1.2. Экстракционный метод Блайя – Дайера (экстракция липидов бинарной смесью)

Оборудование, материалы и реактивы: делительная воронка, колбы конические вместимостью 250 см³, 100 см³, мерные колбы вместимостью 100 см³, стеклянные воронки, фильтровальная бумага, этиловый спирт, хлороформ, 20% -ный раствор ацетата цинка, безводный сернокислый натрий.

Проведение испытания. Продукт тщательно измельчают и определяют его влажность. 20-40 г навески (в зависимости от предполагаемой жирности), отвешенных с погрешностью не более 0,001 г, помещают в колбу с притертой пробкой и встряхи­вают со смесью этанол: хлороформ : вода (около 45 см³) в соотно­шении 2:1:0,8 (с учетом воды, находящейся в ткани). При высоком содержании воды в ткани воду вносить не следует. Таким образом, к измельчённой навеске следует добавить приблизительно 30 см³ этанола и 15 см³ хлороформа. По истечении 10 мин добавляют хлороформ до соотношения названных компо­нентов 2:2:0,8 (т.е., следует добавить ещё 15 см³ хлороформа). После непрерывного перемешивания в течение 5 мин вводят 15 см³ водного раствора ацетата цинка до соотношения компонентов 2:2:1,8 и перемешивают в течение 30 с (ацетат цинка обеспечивает лучшее разделение водно-спиртового и хлороформно­го слоев, особенно для термически обработанных продуктов).

Раствор отфильтровывают в делительную воронку через 4-8 слоёв марли.

Колбу и плотную часть, оставшуюся на марле, промывают 3 - 5 раз в 20 см³ хлороформа, каждый раз отделяя жид­кую часть в делительную воронку.

После полного разделения смеси (отсутствие мелких пузырь­ков в межфазовой пленке) нижний хлороформенный слой отделяют от водно-спиртового слоя и фильтруют через сухой складчатый фильтр с небольшим количеством безводного сульфата натрия. Фильтрат количественно переносят в мерную колбу на 100 см³, содержимое которой доводят до метки хлороформом.

Часть хлороформного экстракта (20-30 см³) отбирают в предварительно высушенную и взвешенную до постоянной массы фарфоровую чашку. Хлороформ удаляют испарением. Остаток с жиром высу­шивают до постоянной массы в сушильном шкафу при температуре 90—95°С, охлаждают в эксикаторе и взвешивают.

Концентрацию мисцеллы С_М, г/см³, определяют по формуле:

, (3)

где M₁ - масса чашки с жиром, г;

М₀ – масса пустой чашки, г;

V₁ - объем экстракта, взятый для анализа

Оставшуюся часть мисцеллы используют для последующих опытов

Массовую долю липидов (Ж) в процентах вычисляют по формуле:

, (4)

где М – масса навески исследуемого образца, г;

V - общий объем мерной колбы с экстрактом, см³.

Допустимое расхождение между двумя параллельными определениями не должно превышать 0,5%

1.3. Метод экстракции липидов в аппарате Selecta det/gras

Метод основан на многократной экстракции липидов органическим растворителем, его отгонке и взвешивании липидного остатка.

Оборудование, материалы, реактивы: весы аналитические, ступки фарфоровые, гильзы целлюлозные, стаканы алюминиевые, аппарат Selecta DET/GRAS, бюксы металлические, стаканы для гильз, сульфат натрия безводный, органический растворитель (эфир диэтиловый, хлороформ или смесь спирта этилового и хлороформа в соотношении 2:1).

Проведение испытания.

В фарфоровую ступку или в металлический бюкс (в зависимости от предполагаемого способа обезвоживания) помещают навеску продукта массой от 3 до 10 г, взвешенную с точностью до 0,01 г, в зависимости от предполагаемого содержания жира и необходимости его дальнейшего анализа. При исследовании влажных продуктов навеску обязательно подвергают обезвоживанию (либо высушиванием в металлическом бюксе в течение 2 ч при 100 ºС, либо растиранием с двойным объёмом безводного сульфата натрия в фарфоровой ступке). Содержимое ступки или бюкса количественно переносят в целлюлозную гильзу для экстракции. Остатки жира со стенок бюкса или ступки переносят в гильзу, протирая стенки ваткой, смоченной в растворителе (после этого ватку обязательно полностью поместить в гильзу). Гильзу с использованием штатива и стаканов для гильз помещают в аппарат Selecta DET/GRAS таким образом, чтобы она находилась строго по центру. Гильза будет удерживаться в аппарате с помощью магнита.

Высушенный алюминиевый стакан для растворителя взвешивают с точностью до 0,001 г, после чего в него помещают 50 см³ органического растворителя. Стакан устанавливают в аппарат и герметизируют его. По возможности, следует избегать прикосновения руками к поверхности гильзы и стакана для растворителя. К стаканам для гильз прикасаться можно.

Перед включением установки включают водоструйный насос. С помощью устройства управления выбирают требуемый режим и запускают установку. В большинстве режимов первой стадией является режим «кипячения», таким образом, гильза должна быть опущена в крайнее нижнее положение, кран для слива растворителя должен быть открыт. На этой стадии происходит экстракция липидов кипящим растворителем, этот процесс идёт максимально интенсивно. По мере экстракции, концентрация липидов в растворителе увеличивается, и эффективность экстракции снижается. Полной экстракции с использованием только этого режима достичь не удастся. По окончании первой стадии установка издаст звуковой сигнал, после которого произойдёт переход в режим «ополаскивания», в котором гильза должна быть поднята в крайнее верхнее положение. На этой стадии проходит экстракция липидов конденсатом растворителя, не содержащем липиды (что позволяет продолжить экстракцию даже при достижении равновесного содержания липидов в растворителе в стакане и в продукте).

По окончании стадии «ополаскивания» прибор издаёт звуковой сигнал и переходит в режим регенерации растворителя. В этом режиме кран слива растворителя должен быть закрыт.

По окончании регенерации установку раскрывают и извлекают стакан. При этом в стакане либо не должно остаться следов растворителя (отсутствует его запах), тогда его помещают в эксикатор для охлаждения, либо остаётся лишь незначительное его количество (тогда перед помещением в эксикатор растворитель упаривают на песчаной бане).

Охлаждённый стакан с остатками жира взвешивают на аналитических весах с точностью до 0,001 г. Содержащийся в нём жир может быть использован для последующего анализа.

Массовую долю липидов в образце X, %, определяют по формуле

,

где m₁ – масса стакана с липидами после экстракции, удаления растворителя и охлаждения, г;

m₁ – масса пустого стакана до внесения в него растворителя, г;

m_Н – масса навески продукта, г.

Следующий цикл экстракции можно проводить либо вообще без растворителя, либо с небольшим его количеством (около 5 см³).