Mikrobiologia_praktika

12. Культивирование аэробов

•Метод Коха - небольшое количество исследуемого материала вносят петлей в расплавленный и остуженный до 43°С агар в пробирке, тщательно перемешивают и смесь выливают в чашку Петри. Микробы в форме изолированных колоний растут как по поверхности агара (аэробы), так и внутри него (анаэробы).

12. Культивирование аэробов

•Метод Дригальского - широко применяется в бактериологической практике, при этом исследуемый материал разводят в пробирке стерильным физиологическим раствором или бульоном. Одну каплю материала вносят в первую чашку и стерильным стеклянным шпателем распределяют по поверхности среды. Затем этим же шпателем (не прожигая его в пламени горелки) делают такой же посев во второй и третьей чашках. С каждым посевом бактерий на шпателе остается все меньше и меньше и, при посеве на третью чашку, бактерии будут распределяться по поверхности питательной среды отдельно друг от друга. Через 1-7 сут выдерживания чашек в термостате (в зависимости от скорости роста микроорганизмов) на третьей чашке каждая бактерия дает клон клеток, образуя изолированную колонию, которую пересевают на скошенный агар с целью накопления чистой культуры.

12. Культивирование аэробов

Метод Шукевича - применяется для получения чистой культуры протея и других микроорганизмов обладающих «ползущим» ростом. Посев исследуемого материала производят в конденсационную воду у основания скошенного агара . Подвижные микробы (протей) способны подниматься вверх по скошенному агару , неподвижные формы остаются расти внизу на месте посева. Пересевая верхние края культуры можно получить чистую культуру.

12. Культивирование анаэробов

•Метод Хангейта - расплавленную агаризированную среду засевают бактериями при постоянном токе через пробирку инертного газа, освобожденного от примеси кислорода. Затем пробирку закрывают резиновой пробкой и помещают горизонтально в зажим, вращающий пробирку, среда при этом равномерно распределяется по стенкам пробирки и застывает тонким слоем. Применение тонкого слоя в пробирке, заполненной газовой смесью, позволяет получить изолированные колонии, хорошо видимые невооруженным глазом.

12. Культивирование аэробов

Биологический метод получения чистых культур основан на заражении чувствительных экспериментальных животных исследуемым материалом, содержащим микробные ассоциации. Например, пневмококки можно выделить из мокроты, заражая чувствительную к ним белую мышь. Через 4 ч в крови мыши обнаруживают чистую культуру пневмококков, так как они опережают размножение других микроорганизмов.

13. Методы физической стерилизации

•Прокаливание на огне

•Кипячение

•Высушивание

•Сухой жар

•Пар под давлением

•Текущий пар

•Пастеризация

•Тиндализация

•Лучистая энергия

•Ультразвук

Стерилизация сухим жаром

•Стерилизация сухим жаром применяется для обеспложивания стеклянной посуды, пробирок, колб, чашек Петри и пипеток. Для этой цели используют сухожаровые шкафы (печи Пастера), в который необходимый эффект достигается при температуре 160 градусов в течение 2 часов или при температуре 170 градусов в течение 40 минут.

•Принципиальные преимущества сухого жара заключаются в том, что при его применении не происходит коррозии металлов и инструментов, не повреждаются стеклянные поверхности. Он пригоден для стерилизации порошков и не содержащих воды нелетучих вязких жидкостей.

Стерилизация паром под давлением

•Стерилизация паром под давлением – один из наиболее эффективных методов, основанный на сильном гидролизирущем действии насыщенного пара. Паром под давлением стерилизуют различные питательные среды (кроме содержащих нативные белки): жидкости, приборы, резиновые предметы, стеклянную посуду с резиновыми пробками. Для этого применяют автоклавы.

•Питательные среды, перевязочные материалы и белье стерилизуют при 1атм 15-20 минут, питательные среды с углеводами – при 0,5атм 15 минут, а патогенный материал обеззараживают при 2атм.

14. Механическая стерилизация

•Метод состоит в отделении микробов от жидкости с помощью стерильных микропористых фильтров

•Механизм фильтрации объясняется главным образом адсорбцией микробов, происходящей в порах фильтрующих материалов, которые в большинстве случаев заряжены отрицательно.

•В качестве микропористого фильтрующего материала используют каолин, фарфор, бумажно-асбестовую массу, инфузорную землю, коллодий и другие пористые материалы, а также стекло.

14. Механическая стерилизация

•По механизму действия фильтрующие перегородки, используемые для стерильной фильтрации, подразделяют на глубинные и поверхностные (мембранные) с размером пор не более 0,3 мкм.

•Глубинные фильтры характеризуются сложным механизмом задержания микроорганизмов (ситовым, адсорбционным, инерционным). Ввиду большой толщины таких фильтров удерживаются и частицы меньшего размера, чем размер пор фильтрующей перегородки.

•Глубинные фильтры бывают: керамические и фарфоровые (размер пор 3-4 мкм), стеклянные (около 2 мкм), бумажноасбестовые (1-1,8 мкм). Недостатками керамических и фарфоровых фильтров является продолжительность стерилизации, потеря раствора в порах толстого фильтра, образование микротрещин из-за хрупкости материала и, следовательно, ненадежность стерилизации.