9. Диагностика
Диагноз на риккетсиоз у крупного рогатого скота ставят на основании эпизоотологических, клинических данных и результатов лабораторных исследований.
Для первичной оценки патологического процесса проводят микроскопию мазков-отпечатков из пораженных органов (глаз, плацента, наружные половые органы, и т.д.), окрашенных по Романовскому-Гимза. В них наряду с характерными для каждого органа и ткани клетками, обнаруживают изменения, свойственные серозному, серозно-катаральному или гнойному воспалению. В поле зрения микроскопа среди слущенных эпителиальных клеток, лейкоцитов и лимфоцитов видны кокковидная и палочковидная микрофлора.
В цитоплазме разрушающихся макрофагов и отдельных десквамированных эпителиоцитов выявляются кокковидные, палочковидные, иногда нитевидные формы микроорганизмы синего цвета (рис. 11).
Для обнаружения риккетсий мазки-отпечатки окрашивают по Здродовскому – карбофуксином, в результате чего возбудитель принимает рубиново-красный, а клеточные элементы – голубой или синий цвет. Риккетсии можно выявлять окраской по Маккиавелло, Стемпу, Зотову и Блинову, Морозову и др.
К
ЛАССИФИКАЦИЯ
РИККЕТСИОЗА
Риккетсиоз
Рис.3. Классификация риккетсиоза
Для лабораторной диагностики используют РСК (РДСК) и реже – РА, а также: реакцию микроагглютинации с диагностикумом из коксиелл Бернета, меченым изотиоционатом флуоресцина, реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА), непрямой метод флуоресцирующих анител (НМФА) и кожную аллергическую пробу. Указанные реакции могут быть использованы для оценки эффективности вакцинации.
Комплементсвязывающие антитела в диагностическом титре (1:10 и выше) выявляются на 12-14 дни болезни. После переболевания специфические антитела в титрах (1:10; 1:40) сохраняются длительно. При ретроспективной диагностике необходимо проводить исследование в РСК не менее двух раз с интервалом в 15 дней.
При ранней диагностике риккетсиоза используют метод люминесцентной микроскопии, существенно повышающий выявление источника возбудителя инфекции. Исследование методом флуоресцирующих антител (МФА) осуществляют в прямой реакции или в ее непрямой модификации с использованием сухих люминесцирующих сывороток против коксиеллы Бернета. Положительным результатом считается обнаружение в поле зрения микроскопа не менее 5 светящихся риккетсий.
При диагностике риккетсиоза используют методы: PSR-DNK амплификации и модифицированный иммуноферментный с моноклональными антителами – CAPTURE ELISA.
Электронно-микроскопическое исследование биологического материала выявляет в фаголизосомах макрофагов риккетсии различной величины и формы (Рис. 12). В пораженном головном мозге (рис. 13), в жидкости передней и задней камер глаза О.М. Ласкина и В.В. Гусев так же наблюдали риккетсий (рис. 14). Морфологическим дифференциально-диагностическим признаком клеточного риккетсиоза является наличие вакуолей в пораженных риккетсиями клетках.
Окончательный диагноз на риккетсиоз подтверждается биологической пробой на морских свинках, заражением 5 – 6-дневных куриных эмбрионов в желточный мешок по Коксу.
Рис. 12. Риккетсии в цитоплазме макрофага куриного эмбриона.
Электронограмма (по В.А. Черваневу).
При диагностике риккетсиоза следует руководствоваться «Санитарными правилами по безопасности работы с микроорганизмами I и II групп патогенности. 1.2.011-94. Госкомсанэпиднадзор России, Минсельхозпрод России». - М., 1996.