6. Клональное микроразмножение и укоренение побегов земляники. Адаптация растений-регенерантов к выращиванию в почве

При регенерации из каллусов каждый образовавшийся адвентивный побег может нести интересные сомаклональные изменения. Чтобы из­бежать потери ценного генотипа, проводят размножение in vitro ­полученных побегов. Технология клонального микроразмножения рас­тений, в том числе земляники, разработана достаточно хорошо [12-14, 17, 65].

Регенерированные из каллусов или иных эксплантов адвентивные побеги в ламинарном боксе отделяют скальпелем от каллуса или исходного экспланта и каждый отдельный побег переносят в отдельную пробирку или колбу со средой для размножения.

Обычно для клонального микроразмножения растений земляники используют среду Мурасиге и Скуга с добавлением 0,5 - 1,0 мг/л 6-БАП. Ауксины исключают.

Культивирование проводят при t = 25±2° С и 16-часовом световом дне. В каждом культуральном сосуде в течение месяца образуется некоторое количество побегов генетически идентичных исходному. Число побегов в аналогичных условиях различно у разных генотипов. Процедуру размножения повторяют до получения необходимого числа побегов. Полученные побеги укореняют.

Укоренение побегов земляники проводят также на среде Мурасиге и Скуга. Рекомендуется уменьшать в два раза количество мине­ральных солей и до 20 г/л количество сахарозы в среде для ризогенеза [16]. Из среды исключают цитокинины и добавляют в нее ауксины. Ризогенез земля­ники лучше всего происходит в присутствии ИМК в концентрации 0,5-1 мг/л. Однако он может проходить и на безгормональной среде.

Пересадку на среду для укоренения проводят в стерильных усло­виях по одному побегу на один культуральный сосуд. Условия куль­тивирования: температура 25±2°С и 16-часовой световой день. Через 15-30 дней побеги образуют достаточно мощные корни, и сформировавшиеся растения-регенеранты могут быть высажены в грунт.

Методы адаптации пробирочных растений, к условиям выращивания в почве описаны в ряде руководств [13, 14, 61, 66]. Однако все описанные приемы требуют совершенствования и уточнения, так как значительная часть растений-регенерантов погибает именно на этапе адаптации.

Рекомендуется для переноса в почву отбирать достаточно круп­ные растения-регенеранты с развитой корневой системой и развитым листовым аппаратом. Возможна адаптация побегов и без корней, но конечный выход растений будет ниже. Перед высадкой в грунт интен­сивность освещения пробирочных растений рекомендуется увеличить до 5000-8000 люкс. С кулътуральных сосудов за 3-4 дня до высадки нужно снять пробки.

Растения извлекают из культуральных сосудов, их корни отмыва­ют от среды в дистиллированной воде или слабом растворе перманганата калия.

Затем растения рекомендуется высаживать в горшочки или пластиковые контейнеры со стерильным субстратом, состоящим из земли, торфа и песка в соотношении 1:1:1, и инкубировать при 25±2°С и 16-часовом световом дне [16]. Через три недели их можно перенести в теплицу.

Наш опыт показывает, что более целесообразно высаживать растения-регенеранты из пробирок непосредственно в пленочную теплицу с воздушно-капельным орошением. Высадку удобно проводить в середине июня. В солнечные дни теплицу следует затенять. Приблизительно че­рез 3-4 недели растения адаптируются и даже начинают давать усы, в силу чего не следует высаживать рядом экспланты, регенерирован­ные из разных каллусов и предназначенные для индивидуального морфобиологического изучения.

Таким способом нам удалось адаптировать для произрастания в почве 85 % высаженных растений-регенерантов земляники сорта Уро­жайная ЦГЛ и 72 % растений-регенерантов сорта Фейерверк.