Какое (или какие) вирусное заболевание можно предполагать на основе приведенных данных?

Какой материал надо взять от больного животного для лабораторного исследования? Правила его транспортировки в лабораторию;

Каковы цели, методы и последовательность лабораторных исследований взятого Вами патологического материала?

На основании приведенных данных можно предполагать инфекционный ларинготрахеит птиц (семейство Herpesviridae).

Инфекционный ларинготрахеит – энзоотическое контагиозное заболевание кур и фазанов, протекающее с симптомами кашля, удушья и часто конъюнктивита.

Заболевание сопровождается кашлем, хрипами, удушьем, связанным с образованием в гортани казеозных пробок. При конъюнктивальной форме отмечается гиперемия и отек слизистой оболочки глаз.

Материалом для лабораторной диагностики служат слизистые оболочки гортани, трахеи, конъюнктивы, носовых ходов, кусочки легких, экссудат трахеи, парные сыворотки.

Пробирки (флакончики) с патматериалом, закрытые резиновыми пробками, помещают в термос с охлаждающей смесью. В качестве охлаждающей смеси можно взять смесь равных частей сухого льда (твердой углекислоты) и этилового спирта (температура минус 71 ⁰С держится несколько дней). Можно использовать смесь, состоящую из трех массовых частей льда или снега и одной массовой части поваренной соли. В последнем случае удается получить температуру минус 15 – минус 20⁰С. Вместо замораживания можно использовать для консервирования химические средства. Лучшим считается смесь равных объемов стерильных глицерина и 0,85 %-ного раствора поваренной соли (изотонический раствор), в которую и помещается патматериал.

Патматериал снабжают надежной и четкой этикеткой. На пробирке или флакончике достаточно надежна этикетка их лейкопластыря, на которой написано простым (графитным) карандашом, какой материал и от какого животного получен. На термос с пробами патматериала навешивают бирку из картона или фанеры, на которой указывают хозяйство, вид животного, вид материала и дату. Термос должен быть опечатан. Взятый материал с сопроводительным документом, содержащим полную информацию о животном, от которого взяты пробы, эпизоотологические данные хозяйства, предположительный диагноз и меры, принятые для ликвидации болезни (лечение, вакцинации и т.д.), а также дату и фамилию врача, направляют с нарочным. Этими данными руководствуются при выборе направления лабораторных исследований.

Диагностика:

1. Индикация вируса в исследуемом материале.

а) Обнаружение телец-включений.

Специфические внутриядерные тельца-включения (тельца Зейфрида) в эпителиальных клетках слизистой оболочки гортани, трахеи, клоаки уже через 12 ч после заражения и через 30-36 ч достигают наивысшей концентрации.

б) Обнаружение вирусного антигена с помощью серологических реакций.

Иммунофлуоресценция. Данный метод позволяет обнаружить вирусный антиген в мазках из слизистой трахеи, конъюнктивы, из пораженной ХАО и инфицированных культур клеток.

Реакция диффузной преципитации специфична, но не достаточно чувствительна.

в) Обнаружение вируса методом биопробы.

Биопробу ставят на цыплятах 30-90-дневноговозраста путем аппликации вируссодержащего материала на слизистую оболочку гортани, трахеи, глаз, носа, подглазничного синуса, клоаки. При наличии вируса в исследуемом материале у зараженных цыплят на 6-12-й день развиваются типичные клинические признаки экспериментальной инфекции. При инокуляции материала в подглазничный синус в положительных случаях развивается синусит с отеком, выделениями из носовых ходов и слезотечением. Положительная реакция на клоачную пробу проявляется с 3-го по 8-й день, но чаще на 4-5-й день в виде отечности слизистой фабрициевой сумки и катарального, геморрагического или фибринозного воспаления. Наблюдают за зараженными цыплятами до 14 дней.

2. Выделение вируса из исследуемого материала.

Лабораторных животных не используют. Чтобы выделить вирус, 9-12-дневные куриные эмбрионы заражают на ХАО. Погибшие в первые 24 ч после заражения эмбрионы не учитывают. Оставшиеся живыми эмбрионы на 6-8-й день убивают и исследуют; поражения ХАО в положительных случаях появляются через 2,5-3 суток, достигая максимума к 5-6-му дню. Для выявления специфических поражений КЭ необходимо проведение не менее 3 пассажей. Выделение вируса надо подтвердить обнаружением телец-включений Зейфрида, РН, РДП, биопробой,а также РИФ.

Выделение вируса с помощью культур клеток – наиболее пригодны культуры клеток почек эмбриона и цыплят, в которых первые изменения наблюдаются иногда уже через 24 ч после заражения, а через 48-72 ч в клеточной культуре обнаруживаются многоядерные гигантские клетки, в которых можно обнаружить внутриядерные включения. Специфичность этих изменений доказывают в РИФ или РН. Наблюдения за культурой клеток проводят до 6-7 дней.

3. Идентификация выделенного вируса с помощью серологических реакций.

Реакция нейтрализации на КЭ - чаще используют метод разведения вируса и постоянная доза сыворотки. РН можно проводить и на культурах клеток почек куриного эмбриона и 3-8-дневных цыплят.

Реакция диффузионной преципитации (РДП) – для идентификации возбудителя используют набор куриных антисывороток, полученных к различным вирусам птиц.

4. Ретроспективная диагностика.

Пробы сыворотки от птиц исследуют дважды – через 14-28-дневный интервал. Повышение титра антител к вирусу и числа положительно реагирующих птиц в стаде свидетельствует о наличии и распространении инфекции в хозяйстве, а сохранение или снижение уровня антител – о прошедшей инфекции.

Для серологического исследования кровь берут на 14-28-й день от начала болезни, не менее чем от 5-10 птиц, по 5 мл от каждой.

Реакция нейтрализации на КЭ или на культурах клеток – чаще используют постоянную дозу сыворотки и различные разведения вируса. В реакции нейтрализации рекомендуется использовать неразведенные сыворотки.

Реакция диффузионной преципитации.

Иммуноферментный метод идентификации антител (ELISA-метод) более чувствителен, чем РН. Обнаружение поствакцинальных антител к вирусу в сыворотках цыплят с помощьюELISA-метода удается через неделю после вакцинации.