Правила взятия, хранения и транспортировки биоматериала заболеваний для выявления возбудителей методом пцр

1.1. Общие рекомендации

1.1.1. Взятие биоматериала производится из предполагаемого места обитания микроорганизмов и развития инфекции.

1.1.2. Количество забранного материала должно быть небольшим. Избыток отделяемого, слизь и гной отрицательно влияют на качество выделения ДНК и способствуют деградации ДНК при хранении и транспортировке.

1.1.3. При внесении биоматериала, взятого у пациента зондом с ватным тампоном или щеточкой, в пробирку типа эппендорф с транспортным раствором, необходимо:

• соблюдать стерильность;

• прежде, чем погружать собранный на тампоне (щеточке) биоматериал в раствор, размазать его по сухой стенке пробирки, затем смочить тампон (щеточку) в растворе и, вращая зонд, тщательно смыть весь материал со стенки пробирки и тампона (щеточки);

• по возможности отжать тампон о стенку пробирки, удалить зонд с тампоном (щеточкой) и закрыть пробирку.   

* В цветные пробирки типа эппендорф с транспортным раствором можно забирать только мазки и соскобы. Не допускается забор других видов биоматериала в данные пробирки.

1.2. Способы взятия биоматериала для исследований методом пцр

1.2.1. Соскобы

Для соскобов используются одноразовые стерильные зонды, имеющие ватный тампон с повышенной адсорбцией или «щеточки», реже - ложки Фолькмана, малые ушные ложки или аналогичные инструменты со слегка затупленными краями. Поскабливающими движениями собрать материал. Исследуемый материал должен содержать возможно большее количество эпителиальных клеток и минимальное количество слизи, примесей крови и экссудата. Внести материал в стерильную пробирку типа эппендорф с транспортным раствором (см. раздел 1.1.).  Соскоб из цервикального канала: перед взятием соскоба необходимо удалить избыток слизи стерильным ватным тампоном, обработать шейку матки стерильным физиологическим раствором. Зонд ввести в цервикальный канал на глубину 0,5-1,5 см, избегая соприкосновения со стенками влагалища, и поскабливающим движением (не до крови) собрать материал. Небольшое количество эритроцитов в пробе не влияет на результат анализа. При наличии эрозии шейки матки материал берут с границы здоровой и измененной ткани. Соскоб из уретры: зонд ввести в уретру (у мужчин - на глубину 2-4 см) и несколькими вращательными движениями собрать материал. Накануне взятия материала допускается провокация (острая пища, алкоголь и др.). Рекомендуется воздержаться от мочеиспускания в течение 1-2-х ч. перед взятием пробы. При наличии обильных гнойных выделений соскоб надо брать не позже, чем через 15 минут после мочеиспускания. Соскоб с конъюнктивы берут, предварительно проведя анестезию глаза 0,5% раствором дикаина. Вывернув веко, зондом с ватным тампоном (либо глазным скальпелем) собрать эпителиальные клетки с конъюнктивы. Соскоб из прямой кишки: зонд ввести в анальное отверстие на глубину 3-4 см и вращательным движением собрать материал.

1.2.2. Мазки

Одноразовым стерильным зондом с ватным тампоном или щеточкой взять небольшое количество отделяемого (со сводов влагалища, из зева, носоглотки и др.) и перенести в стерильную пробирку типа эппендорф с транспортным раствором (см. раздел 1.1.).

1.2.3. Кровь

Для исследований методом ПЦР кровь должна быть нативной (не свернувшейся). Забор крови - в пробирку с ЭДТА с сиреневой крышкой (гепарин в качестве антикоагулянта использовать нельзя!), аккуратно перемешать, плавно переворачивая пробирку. Кровь с ЭДТА является биоматериалом для следующих групп исследований:

• молекулярно-генетические исследования (момент забора крови значения не имеет).

• выявление возбудителей инфекций (наиболее информативными являются пробы, взятые при ознобе, повышенной температуре, т.е. предположительно во время виремии или бактериемии).  

1.2.4. Моча

В пустой стерильный контейнер с плотно завинчивающейся крышкой собирают утреннюю первую или среднюю порцию мочи в количестве минимум 10 мл. Если забор мочи проводят днем, то перед этим пациент не должен мочиться 1,5-3 часа.

1.2.5. Мокрота

Утром провести санацию ротовой полости и горла (прополоскать раствором питьевой соды). Собрать мокроту в пустой стерильный широкогорлый флакон.

1.2.6. Биоптат

Взятие материала осуществлять из зоны предполагаемого местонахождения возбудителя инфекции, из поврежденной ткани или пограничного с повреждением участка. Поместить биоптат в стерильный контейнер или пробирку со стерильным физраствором или водой (если биоптат находится в биологической жидкости, то в пустой стерильный контейнер или пробирку).

1.2.7. Слюна, желудочный сок, ликвор, синовиальная жидкость, сперма

1-5 мл поместить в пустую стерильную пробирку (контейнер).

1.2.8. Сок предстательной железы

После массажа предстательной железы сок собирают в количестве 0,5-1 мл в пустую стерильную пробирку (контейнер). При невозможности получить сок, сразу после массажа собирают первую порцию мочи в количестве не более 10 мл (в этой порции содержится сок предстательной железы).

1.2.9. Смывы, бронхоальвеолярный лаваж (БАЛ)

Стерильным ватным тампоном и 5-7 мл физиологического раствора проводят смыв, например, с наконечника эндоскопа или бронхоскопа, и помещают в пустую стерильную пробирку (контейнер).

1.2.10. Фекалии

Зонд с ватным тампоном помещают внутрь каловых масс и слегка проворачивают, захватывая небольшое количество материала («со спичечную головку»). Затем материал помещают в стерильную пробирку типа эппендорф с транспортным раствором. Можно взять фекалии (1-5 г) в стерильный пустой контейнер.