Раздел: патология системы крови

Тема: Количественный и качественный анализ красной крови.

Анемией (малокровием) называется уменьшение числа эритроцитов (олигоцитемия) и количества гемоглобина (олигохромемия) в единице объема крови. При анемиях может изменяться и качественный состав эритроцитов, появляются патологические формы кровяных телец, отличающиеся от нормальных эритроцитов своей величиной, формой, насыщенностью гемоглобином. Общий объем крови при анемии остается нормальным или уменьшается.

Таблица 1

Уровень гемоглобина и количества эритроцитов

у здоровых животных (Кудрявцев, 1976 год).

Вид животного	Содержание
	Эритроцитов млн/мм3	Гемоглобина, г%
Лошадь	6,0-9,0	8,0-14,0
Крс	5,0-7,5	9,0-11,0
Овца	7,0-12,0	7,0-11,0
Собака	5,2-8,4	11,0-17,0
Кролик	4,5-7,5	10,5-12,5
Курица	3,0-4,0	8,0-12,0

Причины анемии многообразны: потеря крови, инфекционные болезни, неполноценное питание (количественное и качественное), действие глистных токсинов, гемолитических ядов. Анемию можно вызвать экспериментально у лабораторных животных (собак, кроликов) и изучить острую и хроническую постгеморрагическую анемию, а также острую и хроническую анемию гемолитического типа.

Ангидремия — уменьшение общей массы крови за счет потери большого количества воды.

Анизацитоз — неравная величина эритроцитов.

Анизохромия — наличие эритроцитов с различной степенью окраски вследствие неодинакового содержания в них гемоглобина.

Акапния — понижение содержания углекислоты в крови.

Гипоксия — понижение содержания кислорода в тканях.

Гипоюсемия — снижение содержания кислорода в крови.

Гемопоэз — образование форменных элементов крови (кроветворение).

Олигемия — уменьшение общего количества крови в организме после внезапных кровопотерь.

Олигоцитемия — понижение количества форменных элементов крови.

Плетора — увеличение общего количества крови в организме.

Пойкилоцитоз — появление в крови эритроцитов разнообразной формы и величины.

Полицитемия — увеличение количества эритроцитов в крови.

Эритропоэз — образование эритроцитов в костном мозге.

Цель занятия: изучить изменения форменных элементов красной крови, СОЭ, ОРЭ и цветного показателя при экспериментальных анемиях.

Опыт 1. Экспериментальная анемия гемолитического типа.

Порядок работы. За несколько дней до практического занятия кролику ежедневно 3—4 раза подкожно вводят 1% раствор солянокислого фенилгидразина в возрастающей дозе (от 0,25 до 0,75— 1,0 мл) под контролем содержания гемоглобина в крови. Для получения экспериментальной токсической анемии собаке вводят под кожу какой-нибудь гемолитический яд, обычно 20—30 мл 5% раствора солянокислого фенилгидразина (иногда приходится повторять). Для изучения появляющихся при этом изменений крови подсчитывают количество эритроцитов, определяют уровень гемоглобина, устанавливают цветной показатель и морфологически исследуют окрашенные мазки.

Опыт 2. Определение количества гемоглобина

при помощи гемоглобинометра.

Порядок работы. Гемоглобинометр имеет два цветных стандарта и градуированную пробирку: с одной стороны процентная шкала, с другой — г%. Цифра 100% соответствует 16,67 г % гемоглобина.

В градуированную пробирку до метки 0 наливают 0,1 н раствор соляной кислоты. Гемоглобиновым капилляром набирают кровь до метки 0,02 мл, тщательно обтирают кончик капилляра от приставшей крови и как бы подслаивают кровь под соляную кислоту, верхним чистым слоем кислоты промывают капилляр для более полного внесения пробы крови. Смесь пробирки тщательно смешивают путем легкого встряхивания и оставляют стоять в течение 5 мин. Образующийся солянокислый гематин окрашивает содержимое пробирки в коричнево-желтый цвет. Прибавлением по каплям той же соляной кислоты или дистиллированной воды выравнивают цвет жидкости в пробирке с цветом стандартов и получают ответ по содержанию гемоглобина в г% или %. Определение проводят при дневном свете по нижнему краю мениска.

Опыт 3. Определение количества эритроцитов.

Порядок работы. Из прокола краевой вены, предварительно обработанного эфиром, уха кролика набирают в эритроцитарный смеситель (с красной бусинкой в расширении) кровь до метки 0,5 и разводят 1% раствором поваренной соли до метки 101 (разведение в 200 раз). Полученную смесь встряхивают в течение 2—3 мин. Первые 2—3 капли, которые находятся в капилляре и не перемешиваются, выпускают на вату; 3— 4-ю каплю наносят на предметный столик камеры под предварительно притертое стекло. Капля должна равномерно заполнить камеру, излишки отсасывают ватой.

Подсчет эритроцитов проводят под микроскопом с объективом 40 в 5 больших квадратах сетки Горяева, каждый из которых разделен на 16 малых квадратов (80 малых квадратов). При выборе квадратов учитывают максимальность охвата площади сетки Горяева (по диагонали или по углам и в центре). В избранных квадратах подсчитывают все эритроциты, находящиеся внутри квадрата и на пограничных линиях, если они больше чем на половину заходят внутрь квадрата.

По числу эритроцитов, имеющихся в 80 малых квадратах, вычисляют их количество в 1 мм³ крови. Для вычисления пользуются формулой

Х = а  4000  в / б

где X — искомое количество эритроцитов;

а — сумма эритроцитов в 5 больших квадратах;

б — количество сосчитанных малых квадратов;

в — разведение крови (в 100 или 200 раз);

4000 — множитель, приводящий объем столбика жидкости в границах малого квадрата к 1 мм³.

Опыт 4. Определение цветного показателя крови.

Цветной показатель — это степень насыщения эритроцитов гемоглобином. При нормальном состоянии он близок к 1. Для определения цветного показателя крови необходимо знать число эритроцитов и количество гемоглобина у здорового и испытуемого (опытного) животного. Вычисляют его по формуле

ЦП = эритроциты нормы  гемоглобин опыта

эритроциты опыта  гемоглобин нормы

Опыт 5. Изучение патологических форм эритроцитов

Изучают мазки с нормальными и патологическими формами эритроцитов под микроскопом с иммерсионной системой. Сравнивают картину крови этих препаратов. Обращают внимание на окраску форменных элементов, красной крови, их размеры и форму. Зарисовывают увиденную картину.

Тема: Осмотическая резистентность и скорость

оседания эритроцитов в норме и при патологии.

Под осмотической резистентностью эритроцитов (ОРЭ) понимают устойчивость их к гипотоническим растворам хлористого натрия. Различают минимальную и максимальную осмотическую резистентность: в первом случае гемолизу подвергаются только эритроциты, обладающие наименьшей резистентностью, во втором случае все эритроциты теряют гемоглобин, т. е. наступает полный гемолиз крови. ОРЭ зависит от белково-липидной оболочки эритроцитов, их возраста. Оболочка эритроцитов проницаема для воды и непроницаема для белков и коллоидов. Эритроциты, помещенные в изотонический физиологический раствор хлористого натрия (0,85%), сохраняют свой состав.

В гипотоническом растворе эритроциты поглощают воду, увеличиваются в объеме и, наконец, разрушаются, и гемоглобин выходит из эритроцитов в раствор. Концентрация хлористого натрия, в котором начинается гемолиз, служит мерой устойчивости осмотической резистентности эритроцитов. ОРЭ у животных поддерживается на определенном уровне (табл. 2).

Таблица 2

Осмотическая резистентность эритроцитов у здоровых

животных раствор хлористого натрия, %).

Вид животного	Осмотическая резистентность эритроцитов
	максимальная	мнимальная
Лошадь	0,39	0,58
КРС	0,43	0,66
МРС	0,43	0,66
Свинья	0,46	0,76
Собака	0,33	0,46
Кролик	0,33	0,44
Курица	0,32	0,49

Гемолиз — разрушение стромы эритроцитов с выделением из них гемоглобина.

Цель занятия: ознакомиться с методами определения осмотической резистентности эритроцитов (ОРЭ) и скоростью оседания эритроцитов (ООЭ).

Опыт 1. Метод определения осмотической

резистентности эритроцитов.

Принцип метода. Эритроциты в гипотонических растворах набухают, лопаются, гемоглобин выходит из них в окружающую жидкость (происходит гемолиз).

В 24 пробирки наливают 1% раствор в нисходящих дозах: в первую — 0,7, в последнюю — 0,24 мл (в каждой по следующей пробирке раствора меньше на 0,02 мл), и доливают дистиллированной водой до 1 мл. Получается ряд пробирок с постепенно снижающейся концентрацией хлористого натрия.

Затем в каждую пробирку добавляют по одной капле крови (можно дефибринированной), содержимое пробирок тщательно размешивают и оставляют их на 15-мин. на столе при комнатной температуре. После этого отмечают концентрацию поваренной соли в двух пробирках: в одной раствор поваренной соли начинает окрашиваться в желтый цвет (минимальная резистентность), в другой раствор окрашивается в интенсивно красный цвет (полный гемолиз — максимальная резистентность).

Опыт 2. Техника определения скорости оседания

эритроцитов (СОЭ) по методу Панченкова (табл. 3).

Порядок работы. Форменные элементы крови находятся в ней в виде суспензии. Если кровь предохранить от свертывания, то в течение определенного времени происходит оседание всех ее форменных элементов (эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов). Разделение крови на плазму и форменные элементы колеблется в определенных пределах и зависит от белкового состава крови, вязкости, содержания в крови холестерина, лецитина.

Таблица 3

Показатели СОЭ у здоровых животных (мм/ч)

Вид животного	Время, мин.
	15	30	45	60
Лошадь	40	40	60	64
КРС	0,1	0,2	0,4	0,5
МРС	0,2	0,4	0,6	0,8
Свинья	3	8	20	30
Собака	0,2	0,7	0,9	2,5
Кролик	0,2	10	17	25
Курица	2	10	17	25

Принцип метода. Кровь, предохраненная от свертывания при стоянии, разделяется на два слоя: нижний слой, состоящий из осевших на дно эритроцитов, и верхний, состоящий из прозрачной плазмы.

В капилляр аппарата Панченкова набирают 5% раствор лимоннокислого натрия до метки Р (раствор) и выдувают его на часовое стекло. Далее дважды набирают в тот же капилляр до метки К кровь и выдувают ее на часовое стекло с лимоннокислым натрием и тщательно перемешивают. Отношение лимоннокислого натрия и крови 1:4. Полученной цитратной кровью наполняют капилляр до метки К и помещают в штатив аппарата Панченкова на час. Через некоторое время эритроциты начинают оседать на дно пипетки, а поверх них образуется слой плазмы, толщина которого измеряется миллиметровыми делениями на капилляре (мм/ч).

Оснащение: животные, дистиллированная вода, 1 % раствор - хлористого натрия, 5% раствор лимоннокислого натрия, часовые стекла, кровь, прибор Панченкова, пипетки с делениями до 0,01 и на 1 мл, штативы, пробирки.

Тема: Лейкоцитозы. Лейкопения.

Лейкоцитоз – характеризуется увеличением общего количества лейкоцитов в единице объема крови по сравнению с физиологической нормой.

Лейкопения – характеризуется уменьшением общего количества лейкоцитов в единице объема крови по сравнению с физиологической нормой.

Цель занятия: изучить изменения состава периферической крови как ответной реакции кроветворных органов на действие раздражителя.

Опыт. Определение количества лейкоцитов.

Порядок работы. Для опыта берут двух кроликов одинакового веса. Одному вводят внутрибрюшинно смесь, состоящую из 5 мл охлажденного кипяченого молока и 5 мл физиологического раствора, другому — смесь, состоящую из 5 мл молока и 5 мл 1 % раствора новокаина. Количество лейкоцитов в периферической крови исследуют до опыта и дважды с интервалами в 30 мин. после введения молока. Кроме того, исследуют количество лейкоцитов в образце периферической крови с лейкопенией. Для подсчета лейкоцитов используют меланжер с белой бусинкой в расширении. Кровь берут до метки 0,5 (разведение 20 раз), разбавляют 3% раствором подкрашенной уксусной кислоты до метки 11 и встряхивают в течение 2—3 мин. Первые 2—3 капли выпускают на вату, последующие наносят на счетную камеру Горяева под предварительно притертое покровное стекло. Подсчет лейкоцитов проводят под микроскопом с объективом 40 в 100 больших квадратах, не деленных на маленькие, но соответствующих 1 600 малым квадратам.

По числу лейкоцитов, исследуемых в 100 квадратах, вычисляют их количество в 1 мм³ крови.

Для вычисления пользуются формулой

Х = а  4000  в / б

где X — количество лейкоцитов в 1 мм³ крови;

а — количество лейкоцитов в 100 квадратах;

б - число малых квадратов, содержащихся в 100 больших;

в - разведение крови (в 10 или 20 раз);

4000 - постоянный коэффициент.

Тема: Лейкоцитарная формула и ее изменение

при патологии. Лейкозы.

Лейкоцитарная формула — это процентное соотношение различных форм лейкоцитов крови. При определенных патологических процессах наблюдаются изменения в лейкоцитарной формуле (табл. 4).

Лейкоформула пишется в строку по начальным буквам названия лейкоцитов:

Таблица 4

Лейкоцитарная формула здоровых животных (Кудрявцев, 1974 год)

Вид животно-го	Базо-филы	Эозино-филы	Нейтрофилы			Лимфоци-ты	Моноци-ты
			Ю	П	С
Лошадь	1,0	4,0	-	4,0	54,0	34,0	3,0
КРС	1,0	6,5	0,5	3,0	28,0	57,5	3,5
Овца	0,5	7,5	1,0	4,0	40,0	45,0	3,0
Свинья	0,5	2,5	1,0	3,0	44,0	45,0	4,0
Собака	0,5	6,0	-	4,0	55,0	31,0	3,5
Кролик	1,0	2,0	-	7,0	27,0	56,0	7,0
Мышь	1,0	2,0	-	3,0	23,0	68,0	3,0

Лейкозы - системное заболевание органов кроветворения бластоматозного (опухолевого) происхождения. Бывает: лимфоидный, миелоидный, ретикулоэндотелиальный.

Цель занятия: изучить нормальные и патологические форменные элементы белой крови, изучить морфологические изменения крови при лейкозах и показать диагностическую и прогностическую ценность клинического исследования периферической крови.

Опыт. Подсчет и запись лейкоцитарной формулы.

Порядок опыта. На предметное стекло наносят каплю крови из краевой вены уха и делают мазок. Мазок делают специальным шлифовальным стеклом или покровным стеклом на обезжиренном предметном стекле. Предметное стекло удобнее держать в левой руке большим и указательным пальцами за короткие ребра. Покровное стекло удерживают по середине края большим и указательным пальцами правой руки, так чтобы они касались длинных ребер предметного стекла и ограничивали движение покровного стекла в стороны. Поверхность одного конца предметного стекла приводят в соприкосновение с каплей крови (покровное ставят вертикально на конец предметного, рядом с каплей, и наклоняют до соприкосновения с ней). Капля должна растекаться в углу, образованном двумя стеклами. После этого ведут косо удерживаемым покровным стеклом по предметному, размазывая каплю тонким слоем. Приготовленный мазок высушивают на воздухе, фиксируют в метиловом спирте или в смеси Никифорова (эфир серный + спирт этиловый в соотношении 1:1) 3—5 минут. Окраску производят, заливая мазок краской Романовского—Гимзы на 30—40 минут. Краску смывают водой. Мазок высушивают фильтровальной бумагой и изучают в иммерсионной системе микроскопа. Подсчет лейкоцитарной формулы ведут по мазкам крови. Для этого мазок крови мысленно делят на три части. В месте проведения мнимой линии наносят каплю иммерсионного масла и исследуют под микроскопом. В мазке определяют четыре таких места. В каждом месте считают 25 или 50 различных лейкоцитов (всего 100 или 200 клеток). Исследование мазка проводят по системе лабиринтов, начиная с края мазка вглубь и вновь на край. Такая система исследования объясняется тем, что лейкоциты в силу своих физических свойств располагаются не одинаково: лимфоциты — в глубине мазка, нейтрофилы и моноциты — по краю.

Каждый замеченный лейкоцит немедленно записывают или откладывают на счетной машине.

РАЗДЕЛ: ПАТОЛОГИЯ ОБЩЕГО КРОВООБРАЩЕНИЯ

Тема: Сердечная недостаточность кровообращения.

Цель занятия: показать условия, способствующие возникновению сердечной недостаточности кровообращения.

Опыт. Глазосердечный рефлекс.

Порядок работы. Опыт проводится на студентах. У испытуемого по пульсу подсчитывают количество сокращений сердца за 1 минуту. Затем накладывают обе руки к боковым поверхностям головы и большими пальцами одновременно и медленно надавливают на оба глазные яблока в течение 5—8 с. После этого вновь подсчитывают пульс и сравнивают с исходными данными. Пульс может замедляться до 20 ударов в минуту.

Рефлекторная дуга этого рефлекса представлена:

а) чувствительными волокнами глазодвигательного нерва;

б) продолговатым мозгом;

в) волокнами блуждающего нерва.