3 курс / Фармакология / Диссертация_Бригадирова_А_А_Фармакологические_свойства_новых_производных

111

112

113

114

Таблица 7.3 – Морфометрическое исследование срезов почек, окрашенных по Массону, крыссамцов со стрептозотоцин-индуцированным сахарным диабетом и диабетической нефропатией, получавших соединения DF-5 (12,5 мг/кг в/ж) и ALT-711 (12,5 мг/кг в/ж), к концу исследования (30-дневное введение).

Примечание: * – различия с показателями интактного контроля достоверны, p<0,05 (U-критерий Манна-Уитни); # – различия с показателями контрольный группы (СД) достоверны, p<0,05 (U- критерий Манна-Уитни).

.

115

Таблица 7.4 – Морфометрическое иммуногистохимическое исследование срезов почек крыс-самцов со стрептозотоцин-индуцированным сахарным диабетом и диабетической нефропатией, получавших соединения DF-5 (12,5 мг/кг в/ж) и ALT-711 (12,5 мг/кг в/ж), к концу исследования (30-дневное введение).

Примечание: ПК – площадь клубочка; ППМ – площадь позитивного материала; ОППМ – относительная площадь позитивного материала; ИГХ

–иммуногистохимическое исследование; AGEs – конечные продукты гликирования; RAGE – рецептор к конечным продуктам гликирования; *

–различия с показателями интактного контроля достоверны, p<0,05 (U-критерий Манна-Уитни); # – различия с показателями контрольной группы (СД) достоверны, p<0,05 (U-критерий Манна-Уитни).

116

7.2. Изучение гипогликемической активности соединения AZH-141 при введении

интактным крысам-самцам

С учетом данных современных научных исследований в области этиологии и патогенеза СД, по-прежнему актуальной считается задача по поиску и созданию инновационных антидиабетических соединений, воздействующих на ранее незадействованные мишени,

играющие первостепенную роль в развитии СД. Ингибирование протеинтирозинфосфатазы 1B (PTP1B) является перспективным направлением поиска новых лекарственных средств для терапии СД типа 2. PTP1B играет главную роль из всех протеинфосфатаз в процессе дефосфорилирования рецептора инсулина и, как следствие, в модуляции инсулиновой сигнализации [Johnson T. O., 2002]. Другая мишень, АМФ-активируемая протеинкиназа (AMPK),

является главным регулятором клеточного энергетического гомеостаза. При ее активации выявляются инсулин-сенситизирующие эффекты, что делает ее потенциальной мишенью в терапии СД 2 типа [Coughlan K.A., 2014].

Опираясь на результаты предыдущих исследований in vitro соединения AZH-141, с учетом выявленных у него ингибирующей PTP1B активности и способности активировать AMPK, а

также на полученное для него самое высокое значение антидиабетического функционала в исследованиях in vivo мы оценили его антидиабетогенное действие при однократном в/ж

введении интактным животным и при курсовом (21 день) введении животным со стрептозотоцин-индуцированным СД на фоне высокожировой диеты. Данная экспериментальная модель со смешанным рационом на основе высокожировой диеты и последующей индукцией СД с помощью инъекции стрептозотоцина приводит к увеличению массы тела животных,

увеличению площади адипоцитов и постепенному развитию гипергликемии и инсулинорезистентности по рецепторному механизму. За счет увеличения площади адипоцитов происходит уменьшение количества инсулиновых рецепторов на единицу площади [Olefsky J. M., 1981].

С учетом данных литературы о проведении исследований in vivo по изучению активаторов

AMPK на моделях СД и/или метаболического синдрома для соединения AZH-141 была выбрана доза 30 мг/кг (в/ж) [Cool B., 2006], а в качестве препарата сравнения был взят метформин в дозе

450 мг/кг (в/ж) как препарат со схожим механизмом действия [Zhou G., 2001], так как активация

AMPK метформином вовлечена в его нормализующее действие на гипергликемию без стимуляции секреции инсулина и снижение глюконеогенеза в печени.

Согласно результатам проведенных исследований, соединение AZH-141 оказывает гипогликемический эффект у интактных животных при однократном в/ж введении в дозе 300

мг/кг. При изучении уровня гипогликемической активности соединения AZH-141 было выявлено, что при введении AZH-141 значительно снижает уровень глюкозы в плазме крови по

117

сравнению с контролем (1% водный раствор КМЦ) (4,66±0,11 ммоль/л против 5,59±0,11 ммоль/л

на 120 мин после введения; 4,34±0,18 ммоль/л против 5,42±0,14 ммоль/л на 360 мин после

введения) (p<0,05), что сопоставимо с проявленной активностью препарата сравнения

метформина (рис. 7.25). Также было показано, что AZH-141 через 2 часа после введения снижает

уровень глюкозы на 12,5% по сравнению с исходными значениями в 0 ч, а к шестому часу

наблюдений уровень гликемии уменьшается на 18,5% (р<0,05) (рис. 7.25).

Рисунок 7.25. Влияние соединения AZH-141 и метформина при в/ж введении в дозе 300 мг/кг на уровень глюкозы в плазме крови (ммоль/л; M±m) интактных крыс-самцов. Примечание: * – различия с показателями группы контроля метформина статистически значимы (p<0,05, непарный t-тест), & – различия с исходными показателями в 0 ч метформина статистически значимы (p<0,05, парный t-тест), # – различия с показателями группы контроля соединения AZH-141 статистически значимы (p<0,05, непарный t-тест), $ – различия с исходными показателями в 0 ч соединения AZH-141 статистически значимы (p<0,05, парный t-тест).

7.3 Изучение антидиабетической активности соединения AZH-141 на модели

стрептозотоцин-индуцированного сахарного диабета у крыс, находящихся на

высокожировой диете

7.3.1 Влияние соединения AZH-141 и метформина на массу тела животных

Антидиабетическую активность соединения AZH-141 в дозе 30 мг/кг и препарата сравнения метформина в дозе 450 мг/кг изучали при в/ж введении на модели стрептозотоцин (35

мг/кг) – индуцированного сахарного диабета типа 2 у крыс-самцов, содержащихся на высокожировой диете (58% жиров, 25% белка, 17% углеводов от общего количества калорий). В

эксперимент включали животных с уровнем глюкозы в плазме крови натощак > 15 ммоль/л.

Гибель животных, включенных в эксперимент, не наблюдалась. В целом, динамика массы тела животных, получавших соединение AZH-141, статистически значимо не отличалась от таковой в группе отрицательного контроля (1% водный раствор КМЦ). В течение всего срока исследования животные контрольной группы набирали вес, в то же время масса тела животных,

118

получавших вещество AZH-141, немного снизилась, но данный эффект был статистически незначим по сравнению с исходными значениями массы тела крыс (рис. 7.26).

В группе крыс, получавших метформин, прирост массы тела также не наблюдался,

средняя масса тела животных даже незначительно снизилась, однако, как и в случае с соединением AZH-141, не было выявлено статистически значимых различий массы тела животных на 21-е сутки введения метформина с их исходными показателями (рис. 7.26).

Таким образом, динамика изменения массы тела животных имела схожий характер в группе вещества AZH-141 и в группе препарата сравнения метформина.

Рисунок 7.26. Влияние соединения AZH-141 (30 мг/кг в/ж) и метформина (450 мг/кг в/ж) на массу тела (г; M±m) крыс-самцов со стрептозотоцин-индуцированным сахарным диабетом на фоне высокожировой диеты в течение 21-дневного введения.

7.3.2 Влияние соединения AZH-141 и метформина на уровень гликемии крови

Было показано, что применение соединения AZH-141 в течение 21 суток предотвращает прогрессирование СД 2 типа на фоне высокожировой диеты, и значительно снижает уровень глюкозы в плазме крови по сравнению как с исходными значениями (13,6±0,7 ммоль/л против

21,9±0,9 ммоль/л) (p<0,05), так и с отрицательным контролем (1% водный раствор КМЦ) (13,6±0,7 ммоль/л против 21,4±1,8 ммоль/л) (p<0,05) (таблица 7.5).

В то же время метформин, в отличие от соединения AZH-141, оказывал статистически значимое влияние на базальный уровень глюкозы в плазме крови в течение всего периода терапии, начиная с первого дня введения, по сравнению с исходными показателями и показателями отрицательного контроля (табл. 7.5).

Стоит отметить, что выраженность гипогликемического эффекта соединения AZH-141

статистически незначимо превосходит аналогичный эффект метформина на 21-й день введения

(табл. 7.5).

119

Таблица 7.5 – Влияние соединения AZH-141 (30 мг/кг в/ж) и метформина (450 мг/кг в/ж) на базальный уровень глюкозы в плазме крови (натощак) (ммоль/л; M±m) крыс-самцов со стрептозотоцин-индуцированным сахарным диабетом на фоне высокожировой диеты в течение 21-дневного введения.

Примечание: Д0, Д1, Д5, Д10, Д15, Д21 – день 0 (исходно), день 1, день 5, день 10, день 15 и день 21, соответственно; КМЦ – карбоксиметилцеллюлоза; отличия от значения в Д0 достоверны: * – при p<0,05 (критерий Вилкоксона); различия с показателями отрицательного контроля (1% водный раствор КМЦ) достоверны: # – при p<0,05 (критерий Краскела-Уоллиса с постестом Данна).

120

Результаты глюкозотолерантного теста свидетельствуют о том, что для соединения AZH-

141 характерен только краткосрочный антигипергликемический эффект на 15 мин после его в/ж

введения (рис. 7.27). Так через 15 мин после в/ж введения AZH-141 регистрировалось значимое

уменьшение уровня гликемии на 13,9% по сравнению с отрицательным контролем (1% водный

раствор КМЦ) (p<0,05), а спустя 30 мин и далее уровень глюкозы в указанной группе не

отличался от значений группы отрицательного контроля.

При этом в группе животных, получавшей препарат сравнения, через 15 мин после в/ж

введения метформина было зафиксировано уменьшение уровня гликемии на 19,0% по сравнению

с контролем, а спустя 30 мин после введения глюкозы ее уровень в плазме крови снизился на

22,0% по сравнению с контрольными значениями. При исследовании образцов крови первого

часа было выявлено, что уровень глюкозы в крови крыс, получавших метформин, составил

15,01±0,28 ммоль/л, что ниже значений, полученных для группы отрицательного контроля. При

этом гипогликемическая активность метформина превалировала над таковой AZH-141; так, на

30-й и 60-й мин наблюдения содержание глюкозы в плазме крови в группе животных,

получавших метформин, понизилось на 19,8% и на 15,7%, соответственно, по сравнению с

группой, получавшей вещество AZH-141 (р<0,05).

На основании полученных данных можно сделать вывод, что для соединения AZH-141

был характерен краткосрочный эффект, отражающийся в статистически значимом понижении

уровня глюкозы в крови на 15 минуте. Впоследствии этот эффект нивелировался.

Рисунок 7.27. Влияние соединения AZH-141 (30 мг/кг в/ж) и метформина (450 мг/кг в/ж) после продолжительного курса введения (Д21; 21-е сутки) на уровень глюкозы в плазме крови (ммоль/л; M±m) крыс-самцов со стрептозотоцин-индуцированным сахарным диабетом на фоне высокожировой диеты после пероральной нагрузки глюкозой (2 г/кг). Примечание: различия с показателями группы контроля достоверны: * – при p<0,05 (однофакторный дисперсионный анализ с посттестом Даннета); различия с показателями группы, получавшей AZH-141 (30 мг/кг в/ж), достоверны: # – при p<0,05 (однофакторный дисперсионный анализ с посттестом Даннета).