Основные методы диагностики ротавирусных гастроэнтеритов

Методы определения ротавируса

• Реакция торможения гемагглютинации

• Методы определения вирусных

• Иммуноферментный анализ антигенов

Метод непрямой иммунофлюоресции

• Иммунофлюоресцентный метод

• Реакция латекс-агглютинации

• Иммуноферментный анализ

• Реакция непрямой гемагглютинации

• Реакция коагглютинации

Методы определения вирус-специфических РНК

• Метод гибридизации

• Полимеразная цепная реакция

Методы определения антител к компонентам ротавирусов

• Прямая электронная микроскопия

• Реакция связывания комплемента

• Иммуноэлектронная микроскопия

Исследования последних лет свидетельствуют о том, что одним из наиболее перспективных методов диагностики вирусных ГЭ является полимеразная цепная реакция (ПЦР), чувствительность и специфичность которой оцениваются исключительно высоко. В научных исследованиях эти методы используются достаточно широко, однако пока ни один из них не зарегистрирован в нашей стране.

Лечение вирусных гастроэнтеритов. Несмотря на то что основные возбудители вирусных ГЭ уже известны, методы этиотропной терапии по-прежнему не разработаны. Если учесть скоротечность развития вирусных ГЭ, можно предположить, что в ближайшие десятилетия этиотропная терапия вряд ли сможет занять достойное место в лечении этих больных. Куда большее внимание на сегодняшний день уделяется разработке вакцин для профилактики вирусных ГЭ. Если ротавирусные вакцины уже разработаны и применяются в ряде стран, то в отношении других вирусов вакцины находятся только в стадии разработки. Целесообразность госпитализации больных в стационар определяется клинико-эпидемическими показаниями.

Таким образом, лечение больных с вирусными ГЭ строится на принципах патогенетической терапии. Выбор наиболее оптимального способа лечения больных зависит от своевременной диагностики, а точнее, лабораторной верификации вирусного генеза заболевания. Несмотря на то что промывание желудка у больных с бактериальными ГЭ, проводимое в первые часы заболевания, способствует улучшению самочувствия больных, при вирусных ГЭ эффективность этого мероприятия крайне низка.

Из немедикаментозных методов лечения важное место отводится диетотерапии, что определяется патофизиологическими механизмами развития диарейного синдрома. На высоте клинических проявлений заболевания следует исключить из пищи молоко и молочные продукты, ограничить прием углеводов, сахара, овощей и фруктов. По мере купирования клинических признаков заболевания диета постепенно расширяется. Учитывая, что в острый период заболевания у больных формируется ферментопатия, целесообразно назначать им комбинированные ферментные препараты, такие, как фестал, панзинорм, мезим форте и другие. Обоснованной является также терапия адсорбирующими и вяжущими препаратами, которые, в частности, способствуют оформлению кала и урежению кратности дефекации, хотя это мало влияет на развитие дегидратации. К числу таких средств относятся полифепан, смекта, препараты висмута и другие.

В литературе имеются указания на положительное влияние на течение вирусных ГЭ различных пробиотиков. Патофизиологическим обоснованием их применения у больных с вирусными ГЭ служит тот факт, что штаммы, входящие в состав пробиотиков, самым непосредственным образом участвуют в процессах пищеварения, обмена веществ и детоксикации. Кроме того, у больных могут выявляться дисбиотические изменения в кишечнике.

Поскольку основным проявлением вирусных ГЭ, определяющим тяжесть течения заболевания, является дегидратация, купирование обезвоживания составляет основу патогенетической терапии. Принципы регидратационной терапии на сегодняшний день разработаны достаточно хорошо и носят универсальный характер. В зависимости от степени дегидратации регидратацию проводят пероральным или внутривенным способом.

Пероральная регидратационная терапия проводится в том случае, если у больных отсутствуют выраженные системные проявления обезвоживания. Она проводится глюкозоэлектролитными растворами (цитроглюкосоланом, регидроном и другими), которые принимаются дробно, по 1–1,5 л в час.

Внутривенная терапия назначается больным в случае выраженных системных проявлений или при наличии неукротимой рвоты, затрудняющей оральную регидратацию. Эта терапия проводится сбалансированными полиионными кристаллоидными растворами, такими, как трисоль, квартасоль, хлосоль и другие. Объем вводимых растворов и скорость их введения определяются степенью обезвоживания. В тех случаях, когда у больных проявления интоксикации доминируют над симптомами обезвоживания, допускается введение коллоидных растворов (гемодеза, реополиглюкина и других).

Заключение. Накопленные к сегодняшнему дню данные наглядно свидетельствуют о существенном удельном весе вирусных ГЭ в патологии человека. К числу установленных возбудителей вирусных ГЭ относятся ротавирусы, калицивирусы человека, кишечные аденовирусы и астровирусы, однако этот список далеко не полный. Даже применение современных молекулярно-генетических методов диагностики позволяет верифицировать диагноз только в половине регистрируемых случаев острых небактериальных ГЭ. Последнее может служить наглядным свидетельством недостаточной изученности этой группы инфекционных болезней.

На основании вышеизложенного следует сделать вывод, что при любых вспышках ОКИ, особенно возникающих в детских организованных коллективах, пациентов необходимо обязательно обследовать на вирусную этиологию (включая весь спектр известных вирусов, а не только на ротавирусы), что позволит оптимизировать не только способы лечения больных, но и противоэпидемические мероприятия.

Вакцинопрофилактика ротавирусной инфекции у детей. В настоящее время установлено, что после перенесенной ротавирусной инфекции иммунный ответ развивается по классическому типу с ранним повышением специфических антител, обнаруживаемых в сыворотке крови уже с 3-го дня и до 5-й недели от начала болезни. Специфические IgG антитела обнаруживаются после 10-го дня и сохраняются в течение нескольких лет. Гуморальные антитела не обеспечивают полной защиты от инфекции, но предупреждают развитие тяжелой диареи. Основную роль в защите от инфекции играют секреторные lgA-антитела, вырабатываемые плазматическими клетками стенки кишечника. Таким образом, при ротавирусной инфекции, как и при других кишечных инфекциях, основную протективную роль играет местный (кишечный) иммунитет, что и определяет основное направление в разработке оральных вакцинных препаратов, направленных на выработку местного, кишечного иммунитета.

На первом этапе создания вакцинных препаратов против ротавирусной инфекции ученые исходили из того, что ротавирусы животных не вызывают заболевание у человека, но имеют сходные группоспецифические антигены. Исходя из этого, в качестве кандидатов в вакцины использовались аттенуированные гетерологичные ротавирусы крупного рогатого скота, адаптированные к тканевым культурам (вакцинный штамм RIT 4237, WC3) и резусов (вакцинный штамм RRV-1).

Клинические испытания этих вакцин, проведенные во многих странах (Швеция, Финляндия, США, Перу, Гамбия, Руанда и др.) показали, что их протективная активность не одинакова на различных территориях. Они обеспечивали защиту от всех ротавирусных диарей у 50-60% привитых в Финляндии, 33% в Гамбии, у 20% - в США, а при испытаниях в Руанде и среди индейцев-апачей в Аризоне протективная активность вообще отсутствовала. Защиту от тяжелых заболеваний они давали только у 80-90% привитых детей в возрасте 6-12 мес. Эти вакцины в настоящее время сняты с производства по причине недостаточной иммуногенности и эффективности.

Наиболее эффективным в создании вакцин второго поколения против ротавирусной инфекции явился молекулярно-биологический подход к их pазработке на основе получения рекомбинантных штаммов человека и животных, aналогичный принципу вакцины против вирусов гриппа. Основанием для такого подхода послужили полученные данные о том, что типоспецифические антигенные свойства ротавирусов определяют белки наружного капсида VP7 и VP3. Основной белок наружного капсида VР7 определяет типоспецифические свойства и вызывает образование вируснейтрализующих антител, белок VP3 -вирусный гемагглютинин, от которого зависит тропизм вируса н его вирулентность только для определенного хозяина. Моноклональные антитела к белку VР3 poтавиpyca человека нейтрализуют сразу несколько серотипов, моноклональные антитела к белку VP7 защищают только против ротавирусов того же серотипа. Поэтому cтратегия конструирования вакцин была построена на основе создания штаммов - реассортантов, содержащих как VP3, так и VP7 ротавирусов разных серотипов.

В настоящее время (США. Венесуэла и др.) проходят третью ( завершающую) фазу клинических испытаний живые аттенуированные вакцины из рекомбинантных ротавирусов человека и животных, а именно:

• ротавнрусная живая пероральная вакцина из штамма реассортанта телячьего типа (штамм WC3) и ротавируса человека (серотип 1);

• ротавирусная генноинженерная вакцина RRV-TV из ротавирусного штамма обезьян-резус, реассортированного с 4-мя человеческими штаммами - возбудителями до 90% случаев заболеваний ротавирусной инфекцией;

• ротавирусная вакцина W179-9 из рекомбинантного ротавируса крупного рогатого скота (тип I) и ротавируса человека;

• ротавирусная вакцина на основе штамма-реассортанта, содержащею 10 генов ts-мутанта ротавируса быка, штамма и гена ротавируса человека, кодирующего белок VP-7.

По мнению экспертов ВОЗ, эти вакцины обеспечивают высокую степень защиты от ротавирусной инфекции и являются кандидатами для проведения активной иммунизации детей (начиная с 3-х месячного возраста) и могут быть включены в «Календарь профилактических прививок». К числу наиболее приоритетных направлений следует отнести исследования новых методик презентации в кишечнике нереплицирующихся антигенов (например, посредством микрокапсул, липосом, «слизистых адъювантов», в целях повышения иммуногенности и эффективности вакцин-кандидатов.