поперечное сечение фотохимического превращения молекулы М в состоянии триплета), - суммарная контанта скорости тушения триплетно-возбужденных молекул М, не связанного ее фотохимической перестройкой.
В реальных условиях в облучаемом образце быстро устанавливается стационарное состояние. В этом состоянии dNT/dt = 0. Отсюда можно получить следующее:
Предположим, что доза облучения невелика (равна Е0) и NN0. Тогда количество продукта Р можно выразить следующим выражением:
(128)
Из выражения (128) вытекает важная особенность многоквантовых фотохимических процессов: видно, что при Е0=const количество продукта Р увеличивается с ростом Jо. Иными словами, если при одноквантовых процессах результат облучения определяется только величиной дозы Е= Jоt, и при этом все равно, каким образом объект получил данную дозу, за счет воздействия небольшой интенсивностью Jо при большой продолжительности облучения, или путем воздействия большой Jо в течение малого времени, то при многоквантовых фотохимических процессах эквивалентность интенсивности и времени воздействия излучения не соблюдается. Количество образующегося фотопродукта в таких случаях чаще всего растет с ростом интенсивности действующего излучения.