8. Описание культуральных свойств микроорганизмов на плотных питательных средах

Рост на плотных питательных средах.

На поверхности плотных питательных сред в зависимости от способа посева микроорганизмы могут расти в виде колонии, штриха или сплошного газона. Колонией называют изолированное скопление клеток одного вида, выросшее в большинстве случаев из одной клетки. В зависимости от того, где растут клетки (на поверхности плотной питательной среды, в толще ее или на дне сосуда), различают поверхностные, глубинные и донные колонии. Колонии, выросшие на поверхности среды, отличаются большим разнообразием и, в некоторых случаях, их характерные особенности облегчают идентификацию микроорганизмов. При описании колоний учитывают следующие признаки:

1. величину колонии (диаметр в миллиметрах). Различают точечные колонии (менее 1 мм), мелкие (1–2 мм), средние (2–4 мм) и крупные (4–6 мм и более);

2. форму колонии (округлая, неправильная, амёбовидная, мицелиальная, складчатая, сложная и др.);

3. оптические свойства (отмечают прозрачность, наличие или отсутствие блеска);

4. цвет, обусловленный способностью микроорганизмов синтезировать пигменты. Отмечают цвет колонии и выделение пигмента в среду (следует обратить внимание, что все грязно-белые колонии принято считать бесцветными);

5. поверхность (гладкая, шероховатая, бугристая, складчатая и т.д.). Детально изучить поверхность колонии можно при помощи малого (х10) увеличении микроскопа;

6. профиль колоний (плоский, выпуклый, кратерообразный, каплевидный, конусовидный и др.). Профиль лучше всего определять, глядя сбоку чашки Петри, слегка приоткрыв крышку;

7. край колонии (ровный, волнистый, лопастной, ризоидный и др.). Его оценивают при помощи ручной лупы или малого увеличения микроскопа;

8. структуру колонии (однородная, мелко- или крупнозернистая, волокнистая), которая определяется также при помощи малого увеличения микроскопа;

9. консистенцию колонии можно определить в последнюю очередь при приготовлении мазка, прикасаясь к колонии иглой или петлёй. Различают маслянистую, тестообразную, вязкую, пленчатую, сухую ломкую и др. консистенции.

8. Метод механического разобщения

8. Приготовление и окрашивание препарата-отпечатка

Приготовить препарат-отпечаток патологического материала. Для чего поверхность исследуемого органа прижечь с помощью прокаленного в пламени спиртовки пинцета. Затем с помощью стерильных скальпеля и пинцета вырезать небольшой кусочек ткани, захватить его пинцетом и несколько раз прикоснуться плоскостью разреза к поверхности предметного стекла. Фиксировать смесью Никифорова (спирто-эфирной смесью 1:1), окрасить по Романовскому-Гимзе, микроскопировать в иммерсионной системе.

Окрашивание по Романовскому-Гимзе.

На предметном стекле готовят мазок культуры бактерий (спирохет) или крови, фиксируют в жидком фиксаторе (метаноле, этаноле, смеси этанола с эфиром 1:1). На мазок наносят рабочий раствор красителя Романовского-Гимзе (1 капля красителя на 10 капель дистиллированной воды) на 10-20 минут. Затем препарат промывают водой и высушивают на воздухе.

Эритроциты крови окрашиваются в розово-коричневый, лейкоциты в сиреневый (их ядра – в фиолетовый), бактериальные клетки – в красно-фиолетовый.