генетика к 2 кр
.pdfG-бэндинг
1.Больше бэндов, чем при С-окраске. Как и С-бэндинг требует красителя Гимза, но предобработка включает трипсин, мочевину или протеиназу.
2.G-бэндинг на растительных хромосомах практически невозможен, повидимому, из-за большего количества ДНК на единицу длины хромосомы, хромомеры слишком плотно упакованы по сравнению с хромосомами млекопитающих.
3.В последние годы появились методики G- окрашивания растительных объектов.
Сравнение метафазной и прометафазной гомологичных хромосом: распределение бэндов соответствует положению желобков на поверхности хромосомы (x 10,000; Harrison, C.J.,
Jack, E.M. Allen, T.D., and Harris, R., J. Cell Sci., 77, 143, 1985.
Courtesy of the Company of Biologists)
Q-бэндинг
1.Хромосомы не проходят предварительную обработку
2.Обработку проводят акрихином или его производными (акрихинипритом)
3.Исследование хромосом проводят с помощью флуоресцентного микроскопа
R-бэндинг
1.Предварительная инкубация препаратов в фосфатном буфере (рН=6.8) в условиях контролируемой температуры (87 °С) в течение 10-12 мин.
2.Окрашивание обратно Q- и G-окрашиванию
Сравнение основных видов дифференциального окрашивания
Название метода |
Основа метода |
Объекты |
Q-бэндинг |
Окрашивание ДНК АТ-специфичными |
Рептилии, птицы, |
|
флуорохромами (акрихин,DAPI, Hoechst |
млекопитающие |
|
33258 ) - жѐлтое свечение |
|
G-бэндинг |
Окрашивание Гимзой после инкубации в |
Рыбы, амфибии, |
|
тѐплом SSC или трипсине |
рептилии, птицы, |
|
|
млекопитающие |
R-бэндинг |
Окрашивание Гимзой после инкубации в |
Млекопитающие |
|
горячем буфере |
|
C-бэндинг |
Окрашивание Гимзой после обработки |
Большинство |
|
щелочью - фиолетовые бэнды |
растений и |
|
|
животных |
Репликацион-ный |
Слияние с BrdU в течение ранней или |
Растения |
бэндинг |
поздней S-фазы после окрашивания |
|
|
Гимзой |
|
Сравнение методик основных способов дифференциального окрашивания
Название метода |
Принцип метода |
|
|
C-бэндинг |
Гимза окрашивает насыщенные сателлитами |
|
прицентромерные районы, выявляет конститутивный |
|
гетерохроматин |
|
|
R-бэндинг |
Выявляет области, насыщенные GC-парами, |
|
противоположен по рисунку G-бэндингу |
|
|
G-бэндинг |
Тѐмные G-бэнды образуются в профазе или ранней |
|
метафазе, благодаря участкам ДНК, способным |
|
связывать краситель |
|
|
Q-бэндинг |
АТ-насыщенные участки ДНК флюоресцируют, |
|
благодаря арихину; GC-области подавляют его |
|
действие; большей частью в гетерохроматине; зависит |
|
также, например, от способности флуорохрома |
|
связываться с гистонами |
|
|
Сравнение С- и G-бэндинга в животных и растительных хромосомах
1.С-, G-, N-, нецентромерные (интерстициальные и теломерные) бэнды в зависимости от интенсивности обработки выявляются как у растений, так и у животных
Повышение жесткости обработки:
G R T C
2.С-бэнды растений богаты АТ-парами, расположены близко друг к другу и подобны бэндам, выявляемым при окраске по Фѐльгену или Q-окраске, потому сравнимы с G-бэндами млекопитающих
3.Степень одинаковости С- и G-бэндов хромосом животных и растений до конца не выяcнена
4.Бэнды хромосом животных более отчетливы
Другие методы
1.T-окраска –вариант R-окраски с преимущественным окрашиванием теломер
2.NOR-бэндинг – окрашивание хромосом аммонийным серебром, при этом окрашивается ядрышковый организатор (вторичная перетяжка)
3.Hy-бэндинг– метод специально разработан для растительных объектов. Включает обработку горячей соляной кислотой (HCl) и окрашивание ацетокармином. Распределение бэндов иное, чем у С-бэндинга
Длина хромосом и число сегментов (бэндов)
в метафазе – 400 (слева) и профазе – 1400 (справа)
Гибридизация in situ. GISH.
GISH of Allium cepa x (A. roylei x A. fistulosum) hybrid