Лабы / Литература для подготовки / Поливанова_ВЭЖХ_БАВ

5.3 Качественное и количественное определение кофеина в различных марках чая и кофе

1)Получить у лаборанта образцы чая (чайные пакетики) и кофе (1.5 г – 1 чайная ложка), а также стандартный образец кофеина для проведения анализа.

2)Заварить чайные пакетики и кофе 200 мл кипятка (чайные пакетики заваривать в течение 2-х мин).

3)Полученные растворы охладить и подготовить для анализа на хроматографе.

4)В программе тренажёр «Жидкостной хроматограф» подобрать оптимальные условия записи хроматограммы для кофеина (оптимизировать время (объём элюентов) и скорость проведения анализа) и сохранить данный метод.

5)Приготовить три раствора кофеина с известной концентрацией

(например: 0.1, 0.3 и 0.6 мг/мл).

6)Записать хроматограммы полученных растворов (по оптимальному методу).

7)Обработать хроматограммы в программе «МультиХром» и построить градуировочный график концентрационной зависимости кофеина.

8)Записать хроматограммы приготовленных растворов чая и кофе (по оптимальному методу), обработать хроматограммы в программе «МультиХром» и провести качественный и количественный анализ данных растворов на основании проведённой ранее градуировки.

9)Рассчитать количество кофеина в «чашке» кофе и чая. Сравнить полученные результаты между собой и с суточной нормой потребления кофеина (не более 300 мг). Сделать выводы. Подготовить отчёт по проведённому анализу и лабораторной работе в целом.

5.4.Качественное и количественное определение теобромина в напитке «матэ»

1)Получить у лаборанта образец листьев матэ (2.5 г – 1 чайная ложка), а также стандартный образец теобромина для проведения анализа.

2)Заварить матэ 150 мл кипятка в течение 7 мин.

3)Полученный раствор охладить и подготовить для анализа на хроматографе.

4)В программе тренажёр «Жидкостной хроматограф» подобрать оптимальные условия записи хроматограммы для теобромина (оптимизировать время (объём элюентов) и скорость проведения анализа) и сохранить данный метод.

5)Приготовить три раствора теобромина с известной концентрацией

(например: 0.1, 0.3 и 0.6 мг/мл).

6)Записать хроматограммы полученных растворов (по оптимальному методу).

7)Обработать хроматограммы в программе «МультиХром» и построить

51

градуировочный график концентрационной зависимости теобромина.

8)Записать хроматограмму приготовленного раствора матэ (по оптимальному методу), обработать хроматограмму в программе «МультиХром» и провести качественный и количественный анализ раствора на основании проведённой ранее градуировки.

9)Рассчитать количество теобромина в «чашке» матэ. Сравнить полученный результат с нормами и дозами потребления теобромина (для человека высшие дозы внутрь: разовая – не более 1 г, суточная – не более 3 г,

летальные дозы для животных: ЛД50(кошки) = 200 мг/кг, ЛД50(собаки) = 200 мг/кг). Сделать выводы. Подготовить отчёт по проведённому анализу и лабораторной работе в целом.

5.5. Качественное и количественное определение содержания витамина С в соках

1)Получить у лаборанта образец сока (1 мл), а также стандартный образец аскорбиновой кислоты (витамина С) для проведения анализа.

2)Пробирку с соком центрифугировать в течение 5 мин при 8000 об/мин, отобрать верхний прозрачный раствор в новую пробирку и центрифугировать ещё 3 мин, повторить данную процедуру ещё 2 раза. Отобрать 40 мкл полученного раствора в пробирку автодозатора и поместить её в ячейку прибора.

3)Приготовить три раствора аскорбиновой кислоты с известной концентрацией (например: 0.1, 0.3 и 0.6 мг/мл).

4)Записать хроматограммы полученных растворов по следующему методу: скорость потока при элюции 150 мкл/мин, суммарный объём элюента 2000 мкл, градиентное элюирование: начало – 5 % Б, 1 шаг – 1800 мкл,

градиент 5 – 100 % Б, 2 шаг – 2000 мкл, 100 % Б.

5)Обработать хроматограммы в программе «МультиХром» и построить градуировочный график концентрационной зависимости аскорбиновой кислоты.

6)Записать хроматограмму приготовленного раствора сока (по предложенному методу), обработать хроматограмму в программе «МультиХром» и провести качественный и количественный анализ раствора на основании проведённой ранее градуировки.

7)Рассчитать содержание аскорбиновой кислоты в данном соке. Сравнить полученный результат с данными, заявленными на упаковке сока. Сделать выводы. Подготовить отчёт по проведённому анализу и лабораторной работе в целом.

52

Контрольные вопросы для допуска к лабораторной работе

1.Основные принципы жидкостной хроматографии. Особенности высокоэффективной жидкостной хроматографии.

2.Хроматограмма, хроматографический пик. Основные хроматографические параметры: нулевая линия, шум, дрейф нулевой линии, площадь пика, высота пика.

3.Хроматограмма, хроматографический пик. Основные хроматографические параметры: мёртвый объём колонки, приведённый объём удерживания вещества, абсолютное время удерживания вещества, мёртвое время, приведённое время.

4.Хроматограмма, хроматографический пик. Основные хроматографические параметры: эффективность колонки, число теоретических тарелок хроматографической колонки, высота, эквивалентная теоретической тарелке, приведённое число теоретических тарелок, приведённая высота, эквивалентная теоретической тарелке.

5.Хроматограмма, хроматографический пик. Основные хроматографические параметры: фактор удерживания вещества, селективность колонки, коэффициент асимметрии, разрешение пиков, экстраколоночное расширение пика, эффективность колонки.

6.Хроматограмма, хроматографический пик. Основные хроматографические параметры: эффективность и селективность. Сочетание селективности и эффективности при подборе оптимальных условий разделения веществ.

7.Основные принципы молекулярной адсорбционной хроматографии. Нормально-фазовая и обращёно-фазовая жидкостная хроматография.

8.Принципы и преимущества обращёно-фазовой жидкостной хроматографии.

9.Принципы обращёно-фазовой жидкостной хроматографии. Механизм

разделения в обращёно-фазовой жидкостной хроматографии.

10.Принципы обращёно-фазовой жидкостной хроматографии. Характеристики неподвижной фазы в обращёно-фазовой жидкостной хроматографии.

11.Принципы обращёно-фазовой жидкостной хроматографии. Характеристики подвижной фазы в обращёно-фазовой жидкостной хроматографии.

12.Общая принципиальная схема и описание работы жидкостного хроматографа. Виды жидкостных хроматографов.

13.Хроматографическая колонка. Сорбенты для нормально-фазовой и обращёно-фазовой ВЭЖХ.

14.Основные типы насосов, используемые в жидкостных хроматографах. Градиентное элюирование. Схема реализации принципа градиентного элюирования в жидкостном хроматографе.

15.Способы инжекции пробы в жидкостном хроматографе.

16.Детекторы для жидкостных хроматографов. Спектрофотометрический, флуориметрический, амперометрический и кондуктометрический детекторы.

17.Детекторы для жидкостных хроматографов. Масс-спектрометрический,

53

флуориметрический, амперометрический и кондуктометрический детекторы. 18. Особенности пробоподготовки для проведения анализа методом ВЭЖХ. 19.Особенности пробоподготовки образцов крови для анализа содержания

лекарственных препаратов методом ВЭЖХ. Дериватизация. 20.Хроматографы «Милихром А-02» и «Альфахром»: принципиальная схема,

отличительные особенности, основные операции цикла анализа.

21.Валидация методики хроматографического анализа. Определение веществ по базе данных «ВЭЖХ-УФ».

Литература

1.Хроматограф жидкостной микроколоночный «Милихром А-02». Руководство по эксплуатации. Новосибирск : «ЭкоНова», 2009. 95 с.

2.МультиХром для Windows 9х & NT, Версия 1.5х-Е доп. 2.4 спектр. Программный комплекс для обработки хроматографических данных. Руководство пользователя. Новосибирск : «АМПЕРСЕНД», «ЭкоНова», 2009. 137 с.

3.Сычёв С. Н., Сычёв К. С., Гаврилина В. А. Высокоэффективная жидкостная хроматография на микроколоночных хроматографах серии «Милихром». Орёл : ОрёлГТУ, 2002. 134 с.

4.Сычёв К. С. Методы высокоэффективной жидкостной хроматографии и твёрдофазной экстракции. М. : ЗАО «Найтек Инструмента», 2006. 167 с.

5.Сычёв К. С. Практическое руководство по жидкостной хроматографии. М. : ТЕХНОСФЕРА, 2010. 280 с.

6.Барам Г. И. ВЭЖХ для всех. Лекции. Новосибирск : «ЭкоНова», 2006. 116 с.

7.Садек П. С. Как избежать ошибок в высокоэффективной жидкостной хроматографии. Лабораторное пособие / пер. с англ. И. А. Дубинского. М. : ЗАО «Найтек Инструмента», 2006. 432 с.

8.Садек П. С. Растворители для ВЭЖХ / пер. с англ. А. А. Горбатенко, Е. И. Ревиной. М. : БИНОМ. Лаборатория знаний, 2006. 704 с.

9.Шаповалова Е. Н., Пирогов А. В. Хроматографические методы анализа.

В. Ф. Селеменев, А. А. Приданцев. Воронеж : «Водолей», 2004. 528 с.

12.Руденко Б. А., Руденко Г. И. Высокоэффективные хроматографические процессы. Т. 2. Процессы с конденсированными подвижными фазами. М. :

Наука, 2003. 145 с.

13.Kromidas S. HPLC. Made to measure. A practical handbook for optimization. WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, 2006. 760 p.

54

14.McMaster M. C. HPLC. A practical user’s guide. Second ed. WILEYINTERSCIENCE A John Wiley & Sons, Inc., Publication, 2007. 176 p.

15.Wixom R. L., Gehrke C. W. Chromatography. A science of discovery. WILEYINTERSCIENCE A John Wiley & Sons, Inc., Publication, 2010. 436 p.

55

Учебное издание

Поливанова Анна Геннадьевна

Высокоэффективная жидкостная хроматография

биологически активных веществ

Лабораторный практикум

Редактор: Н. А. Заходякина

Подписано в печать __.__.__. Формат 60 × 84 1/16

Усл. печ. л. 4.45, Уч.-изд. л. 3.75. Тираж 150 экз. Заказ

Российский химико-технологический университет имени Д.И. Менделеева

Издательский центр

Адрес университета и издательского центра:

125047 Москва, Миусская пл., 9

56