6. Общая характеристика патогенных спирохет

Представители патогенных спирохет относятся к 2-м семействам – Spirochaetaceae и Leptospiraceae, кот входят в порядок Spirochaetales. Возбуд болезней у чела явл представители родов Borrelia и Treponema, входящие в 1ое сем. Сем Leptospiraceae вкл род Leptospira, который также содержит патогенных представителей.

Спирохеты отличаются от бак и грибов строением в виде штопорообразной извитой формы. Размеры их колеблются в больших пределах (ширина 0,3 - 1,5 мкм и длина 7 - 500 мкм).

Спирохеты – тонкие одноклет изогнутые или спиральные палочки с рядом отличительных ультраструктурных особенностей, испол в дифференцировании родов. Цитоплазма окружена цитоплазматической мембраной, пептидогликановый слой обеспечивает ригидность кл и ее форму. Нуклеоид спирохет не отделен от цитоплазмы ядер мембраной. При электронной микроскопии обнаруживается нежная цитоплазматич мембрана, в кот заключ цитоплазма. У спирохет нет клет стенки, характ для бакт, но при электронной микроскопии выявл, что они имеют тонкую клет стенку (перипласт), кот прилагает к цитоплазме. Спирохеты не образуют спор и капсул. По Романовскому - Гимзе 1 виды окрашиваются в синий, др - в сине-фиолет, 3и - в розовый цвет. Хорошим методом обработки спирохет явл серебрение. Тинкториальные св-ва испол для дифференциации сапрофитов и патогенных спирохет.

Представит патогенных спирохет относятся к 2-м семейст – Spirochaetaceae и Leptospiraceae. Возбуд болезней у чела явл представители родов Borrelia и Treponema, входящие в 1ое семейство. Семейство Leptospiraceae вкл род Leptospira, кот также содержит патогенных представителей.

7. Характеристика возбудителя сифилиса.

Сифилис – это хронич инфекц венерич заб, характер волнообразным течением – чередованием периодов клинич проявл болезни с длит латентными периодами. Таксономия. Порядок – Spirochaetales Сем – Spirochaetaceae Род – Тreponema Вид – Тreponema pallidum Подвид – pallidum

Морфология. : спиралевидные бактерии размером 6-14х0,2-0,3 мкм .Имеют удлиненное штопорообразное извитое гибкое тело размером 0,09-0,5х5-20 мкм, первич завитки (от 8 до 12), расположенные на равном расстоянии друг от друга. От каждого конца кл отходят три периплазматических жгутика, обуславливающие плавное движение трепонемы. Спор и капсул не образуют, но при неблагоприятных условиях могут превращаться в цисты и L-формы.

Тинкториальные св-ва. Грам-, но плохо окрашиваются анилиновыми красителями, по РомановскомуГимзе – в слабо-розовый цвет (от лат. pallidum – бледная), осущ метод серебрения по Морозову (окрашиваются в коричневый или почти черный цвет) и негативное контрастирование по Бурри, наиболее эффективное изучение в темнопольном или фазовоконтрастном микроскопе.

Культуральные св-ва. Микроаэрофилы (непатогенные трепонемы – строгие анаэробы), оптимальная т – 35-370С, рН 7,2. Бледную трепонему не культивируют на пит средах, хотя при добавление к пит средам почечной, мозговой тк или асцитической жидкости на 3-5 сут вырастают мелкие колонии, но “культуральные” штаммы трепонем изменяют свою морфологию (становятся более грубыми, короткими, полиморфными), утрачивают иммуногенность и патогенность. Трепонемы хорошо растут, не теряя своих иммунногеных и патогенных св-в в тестикулах кроликов, в куриных эмбрионах (“ткан” штаммы), что испол для выделения и изучения возбудителя от больных.

Биохим св-ва. Малоактивны: могут разлагать некот сахара (глюкозу, галактозу, сахарозу, мальтозу, маннит) с образованием к-ты, образуют индол и сероводород, разжижают желатин, восстанавливают нитрат серебра в металлическое серебро, что придает тканям черную или темнокоричневую окраску.

Антигенная структура. Сложная, выделяют белковые, полисахаридные и липопротеидные антигены. Липопротеидные антигены явл перекрестно-реагирующими антигенами, идентичны липидам сердечной мышцы чела и крупного рогатого скота (быков).

Ф-ры патогенности. Токсины – эндотоксин (ЛПС клеточной стенки). Ферменты патогенности не выявлены; Структурные и химич компоненты кл: высокая подвижность за счет жгутиков, адгезины (белки наружной мембраны) и фактор, противостоящий фагоцитозу.

Резистентность- Чувствительны к воздействию ф-ров внеш среды: УФЛ, высушиванию, высоким т (при 400C в теч 1 ч теряют патогенные св-ва, при 550C погибают через 15 мин, 1000C – мгновенно); дез Р-ры в рабочих концентрациях оказывают губительное действие в течение 4-5 мин; выдерживают низкие т (при замораживании сохр до 1 г); чувствительны к солям тяжелых металлов (ртути, висмута, мышьяка) и а/б (пенициллин, эритромицин, карбеницилин и др. ) Эпидемиология. Антропоноз. Введением заразного материала экспериментально удается воспроизвести сифилис у обезьян, кроликов и хомяков. Ист инфекции – больной человек. Бактерионосительства при сифилисе не бывает.

Механизмы передачи инф:  Контактный (пути – половой, непрямой контактный и трансфузионный);

 Вертикальный (путь – трансплацентарный). Входные ворота: слиз оболочки пол органов, рот полости, кожа с нарушением целостности и т.д. Инкубац период – 3-4 нед (21-24 д, max 90 д). Возбуд размножается во входных воротах и регионарных лимфатических узлах.

Патогенез и клинические особенности.

I. Первич сифилис: в месте внедрения образуется твердый шанкр (от франц. chancre – язва) – безболезненная язва с плотным основанием, отмечается регионарный лимфаденит. Первич период длится 6-7 нед и делится на 2 фазы:  1 фаза (1ые 3 нед) – первичные серонегативный сифилис;  2 фаза (с 4 нед) – первич серопозитивный сифилис.

II. Вторич сифилис (фаза генерализованной спирохетемии): наступает через 6 нед после появл тверд шанкра и продолжается 3-6 л, по лимфотич сосудам попадают в кровь и поражают внутр органы и нс. Характерный симптом – розовато-красные папулезно-розеолезные и пустолезные высыпания (сифилиды) на коже (вторич свежий сифилис). Больной в этот период особенно заразен – Тreponema pallidum находится в высыпаниях, слюне, сперме и т.д. На высоте иммун ответа бол-во спирохет погибает, что обуславливает периодическое исчезновение высыпаний (латентный период), а часть спирохет образует цисты, сохраняющ в стенке кровеносных сосудов, лимфатич узлах и внутр органах. При снижении напряженности иммунитета возвращаются в вегетативные формы и высыпания появляются вновь (вторичный рецидивирующий сифилис). III. Третичный период (висцеральный сифилис): развивается через 3-4 г при отсутст лечения, во внутр органах появляются специфич гранулемы – гуммы (от лат. gummi – камедь), склонные к распаду и рубцеванию. Поражается костно-хрящевая ткань (н, перегородка носа), стенки крупных сосудов. Развивается ГЗТ. Продолжит периода – 8-20 л. Больной малозаразен для окружающих, и серологич р-ции м б отрицат. IV. Четвертичный период (нейросифилис): через 8-15 л развивается специфич поражение ЦНС (прогрессирующий паралич, спинная сухотка, сифилис мозга). В этот период в спинномозговой жидкости обнаруживают высокие титры специфич антител. Инфицир плода от больной матери в 25% случаев приводит к выкидышам и в 75% – развивается врожденный сифилис. Различают:  ранний врожденный сифилис – клинич симптомы появл сразу после рождения (папулезно-розеолезные высыпания, сифилитич пузырчатка, остеохондриты, поражения внутр органов и н с (менингиты, энцефалиты);  поздний врожденный сифилис (в возрасте 5 лет и старше) – характеризуется триадой Хетчинсона: поражение глаз (кератит), «бочкообразные зубы», глухота, искривление большеберцовых костей в виде «саблевидных голеней».Иммунитет. Постинфекционный иммунитет – клеточ и гуморал, нестерильный, непродолжит (возможны повтор заб), развивается ГЗТ.

Микроскопич исслед. Проводят при первич сифилисе во вр появл тв шанкра. Материал для исслед: отделяемое шанкра, содержимое регионарных лимфатич узлов, из кот готовят препарат «раздавленная» капля и исслед в темном поле. При полож результате видны тонкие извитые нити длиной 6—14 мкм, имеющие 10—12 равномерных мелких завитков правильной, формы. Для бледной трепонемы характерны маятникообразные и поступательно-сгибательные движения. При развитии поражений на слиз оболочке рта при вторич сифилисе, а также при локализации тв шанкра в полости рта приходится дифференцировать бледную трепонему от сапрофитных трепонем, являющ представит нормальной микрофлоры. В этом случае решающее диагностич значение имеет обнаружение типичных трепонем в пунктате регионарных лимфатич узлов.

Серодиагностика. Реакцию Вассермана ставят одновременно с 2 антигенами: 1) специфич, содержащим антиген возбуд— разрушенные ультразвуком трепонемы; 2) неспецифич — кардиолипиновым. Исслед сыворотку разводят в соотношении 1:5 и ставят РСК по общепринятой методике. При полож р-ции наблюдается задержка гемолиза, при отрицат—происходит гемолиз эритроцитов; интенсивность реакции оценивается соответственно от ( + + + + ) До ( —). 1ый период сифилиса явл серонегативным и характ отриц р-цией Вассермана. У 50 % больных р-ция становится положит не ранее чем через 2—3 нед после появл тв шанкра. Во 2ом и 3ем периодах сифилиса частота полож р-ций достигает 75— 90 %. После проведенного курса лечения р-ция Вассермана становится отриц. Параллельно р-ции Вассермана ставится р-ция микропреципитации с неспецифич кардиолипиновым антигеном и исслед инактивированной сывороткой крови или плазмой. В лунку на пластине из плексигласа (или на обычное стекло) наносят 3 капли сыворотки и добавляют 1 каплю кардиолипинового антигена. Смесь тщательно перемешивают и учитывают результаты. Полож р-ция е сывороткой крови больного сифилисом характ образованием и выпадением хлопьев разной величины; при отриц результате наблюдается равномерная легкая опалесценция.

РИФ — реакция непрямой иммунофлюоресценции — явл специфич при диагностике сифилиса. В кач-ве антигена испол взвесь тканевых трепонем. Испол р-ция РИФ_200. Сыворотку больного инактивируют так же, как для р-ции Вассермана, и разводят в соотношении 1:200. На предметные стекла наносят капли антигена, высушивают и фиксируют 5 мин в ацетоне. Затем на препарат наносят сыворотку больного, через 30 мин промывают и высушивают. След этапом явл обработка препарата флюоресцирующей сывороткой против глобулинов чела. Изучают препарат с помощью люминесцентного микроскопа, отмечая степень свечения трепонем.

РИТ—реакция иммобилизации трепонем — также явл специфич. Живую культуру трепонем получают при культивировании в яичке кролика. Яичко измельчают в спец среде, в кот трепонемы сохр подвижность. Ставят р-цию след обр: взвесь ткан (подвижных) трепонем соед в пробирке с исслед сывороткой и добавляют свежий комплемент. В 1 контрольную пробирку вместо исслед сыворотки добавляют сыворотку здорового чела, в др — вместо свежего комплемента добавляют инактивированный — неактивный. После выдерживания при 35 °С в анаэробных условиях (анаэростат) из всех пробирок готовят препарат «раздавленная» капля и в темном поле определяют количество подвижных и неподвижных трепонем.

Микробиолог диаг. Испол бактериоскоп и серологич методы (в зависимости от стадии заб), а также ПЦР. Бактериоскопич исслед проводят при первич сифилисе и в период высыпаний при вторич сифилисе. Материал для исслед служат отделяемое тверд шанкра, пунктаты лимф узлов, материал из кожн высыпаний.

Серологич исслед проводится комплексом серологич р-ций, среди кот различают отборочные неспецифич тесты с кардиолипиновым антигеном, применяемые для обследования населения на сифилис, и испол трепонемальный антиген диагностические тесты, кот подтверждают диагноз. Серологич диаг применяется для подтверждения клинич диагноза сифилиса, постановки диагноза скрытого сифилиса и контроля за эффективностью лечения.

К отборочным тестам относится р-ция микропреципитации или ее аналоги: VDRL (Veneral Disease Research Laboratory), RPR (Rapid Plasma Reagin), флокуляционные тесты и РПГА с кардиолипиновым антигеном.

Отборочные тесты с кардиолипиновым антигеном в колич-ном варианте постановки испол также для контроля эффективности лечения.

Диагност тесты явл высокочувствит и высокоспецифич - ИФА, РПГА, РИФ (непрямая), иммуноблоттинг.

В этих р-циях в кач-ве антигена испол УЗ-экстракт трепонем, выращенных в яичке кролика.

Из молекулярно-биологических методов чаще всего испол ПЦР.

В иммунном ответе орг приним участие как клет, так и гуморал механизмы (синтез специфич антител). Появл противосифилитических антител происх в соответствии с общими закономерностями иммунного ответа: вначале вырабатываются IgM, по мере развития болезни начинает преобладать синтез IgG; IgA в сыворотке крови присутствуют в сравнительно небольших кол-вах. Специфич IgM к белковым антигенам появл на 2—4-й нед после заражения и исчезают у нелеченных больных примерно через 3—4 мес, при лечении раннего сифилиса — через 2 — 3 мес. Иммуноглобулины класса G возникают обычно на 4-й нед после заражения. Антитела этого класса могут сохр длит вр даже после клинич излечения больного.

Современные методы специфич серологич диагност сифилиса основаны на выявл антител разных классов.

Серологич тесты на сифилис, рекомендуемые для исслед сыворотки крови: трепонемные тесты (ТТ): -р-ция пассивн гемагглютинации (РПГА); -иммуноферментный анализ (ИФА) на антитела класса IgM, IgG; - р-ция иммунофлюоресценции (РИФ) в 2х модификациях: РИФ200 и РИФабс.

К нетрепонемным относятся: -РСКк — р-ция связывания комплемента с кардиолипиновым антигеном (р-ция Вассермана). -РМП (МРП) — р-ция микропреципитации крови с кардиолипиновым антигеном. -RPR (Rapid Plasma Reagins) — неспецифич антифосфолипидный (реагиновый) тест др.

Леч сифилиса происходит антибиотиками пенициллинового ряда.

Лечение. Применяются а/б пенициллинового ряда и висмутсодержащие препараты.

Профилакт. Специфич проф не разработ. Неспециф проф объединяет пропаганду зож и санитарно-просвет работу среди молодежи. Проводится обязат серологич контроль доноров, беременных и бол, поступ во все стационары, а также в гр риска (проститут, гомосекс, нарки) с целью своеврем выявл и эффектив леч бол сиф.