3 курс / Фармакология / Диссертация_Садикова_Н_В_Коррекция_производными_глутаминовой_кислоты

91

При проведении нагрузки объемом у 24-х месячных интактных животных на 20 секунде прирост скорости сокращения и расслабления миокарда, ЛЖД и ЧСС по отношению к исходным значениям составил 45,6; 25,7; 39,4 и -1,2%. У

животных того же возраста, подвергшихся хроническому стрессированию,

прирост +dP/dt max, -dP/dt max, ЛЖД и ЧСС составил 18,0 (р<0,05); 5,6 (р<0,05);

10,4 (р<0,05) и -0,9%, что было существенно ниже значений группы положительного контроля. При введении соединения РГПУ-238 стрессированным животным прирост показателей сократимости миокарда, ЛЖД и ЧСС на 20

секунде составил 42,4 (р<0,05); 37,8 (р<0,05); 38,7 (р<0,05) и 21,5% (р<0,05)

соответственно, что было достоверно выше по сравнению с соответствующим контролем. В группе животных, получавших фенибут, прирост показателей +dP/dt max, -dP/dt max, ЛЖД и ЧСС составил 42,7 (р<0,05); 30,5 (р<0,05); 40,5 (р<0,0) и 1,2%, что также было выше показателей группы контроля (Таблица 8).

Вусловиях максимальной изометрической нагрузки у интактных животных

ввозрасте 24 месяца на 5 секунде окклюзии восходящей части дуги аорты прирост скорости сокращения и расслабления миокарда, ЛЖД и МИФС составил

60,3; 51,6; 122,1 и 217,6% соответственно по сравнению с исходными значениями,

а через 30 секунд проведения нагрузки прирост составил 37,6; 27,4; 87,6 и 102,8%

соответственно. В группе стрессированных животных 24-х месячного возраста прирост показателей +dP/dt max, -dP/dt max, ЛЖД и МИФС на 5 секунде составил

32,8 (р<0,05); 26,7; 52,6 (р<0,05) и 76,7% (р<0,05), на 30 секунде – 11,4 (р<0,05); - 0,9 (р<0,05); 20,4 (р<0,05) и 11,3% (р<0,05) соответственно, что было достоверно ниже по сравнению с интактной группой. В группе животных того же возраста,

получавших исследуемое соединение, прирост показателей сократимости миокарда, ЛЖД и МИФС на 5 секунде проведения изометрической нагрузки составил 56,7 (р<0,05); 46,3; 103,5 (р<0,05) и 200,9% (р<0,05), а через 30 секунд окклюзии восходящей части дуги аорты – 32,6 (р<0,05); 23,1 (р<0,05); 73,3

(р<0,05) и 89,8% (р<0,05) соответственно, что было значительно выше показателей соответствующей группы контроля. В группе животных, получавших фенибут, прирост +dP/dt max, -dP/dt max, ЛЖД и МИФС через 5 секунд окклюзии

92

аорты составил 45,5; 43,5; 90,7 и 150,3%, а через 30 секунд – 23,4; 26,1 (р<0,05); 67,2 (р<0,05) и 74,3% (р<0,05) соответственно, что также превышало прирост контрольной группы стрессированных животных (Таблица 8).

Таким образом, производное глутаминовой кислоты – соединение РГПУ238 – ограничивает повреждающее действие стресса на миокард, о чем свидетельствуют высокие показатели прироста +dP/dt max, -dP/dt max, ЛЖД и МИФС при проведении нагрузочных тестов, наиболее существенные у 24

месячных крыс.

93

ГЛАВА 6. ИЗУЧЕНИЕ МЕХАНИЗМА ДЕЙСТВИЯ НОВОГО ПРОИЗВОДНОГО ГЛУТАМИНОВОЙ КИСЛОТЫ

6.1 Оценка антиоксидантных и антигипоксических свойств соединения РГПУ-238 при стрессорном повреждении миокарда

В результате стрессорного воздействия избыток катехоламинов вызывает чрезмерную интенсификацию процессов перекисного окисления липидов

(Мальцев А.Н. и др., 2010; Pal R. et al., 2011; Pertsov S.S. et al., 2011; Menabde K.O. et al., 2011). Основным продуктом окислительного стресса являются активные формы кислорода (АФК), выступающие в качестве основных медиаторов клеточного повреждения вследствие их разрушающего действия на такие биологически важные молекулы, как липиды, белки, нуклеиновые кислоты

(Меньшикова Е.Б. и др., 2006; Лущак В.И., 2007). Супероксидный и гидроксильный радикалы способны инициировать процессы перекисного окисления в эндоплазматическом ретикулуме, митохондриях, тем самым увеличивая проницаемость клеточных мембран для кальция, что в конечном итоге приводит к повреждению митохондрий, нарушению мембранного транспорта и гибели клеток (Меньщикова Е.Б. и др., 2008; Куликов Ю.В., 2009; Siwik D.A. et al., 2001).

Вэтой связи, представлялось целесообразным изучение влияния нового производного глутаминовой кислоты на выраженность процессов ПОЛ и активность антиоксидантных ферментов у животных, подвергшихся 24-х

часовому иммобилизационно-болевому стрессорному воздействию.

Врезультате эксперимента было выявлено, что уровень диеновых коньюгатов (первичных продуктов ПОЛ) у стрессированных животных составил

3,14±0,18 D233/мг белка, что было на 12,9% (р<0,05) выше, по сравнению с интактной группой, где данный показатель составил 2,78±0,22 D233/мг белка. При

95

стрессированию, данный параметр составил 0,81±0,05 D278/мг белка, что было на

8,0% (р<0,05) выше интакта. Введение нового производного глутаминовой кислоты вызвало снижение количества дикетонов на 16,0% (р<0,05) по сравнению с контрольной группой, значение равнялось 0,68±0,05 D278/мг белка. В группе стрессированных животных, получавших фенибут, данный показатель составил

0,73±0,07 D278/мг белка, что также было ниже значения контрольных животных на

9,9% (р<0,05) (Рисунок 7).

Выявлено, что у стрессированных животных повышалась концентрация малонового диальдегида - вторичного продукта ПОЛ и составляла 9,30±0,79

мМ/мг белка, в то время как у интактных животных показатель был равен

7,11±1,79 мМ/мг белка. Таким образом, концентрация МДА у стрессированных крыс превышала таковую группы контроля на 30,8% (р<0,05). В группе животных, получавших соединение РГПУ-238, концентрация МДА равнялась

7,90±0,84 мМ/мг белка, что было на 15,0% (р<0,05) ниже, чем у контрольной группы. Препарат сравнения фенибут вызывал менее выраженное снижение МДА, который составил 8,31±0,48 мМ/мг белка, что было на 10,6% ниже по сравнению с группой контроля (Рисунок 7).

Активность антиоксидантной системы оценивали по концентрации ферментов: супероксиддисмутазы, каталазы, глутатионпероксидазы.

Стрессорное воздействие приводило к снижению активности СОД,

концентрация которого составила 34,63±5,33 у.е./мг белка, что было на 32,4% (р<0,05) ниже значения интактной группы. У стрессированных животных,

получавших соединение РГПУ-238, данный показатель составил 39,57±5,60

у.е./мг белка, что было на 14,3% выше группы контроля. У животных,

получавших фенибут, активность СОД составила 51,36±6,17 у.е./мг белка, что было на 48,3% (р<0,05) выше группы контроля (Рисунок 8).

97

также вызывал повышение активности каталазы, концентрация МДА у данной группы животных составляла 12,49±1,72 мг H2O2/мин/мг белка, что было на

38,8% (р<0,05) выше по сравнению с группой контроля (Рисунок 8).

Активность глутатионпероксидазы у стрессированных животных составил

28,96±4,23 мМ глутатиона/мин/мг белка, что было на 43,8% (р<0,05) ниже, по сравнению с интактной группой, где данный показатель составил 51,58±8,96 мМ глутатиона/мин/мг белка. При введении соединения РГПУ-238 стрессированным животным активность ГП повысилась на 19,3% по сравнению с контрольной группой и составила 34,54±5,49 мМ глутатиона/мин/мг белка. Введение фенибута вызвало увеличение активности фермента на 86,6% (р<0,05), что равнялось

54,04±7,07 мМ глутатиона/мин/мг белка (Рисунок 8).

Таким образом, при иммобилизационно-болевом стрессорном воздействии наблюдается интенсификация процессов свободнорадикального окисления, на что указывает увеличение продуктов ПОЛ и снижение активности антиоксидантных ферментов. Соединение РГПУ-238 ограничивает процессы ПОЛ, способствуя снижению концентрации их продуктов и повышению активности антиоксидантных ферментов.

Изучение антигипоксического действия соединения РГПУ-238

проводилось на мышах-самцах массой 39±2 г. Исследуемое соединение в дозе

28,7 мг/кг и препарат сравнения - фенибут в дозе 25 мг/кг вводили внутрибрюшинно за 20 мин. до начала эксперимента, контрольной группе животных вводился физ. р-р в эквивалентном объеме.

На модели нормобарической гипоксии с гиперкапнией было выявлено, что соединение РГПУ-238 увеличивало продолжительность жизни животных по сравнению с контрольной группой и данный эффект был сопоставим с препаратом сравнения (Рисунок 9).