Актуальные вопросы иммунологии и аллергологии

РОЛЬ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНОВ IL-5 (-703) И IL-5RA (-80) В МЕХАНИЗМАХ ФОРМИРОВАНИЯ ЭОЗИНОФИЛИИ КРОВИ ПРИ ТУБЕРКУЛЕЗЕ ЛЕГКИХ

А.В. Абатаева

Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск

Кафедра иммунологии и аллергологии

Актуальность. Рост заболеваемости, хроническое, с частыми рецидивами течение, недостаточная эффективность существующих методов лечения и профилактики ставят атопический дерматит (АтД) в ряд наиболее актуальных проблем современной медицины. Представляет интерес изучение у пациентов с мутациями в гене филаггрина при АтД содержание ключевых цитокинов основных субпопуляций Т-лимфоцитов на местном уровне (IFN-г, IL-4, IL-10, IL-17 соответственно для Th1, Th2, Тr1, Th17). Исследование количественного состава данных клеток у пациентов с мутациями в гене филаггрина позволит оценить являются ли мутации в гене филаггрина фактором ремоделирования кожи у пациентов при АтД. Важность детального изучения патогенетического значения нарушенной барьерной функции кожи, вызванной мутациями в гене филаггрина, в развитии АтД создает предпосылки для более точного понимания тех биологических механизмов, которые лежат в основе патологического процесса. Это является важным фактором для последующего развития более эффективных методов контроля АтД, разработки новых подходов к диагностике и может оказаться концептуальной основой для новых направлений терапии.

Цель.Исследовать концентрацию цитокинов в экссудатах «кожного окна» и оценить содержание антигенпредставляющих клеток в коже у больных с АтД в сочетании с мутациями в гене филаггрина.

Материал и методы.Было обследовано 143 человека (мужчины и женщины) в возрасте от 9 до 47 лет с установленным диагнозом АтД. Кожное скарификационное аллерготестирование было проведено у 109 обследуемых, а у остальных пациентов данные были взяты из первичной медицинской документации. На первом этапе исследования всем пациентам было проведено генотипирование на наличие мутаций R510Х и 2282del4 в гене филаггрина. Материалом для исследования служила венозная кровь пациента.

На следующем этапе исследования для определения уровня цитокинов на местном уровне были использованы бесклеточные фракции экссудата, полученные методом «кожного окна» у пациентов с АтД. Исследование проводилось в период обострения, а также в период ремиссии АтД. Контрольную группу составили 20 практически здоровых доноров-добровольцев в возрасте 17-24 лет. Обследование контрольной группы включало постановку «кожного окна» у 10 практически здоровых лиц и иссечение биоптатов кожи с передней поверхности предплечья у других 10 доноров-добровольцев.

Результаты.По результатам генотипирования мутации 2282del4 и R501X в гене филаггрина были обнаружены у 17 человек, что в процентном отношении соответствует 11,8%.Превалирующей мутацией была делеция 2282del4,а низкая частота встречаемости мутации R501X в выборке больных с АтД в популяции. Предположительно, что частота той или иной мутации в гене филаггрина связана с этнической принадлежностью. На втором этапе научной работы было проведено изучение цитокинового профиля (IL-4, IFN-г, IL-10 и IL-17) на местном уровне у пациентов при АтД. Пациенты с мутациями в гене филаггрина составили основную группу, а пациенты без мутаций в гене филаггрина вошли в группу сравнения.

Выводы.

1. Частота мутаций 2282del4 и R501X в гене филаггрина в обследованной популяции больных АтД составила 9,1% и 2,1%. Пациенты c АтД с мутациями в гене филаггрина имеют клинические особенности по сравнению с пациентами без мутаций, заключающиеся в более выраженном шелушении кожи и документально подтвержденными частыми осложнениями вторичной инфекции, что обусловлено нарушениями барьерной функции кожи.

2. В периоды обострения и ремиссии АтД в обеих группах пациентов выявлено однонаправленное достоверное повышение в кожных экссудатах по отношению к контролю содержания IL-4 и IL-10, а в стадию ремиссии - снижение IFN-г.

3. В период обострения АтД у пациентов обеих групп отмечается достоверное повышение CD1a+ клеток Лангерганса в эпидермисе и CD68+ клеток в дерме по сравнению со здоровыми лицами, что отражает высокий уровень распределения антигенпредставляющих клеток в коже и процессов её ремоделирования при АтД.

ОЦЕНКА ВЛИЯНИЯ ГАЛЕКТИНА-1 НА ДИФФЕРЕНЦИРОВКУ Т-РЕГУЛЯТОРНЫХ ЛИМФОЦИТОВ INVITRO

Н. В. Андреева

Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск

Кафедра фундаментальных основ клинической медицины

Актуальность. Т-регуляторные лимфоциты (Treg) играют важную роль в поддержании иммунного гомеостаза, аутотолерантности, контроле над чрезмерной реакцией иммунных клеток на антигены, удалении аутореактивных лимфоцитов. Для них характерна конститутивная экспрессия CD25, а также транскрипционного фактора Foxp3 (forkhead box P3) [Cools N.,2007]. Особую актуальность на сегодняшний день приобретают методы коррекции иммуноопосредованных заболеваний, основанные на целенаправленном регулировании процесса дифференцировки Тh-лимфоцитов, осуществляющих поляризацию иммунного ответа. В качестве регуляторов Т-клеточного гомеостаза в настоящее время рассматриваются эндогенные гликансвязывающие низкомолекулярные белки семейства лектинов - галектины, способные влиять на процессы трансдукции сигналов, межклеточную кооперацию и реализацию программированной гибели [Рапопорт Е.М.,2008]. На сегодняшний день имеются сведения, что галектины способны модулировать направление иммунного ответа, и рассматриваются в качестве возможных мишеней для создания новых подходов терапии патологических процессов, связанных с гиперактивацией или, напротив, недостаточной функцией иммунитета.

Цель. Оценить влияние рекомбинантного галектина-1 на процесс дифференцировки Т-регуляторных лимфоцитов in vitro.

Материал и методы. Выделение лимфоцитов из крови здоровых доноров выполняли в стерильных условиях методом градиентного центрифугирования с использованием фиколла плотностью 1,077. Для осуществления направленной дифференцировки лимфоцитов в Тreg выделенные клетки в концентрации 2*106/мл пересаживали в культуральные планшеты с добавлением рекомбинантных цитокинов (''RnD Systems'', США): интерлейкин 2 (IL-2) в дозе 10 нг/мл и трансформирующий ростовой фактор β1 (TGFβ1) в дозе 20 нг/мл. Для активации клеток использовали моноклональные антитела ('BD PharmingenT', США): анти CD3 в дозе 1 мкг/мл и анти CD28 в дозе 2 мкг/мл. Для оценки влияния галектина-1 на процесс дифференцировки Т-лимфоцитов в регуляторные Т-клетки в культуральную среду на 4 сутки добавляли различные дозы (1, 5, 7,5 нг/мл) рекомбинантного галектина-1 (''RnD Systems'', США). Инкубировали клеточные культуры в СО2 инкубаторе в течение 7 суток, осуществляя замену питательной среды и ростовых факторов каждые 3 дня. После этого оценивали содержание Treg-лимфоцитов методом проточной цитофлуориметрии по связыванию антител к транскрипционному фактору FoxP3 человека, меченных фикоэритрином (PE); анти-CD25, меченных аллофикоцианином (APC); и анти-CD4, меченных флуоресцеином изотиоцианатом (FITC) (BD Pharmingen, США).

Результаты. В результате проведенного исследования было установлено, что после культивирования интактных лимфоцитов с цитокинами и антителами в определенном диапазоне концентраций количество Т-регуляторных клеток с фенотипом CD4+CD25+Foxp3+ было достоверно выше по сравнению с исходным уровнем в крови здоровых доноров и составило 41,5+2,3%. Добавление к клеткам рекомбинантного галектина-1 в дозе 5 нг/мл сопровождалось наибольшим увеличением количества регуляторных Т-лимфоцитов, а именно уровень CD4+CD25+Foxp3+-клеток составил 56,2+4,4%, что в 1,75 раз больше, чем в культуре лимфоцитов, активированных только анти-CD3/CD28 антителами и в 1,35 раз превышало количество Treg в культуре клеток в присутствии рекомбинантных цитокинов, необходимых для осуществления дифференцировки наивных лимфоцитов в направлении регуляторных клеток. Таким образом, исходя из проведенного эксперимента следует, что галектин-1 является важным индуктором регуляторных клеток, и в дозе 5 нг/мл способствует значительному увеличению лимфоцитов с супрессорной активностью, что может быть положено в основу перспективного подхода терапии аутоиммунных заболеваний.

Выводы. Рекомбинантный галектин-1 способствует дифференцировке in vitro активированных Т-лимфоцитов в Т-регуляторные клетки с фенотипом CD4+CD25+Foxp3+. 

Работа выполнена при финансовой поддержке Министерства образования и науки РФ в рамках Федеральных целевых программ «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2007-2013 годы» (ГК № 16.512.11.2087), 'Научные и научно-педагогические кадры инновационной России на 2009-2013 годы' (ГК № 16.740.11.0636) и Совета по грантам Президента РФ для поддержки молодых российских ученых и ведущих научных школ (МД-1233.2012.7; НШ-614.2012.7). 

ОЦЕНКА АССОЦИАЦИИ ПОЛИМОРФНОГО ВАРИАНТА RS6031849 ГЕНА YWHAB С БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМОЙ

А. В. Исаева

Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск

ФГБУ «НИИ медицинской генетики» СО РАМН , лаборатория популяционной генетики

Актуальность. Бронхиальная астма (БА) − клинически гетерогенное заболевание, реализация которого определяется взаимодействием генетических и средовых факторов. Различные подходы, используемые для поиска генов подверженности БА, включая исследование генов-кандидатов, анализ сцепления, полногеномный анализ ассоциаций (ПГАА), позволили охарактеризовать влияние генетических факторов на проявление заболевания. Наиболее масштабный ПГГА, направленный на выявление генетических факторов развития БА, выполнен в рамках международного проекта GABRIEL 6-й Рамочной программой Европейского Сообщества, в ходе которого установлены новые гены-кандидаты подверженности БА - YWHAB и PPP1R12B, а также ряд других генов, влияющих на развитие других атопических заболеваний. Однако выявленные в результате ПГГА гены нуждаются верификации в независимых исследованиях. Поэтому актуальной задачей является оценка значимости результатов ПГАА в разных популяциях.

Цель. Изучить связь полиморфизма гена YWHAB с развитием БА у жителей г. Томска и Томской области

Материал и методы. Для исследования использованы образцы ДНК, предоставленные банком ДНК ФГБУ "НИИ медицинской генетики" СО РАМН. Выборку составили больные БА (n=115, средний возраст 42,3 года) и здоровые индивиды (n=59, средний возраст 35,4 лет). Генотипирование проводили с помощью ПЦР-ПДРФ анализа, применяя праймеры (производитель ООО 'Биоссет'), фланкирующие искомый участок гена YWHAB (rs6031849) и эндонуклеазу рестрикции (BstMCI, производитель НПО 'Сибэнзим'). Продукты амплификации и рестрикции визуализировали в 3% агарозном геле в УФ-свете. Для статистических расчетов использовали доступный on-line ресурс http://ihg2.helmholtz-muenchen.de/ihg/snps.html.

Результаты. В контрольной группе наблюдаемое распределение генотипов соответствовало ожидаемому при равновесии Харди-Вайнберга (χ2=0,5639; р=0,4527). Исследуемые группы характеризуются значительным аллельным разнообразием, так наблюдаемая гетерозиготность достигает 0,4407 у здоровых индивидов и 0,2957 у больных. Частота аллеля Т составила 27,1+3,85 у здоровых лиц и 28,7+3,37 у больных; при сравнении двух групп различий по частотам аллелей не выявлено (р=0,75684).Частоты гомозигот GG у больных и здоровых были сходными (56,5% и 50,8% соответственно). Частота генотипа TT выше у больных (13,91%) по сравнению с контролем (5,08%), однако эти различия статистически не значимы (p=0,07713). При попарном сравнении генотипов между группами больных и здоровых индивидов наблюдали значимые различия в распределении генотипов TT и TG (χ2=4,71; р=0,02995), что свидетельствует о возможной связи данного полиморфного варианта с развитием заболевания.

Выводы. Таким образом, полученные данные дают возможность предположить наличие связи полиморфного варианта гена YWHAB (rs6031849) с развитием БА у жителей г. Томска и Томской области, однако для подтверждения необходимы дальнейшие исследования.

ИССЛЕДОВАНИЕ ИММУНОРЕГЕНЕРАТИВНЫХ ПРОЦЕССОВ, РАЗВИВАЮЩИХСЯ В ОТВЕТ НА ПОВРЕЖДЕНИЕ МИОКАРДА

К. А. Кофанова

Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск

Центр медицинских биотехнологий Инновационного парка БФУ им. И. Канта 

Кафедра общей и экологической физиологии человека и животных

Актуальность. При инфаркте миокарда некротизированные кардиомиоциты замещаются соединительной тканью. Образование рубца приводит к ухудшению проводимости в сердечной мышце. Иммунологические механизмы при инфаркте миокарда, как и при любой воспалительной реакции в организме, могут развиваться по двум путям: с одной стороны, провоспалительные цитокины усиливают воспаление и способствуют гибели кардиомиоцитов, увеличивая очаг повреждения, с другой стороны, противовоспалительные цитокины регулируют регенеративные процессы и способствуют восстановлению поврежденого миокарда. Малоэффективное восстановление миокарда после перенесенного инфаркта можно объяснить регенеративной недостаточностью в очаге повреждения. Однако на сегодняшний день иммунные процессы, регулирующие регенеративную активность миокарда, является плохо изученным.

Цель. Оценить иммунорегенеративные реакции у больных, перенесших инфаркт миокарда.

Материал и методы. В исследовании принимало участие 22 человека от 48 до 64 лет(18 мужчин и 4 женщины) с острым инфарктом миокарда, проходивших лечение в Областной клинической больнице г. Калининграда. Клинико-функциональное состояние пациентов и адаптационные возможности организма оценивались на 14 день от развития инфаркта миокарда с помощью методики биоимпедансного анализа. Цитокины в сыворотке обследуемых пациентов определяли с помощью ИФА. Для обработки статистических данных использовался пакет статистических программ SPSS 17.

Результаты. В сыворотке исследуемых пациентов и здоровых доноров определяли ФНО-альфа, ИФН-гамма, ИЛ-2, ИЛ-1, ИЛ-10, ИЛ-4 и NT-pro BNP. Статистически значимые различия выявлены при исследовании следующих параметров: ФНО-альфа, ИФН-гамма, ИЛ-1, ИЛ-4 и NT-pro BNP. Причем значения ФНО-альфа, ИФН-гамма и ИЛ-2 уменьшаются у пациентов, перенесших инфаркт миокарда, а параметры ИЛ-4 и NT-pro BNP увеличиваются, по сравнению со здоровыми донорами.

Здоровые доноры,пг/мл ИМ 14 - 21 день, пг/мл  ФНО альфа* 4,07 +/- 2,30 2,34 +/- 1,5  ИФН гамма* 5,9 +/- 2,7 0,48 +/- 0,33  ИЛ 2 6,84 (0,84 - 12,84) 1,4 (0 - 8,82)  ИЛ 1* 0,005 (0 - 0,045) 0 (0 - 0)  ИЛ 10 4,39 (3,1 - 6,5) 5,7 (4,4 - 8,49)  ИЛ 4* 1,13 (0,21 - 2,05) 2,1 (1,07 - 2,5)  NT-pro BNP* 5 (3,5 - 5,8) 22,7 (14,1 - 30,7) 

Выводы. У пациентов, перенесших инфаркт миокарда, на 14-21 день в сыворотке уменьшается количество провоспалительных цитокинов, таких как ФНО-альфа, ИФН-гамма и ИЛ-1, но увеличивается количество противовоспалительного цитокина ИЛ-4. Таким образом, на 14-21 день происходит усиление регенеративных процессов, которые, вероятнее всего, способствуют уменьшению очага воспаления и восстановлению поврежденного миокарда.

Т-КЛЕТОЧНЫЕ МЕХАНИЗМЫ НАРУШЕНИЙ ИНДУКТИВНОЙ ФАЗЫ ИММУННОГО ОТВЕТА ПРИ ТУБЕРКУЛЕЗЕ ЛЕГКИХ.

М.С. Писаренко

Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск

Кафедра патофизиологии

Актуальность. Вторичная иммунологическая недостаточность (ВИН), лежащая в основе туберкулеза легких, определяет характер течения заболевания и существенно влияет на эффективность специфической противотуберкулезной химиотерапии. В большинстве случаев, основным критерием ВИН при туберкулезе легких является гипопродукция интерлейкина 2 (IL-2) и, как следствие, снижение пролиферативной активности Т-хелперных клонов типа 1 (Th1), абсолютно необходимых для формирования эффективной противотуберкулезной защиты. Среди причин, приводящих к недостаточной секреции IL-2, рассматриваютнарушения процессов межклеточной кооперации, осуществляющейся путем прямого взаимодействия МНС-пептидного комплекса антигенпрезентирующих клеток с Т-клеточным рецептором на лимфоцитах при участии корецептораCD4 (первый активационный сигнал) и костимулирующих молекул CD28 на Т-лимфоцитах и СD80/СD86 наAPC(второй сигнал). При наличии обоих сигналов Т-лимфоциты подвергаются активации, дифференцировке, пролиферации и синтезируют цитокины, в частности IL-2. В отсутствие костимуляторного сигнала Т-лимфоциты теряют способность эффективно «отвечать» на антигенные стимулы и подвергаются апоптозу.

Цель. Выявить нарушенияCD3/CD28-индуцированной продукцииIL-2 в Т-лимфоцитах крови при различных клинико-патогенетических вариантах туберкулеза легких.

Материалы и методы. Обследовано 56 пациентов (43 мужчины и 13 женщин) с впервые выявленным лекарственно-устойчивым (ЛУТЛ) и лекарственно-чувствительным (ЛЧТЛ) туберкулёзом лёгких в возрасте от 20 до 55 лет. Обследование проводилось в разгар заболевания до начала специфической противотуберкулезной химиотерапии. Группу контроля составили 21 практически здоровых донора с сопоставимыми характеристиками по полу и возрасту. Материалом исследования служили лимфоциты венозной крови, взятой утром натощак из локтевой вены. Выделение клеток осуществлялось методом центрифугирования на градиенте плотности фиколл-урографина (ρ=1,077 г/см³). Культивирование клеток проводили в полной питательной среде. В качестве специфических индукторов лимфоцитов использовали анти-CD3 (1мкг/мл), анти-CD4 (4 мкг/мл) и блокатор внутриклеточного транспорта моненсин (5мкг/мл). Исследование лимфоцитов, содержащихIL-2, и поверхностных маркеров проводили методом проточной цитофлюориметрии. Исследование уровня спонтанную иCD3/CD28-индуцированной продукцииIL-2 проводили с использованием иммуноферментного анализа. Статистическую обработку полученных результатов проводили при помощи программного приложения BD Cell CellQuest for Mac OS®Xи программыStatisticaforWindowsVersion6.0.

Результаты. В ходе исследования было установлено резкое снижение спонтанной и стимулированной продукцииIL-2 у больных ЛУТЛ относительно контрольных значений. ЛЧТЛ характеризовался нормальным уровнем базальной секреции и снижениемIL-2-продукции при добавлении стимулятора. При этом было отмечено уменьшение числаIL-2-позитивных клеток, несущих поверхностные (CD3, CD28) маркеры при обоих вариантах туберкулезного процесса, наиболее выраженное при ЛУТЛ. В тоже время было зарегистрировано значительное увеличение числаCD3⁺CD28^-IL-2^-лимфоцитов (р<0,001) и снижение количестваCD3⁺CD28⁺IL-2^-клеток (р<0,01) у больных с ЛУТЛ как относительно контрольных значений, так и по сравнению с ЛЧТЛ, где данные показатели не отличались от нормы.

Выводы. ЛУТЛ до лечения сопровождается снижением продукцииIL-2 на фоне уменьшения количестваCD3⁺CD28⁺IL-2⁺,CD3⁺CD28⁺IL-2^-лимфоцитов и увеличения числаCD3⁺CD28^-IL-2^-клеток.

СОСТОЯНИЕ СИСТЕМЫ TNFA ПРИ АУТОИММУННЫХ ТИРЕОПАТИЯХ

В. А. Прокопьева

Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск Кафедра фундаментальных основ клинической медицины Кафедра эндокринологии и диабетологии Научно-образовательный центр молекулярной медицины

Актуальность. На сегодняшний день аутоиммунные тиреопатии являются актуальной проблемой современной эндокринологии и медицины в целом. Уже известно, что одним из ключевых элементов в патологическом процессе аутоимунного тиреоидита и болезни Грейвса является система TNFa.

Цель. Оценить состояние системы TNFa у пациентов с аутоиммунными тиреопатиями (аутоимунный тиреоидит, болезнь Грейвса).

Материал и методы. В работе приведены результаты обследования 74 пациентов (средний возраст 42,2+1,4 года) с установленным аутоиммунным тиреоидитом (АИТ) или болезнью Грейвса (БГ). В группу больных АИТ были включены 29 пациентов. В зависимости от функционального состояния щитовидной железы выделялись подгруппы пациентов в фазе гипо- и эутиреоза. Группа пациентов с БГ включала 45 человек, находившихся в состоянии эутиреоза и гипертиреоидном состоянии. Диагноз верифицировался на основании клинической картины, наличия характерных ультрасонографических признаков, характерных изменений гормонального статуса, обнаружения в сыворотке больных повышенного титра антител к структурам фолликулярного эпителия. Контрольная группа включала 30 практически здоровых доноров соответствующего пола и возраста. Материалом исследования являлась венозная кровь, взятая утром натощак и стабилизированная гепарином (25 Ед/мл). Мононуклеарные лейкоциты выделяли в стерильных условиях, инкубировали в полной питательной среде без митогена и с добавлением 10 мкг/мл фитогемагглютинина (ФГА) ('Difco', Германия) в течение 18 ч. Определение концентраций TNFa в супернатантах интактных и ФГА-стимулированных клеточных культур, содержания sTNFa в интактных культуральных средах проводили с использованием твердофазного иммуноферментного анализа ('ВекторБест', Россия, 'BenderMedSystems', Австрия, соответственно), а также количества СD120+-лимфоцитов методом проточной лазерной цитометрии с использованием моноклональных антител ('Весkman Coulter',США). Нормальность распределения проверяли с помощью критерия Шапиро-Уилка. Рассчитывали медиану и интерквартильный размах. Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез в данном исследовании принимался менее 0,05.При межгрупповом сравнении использовали непараметрический U-критерий Манна-Уитни. 

Результаты.Исследование системы TNFa у больных аутоиммунными тиреопатиями позволило установить, что концентрация TNFa и sTNFa в культуральных средах, а также количество CD120+-лимфоцитов в крови у пациентов с АИТ в состоянии эутиреоза снижались по сравнению со значениями у здоровых доноров. При гипотиреозе продукция TNFa мононуклеарными лейкоцитами была сопоставима с показателем в контрольной группе, в то время как процент лимфоцитов, презентирующих мембранный рецептор к TNFa, достоверно снижался. Концентрация sTNF-Rl у пациентов с АИТ в гипотиреоидном состоянии снижалась относительно здоровых лиц, но превышала показатель в группе пациентов в фазе эутиреоза. Также установлено снижение ФГА-стимулированной продукции TNFa как в фазе эутиреоза, так и при гипотиреозе. У пациентов с БГ продукция TNFa, количество СD120+-лимфоцитов и содержание в супернатантах клеточных культур sTNF-Rl не зависимо от гормонального статуса уменьшалось по сравнению со здоровыми донорами. Концентрация TNFa в митоген-стимулированных образцах снижалась относительно значений стимулированной продукции цитокина у здоровых добровольцев. При этом концентрация TNFa в ФГА-стимулированных культурах клеток не отличалась от аналогичного показателя в интактных культурах мононуклеарных лейкоцитов крови полученных от лиц с БГ. 

Выводы. При аутоиммунных тиреопатиях отмечается угнетение продукции TNFa и растворимой формы рецептора 1 типа к TNFa моноуклеарными лейкоцитами крови в условиях in vitro, а также снижение количества циркулирующих в крови лимфоцитов, презентирующих рецепторы к TNFa. Выявлено снижение резервных возможностей мононуклеарных лейкоцитов крови к продукции TNFa как при АИТ, так и при БГ, независимо от уровня тиреоидных гормонов.

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ИММУНОКОМПЕТЕНТНЫХ КЛЕТОК И ОПТИЧЕСКИЙ СПЕКТР ОТРАЖЕНИЯ КОЖИ В ОЧАГЕ ДЕПИГМЕНТАЦИИ ПРИ ВИТИЛИГО

А. А. Силютина,С. В. Комарова 

Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск

Кафедра иммунологии и аллергологии

Актуальность. Витилиго − распространенное, приобретенное хронически протекающее заболевание кожи из группы дисхромий. Достаточно высокая частота встречаемости этого заболевания в популяции (около 30 млн человек в мире), его значительное влияние на психоэмоциональную сферу (дерматологический индекс качества жизни при витилиго 4,95, что значительно меньше аналогичного показателя при псориазе, угрях, атопическом дерматите), а также отсутствие эффективных методов лечения и оценки его эффективности определяют актуальность дальнейшего изучения этиологии и патогенеза этого заболевания. На сегодняшний день накапливается все больше фактов, свидетельствующих о важности иммунных нарушений в патогенезе витилиго. Особый интерес представляет изучение клеточных и молекулярных механизмов иммунопатогенеза этого заболевания на локальном уровне.

Цель. Изучить взаимосвязь количественных функциональных характеристик иммунокомпетентных клеток со спектрофотометрическими характеристиками кожи в очаге депигментации при витилиго.

Материал и методы. Были обследованы пациенты, страдающие витилиго, обоего пола, от 8 до 58 лет (средний возраст 30,53+12,67 лет), проходящие комплексное лечение на базе клиники кожно-венерологических болезней СибГМУ. Пациенты были обследованы до и после лечения. В ходе исследования проводилась спектрофотометрия кожи в очаге поражения, краевой зоне и здоровом участке. Оценивался интегральный критерий спектральной отражательной способности (ИК) кожи. Для оценки морфофункциональных особенностей иммунокомпетентных клеток использовался метод 'кожного окна'. На мазках-отпечатках 'кожного окна', окрашенных по методу Романовскому-Гимзы проводили подсчет количества макрофагов (Мф) и нейтрофилов (Нф). Определение содержания интерлейкинов (ИЛ) 8, 10, 17, 18 проводилось в бесклеточной фракции экссудата 'кожного окна" из очага витилиго методом иммуноферментного анализа. Статистическая обработка проводилась при помощи непараметрических критериев Уилкоксона и Спирмена.

Результаты. В ходе исследования было выявлено статистически достоверное (р<0,05) снижение относительного содержания Мф в очаге витилиго - 26% (13-65) до лечения и 10 % (5-22); увеличение относительного количества Нф в очаге витилиго - 74% (35-87) до лечения и 91% (87-95) после. Кроме того, зарегистрировано повышение концентрации ИЛ-18 после лечения (р=0,043). При проведении корреляционного анализа обнаружены статистически достоверные (р<0,05) взаимосвязи ИК в очаге поражения, краевой зоне и здоровом участке кожи между собой как до, так и после лечения. Корреляционные связи также выявлялись между ИК здоровой кожи и содержанием ИЛ-17 после лечения. Развитие депигментации может быть обусловлено гибелью меланоцитов на фоне изначального повышения количества и активности внутриэпидермальных Мф, активизации белков системы комплемента как результата патологического изменения реактивности организма. В то же время усиленная миграция Мф в очаги депигментации может быть вторичной, и обусловлена гибелью меланинпродуцирующих клеток под воздействием какого-либо другого повреждающего агента. Снижение количества Мф и увеличение количества Нф говорит о нормализации их хемотаксической активности в результате проведенного лечения., т.к. по данным литературы у здоровых людей в клеточном экссудате 'кожного окна' доминируют Нф. Не было обнаружено статистически достоверной связи между показателями ИК и клеточным составом экссудата кожного окна. С учетом важной роли ИЛ-17 в поддержании функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов и обнаружения зависимости между содержанием ИЛ-17 в кожном экссудате и показателями ИК, можно сделать вывод о влиянии иммуноопосредованных процессов на спектральные характеристики кожи у больных витилиго.

Выводы: 1. Выявлено статистически достоверное снижение количества Мф и увеличение количества Нф в экссудате кожного окна в очаге витилиго. 2. Установлена связь между продукцией ИЛ-17 в экссудате кожного окна из очага витилиго и ИК здоровой кожи.