3 курс / Фармакология / Диссертация_Экова_М_Р_Морфофункциональные_изменения_гиппокампа_при

101

Иммуногистохимическое исследование экспрессии сериновой рацемазы

При оценке результатов иммуногистохимического исследования дорсального отдела гиппокампа 12-ти месячных стрессированных крыс с использованием антител против СР отмечаются различия в локализации ИРМ в СА1. У стрессированных животных ИРМ локализован преимущественно в перикарионах нейронов пирамидного слоя (2 балла). В радиальном слое отмечается слабо выраженная экспрессия ИРМ (1 балл) лишь в единичных

дендритах в отличие от контрольной группы животных, у которых в большинстве

дендритах наблюдается умеренно выраженная степень экспрессии ИРМ (2 балла)

(Рисунок 44).

Рисунок 44. Гистологическое строение СА1 дорсального отдела гиппокампа крысы в возрасте 12-ти месяцев (а) и крысы в возрасте 12-ти месяцев находившейся в течение 7 суток под влиянием комбинированного стресса (б). Умеренно выраженная цитоплазматическая экспрессия ИРМ в нейронах пирамидного слоя и в дендритах радиального слоя (а). Уменьшение содержания ИРМ в дендритах радиального слоя (б). Иммуногистохимическое исследование, антитела против сериновой рацемазы, докраска гематоксилином. Ув. Х 400.

иммунопозитивных нейронов пирамидного слоя и относительной площади ИРМ в

СА1 не обнаружено. В группе контрольных животных относительная площадь

ИРМ составила 15,4 (11,9-22,8) %, удельное количество иммунопозитивных

нейронов 85,9 (80,4-93,8) %, а в группе стрессированных животных – 8 (4,9-20,8)

% (p=0,090) и 93,1 (66,1-100) % (p=0,483), соответственно.

102

У 12-ти месячных стрессированных животных в СА3 наряду с иммунопозитивными нейронами (2 балла) встречаются нейроны с иммуннонегативной реакцией, которые характеризуются сморщиванием перикарионов, базофилией цитоплазмы и овальным гиперхромным ядром.

Иммунопозитивные нейроны имели не всегда чётко различимые границы

перикарионов. Отмечалось снижение экспрессии ИРМ в дендритах радиального

слоя СА3 (1 балл) (Рисунок 45).

Рисунок 45. Гистологическое строение СА3 дорсального отдела гиппокампа крысы в возрасте 12-ти месяцев (а) и крысы в возрасте 12-ти месяцев находившейся в течение 7 суток под влиянием комбинированного стресса (б). Умеренно выраженная цитоплазматическая экспрессия ИРМ в нейронах пирамидного слоя и в дендритах радиального слоя (а). Уменьшение содержания ИРМ в дендритах радиального слоя (б). Иммуногистохимическое исследование, антитела против сериновой рацемазы, докраска гематоксилином. Ув. Х 400.

иммунопозитивных нейронов пирамидного слоя и относительной площади ИРМ

в СА3 не обнаружено. В группе контрольных животных относительная площадь

ИРМ составила 10,1 (9-14) %, удельное количество иммунопозитивных нейронов

96,8 (92,3-100) %, а в группе стрессированных животных – 7,9 (3,4-10,6) %

(p=0,049) и 88,5 (75-97,9) % (p=0,066), соответственно.

Таким образом, при моделировании комбинированного стресса у крыс в

возрасте 12-ти месяцев, в СА1 и СА3 дорсального отдела гиппокампа отмечается

перераспределением СР-ИМП, с его преимущественной локализацией в

103

цитоплазме перикарионов нейронов пирамидного слоя, сопровождающееся

снижением степени экспрессии СР в дендритах радиального слоя.

Иммуногистохимическое исследование экспрессии синаптофизина

гиппокампа 12-ти месячных стрессированных крыс с использованием антител

против СФ в нейропиле пирамидного слоя СА1 и СА3 отмечается умеренно

выраженная экспрессия ИРМ (2 балла) (Рисунок 46).

Рисунок 46. Гистологическое строение СА1 дорсального отдела гиппокампа крысы в возрасте 12-ти месяцев (а) и крысы в возрасте 12-ти месяцев находившейся в течение 7 суток под влиянием комбинированного стресса (б). Умеренно выраженная экспрессия ИРМ в нейропиле пирамидного, радиального, краевого слоях (а). Уменьшение содержания ИРМ в нейропиле пирамидного, радиального и краевого слоях (б). Иммуногистохимическое исследование, антитела против синаптофизина, докраска гематоксилином. Ув. Х 400.

Однако, в отличие от контрольной группы, у большинства крыс в возрасте

12-ти месяцев, находившихся в течение 7 суток под влиянием комбинированного

стресса, экспрессия носила неравномерный характер, в виде крупно- и

мелкогранулярных вкраплений СФ-ИРМ в пирамидном, радиальном и молекулярном слоях. У некоторых животных в единичных полях зрения

наблюдались участки с практически полным отсутствием экспрессии СФ-ИРМ.

При компьютерном морфометрическом анализе обнаружено достоверное

снижение относительной площади ИРМ у 12-ти месячных стрессированных крыс,

по сравнению с контрольной группой животных в СА1 и СА3 дорсального отдела

гиппокампа (Рисунок 47).

104

Рисунок 47. Динамика изменения относительной площади синаптофизиниммунореактивного материала в СА1 и СА3 дорсального отдела гиппокампа 12ти месячных контрольных и стрессированных крыс. * - различия между группами статистически значимы (критерий Манна-Уитни с поправкой Бонферрони).

В СА1 относительная площадь СФ-ИРМ уменьшилась на 21,9 % (р<0,001) и

составила 16,6 (12,8-30) %. В СА3 относительная площадь ИРМ составила 19,9

(12,3-28,3) % и уменьшилась на 15,1 % (р<0,001) (Рисунок 47).

Таким образом, у крыс в возрасте 12-ти месяцев, находившихся в течение 7

суток под влиянием комбинированного стресса в СА1 и СА3 дорсального отдела

гиппокампа обнаружено уменьшение относительной площади СФ-ИРМ.

3.2.3. Патоморфологическая характеристика вентрального отдела

гиппокампа крыс в возрасте 12-ти месяцев при моделировании

комбинированного стресса

При нейрогистологическом исследовании вентрального отдела гиппокампа

12-ти месячных стрессированных животных не было обнаружено существенных различий в строении цитоархитектонических областей СА1 и СА3 по сравнению с дорсальным отделом гиппокампа. Однако в ходе проведения морфометрического исследования только в СА1 было выявлено достоверное увеличение удельного количества сморщенных нейронов с гиперхроматозом цитоплазмы на 17 %

(р<0,001), по сравнению с контрольной группой и составило 4,9 (3,1-15,1) % у

контрольных животных и 21,9 (12,3-54,7) % - у стрессированных животных. В

105

СА3 не было обнаружено различий в изменении данного параметра. Удельное количество сморщенных нейронов с гиперхроматозом цитоплазмы составило 14,2 (4,8-34,9) % у контрольных крыс и 14,7 (6,6-43,3) % - у стрессированных животных. Также не наблюдалось достоверных различий в ширине пирамидного слоя СА1 и СА3 вентрального отдела гиппокампа между исследуемыми группами животных. В пирамидном слое СА1 и СА3 нейроны располагались в 3-6 слоев.

Ширина пирамидного слоя у контрольных животных составила 48,9 (44,6-61,2)

мкм в СА1 и 58,6 (50,4-73,8) мкм в СА3, у стрессированных крыс в СА1 – 51,7 (44,4-62,4) мкм, в СА3 – 61,2 (54,4-68,9) мкм. Морфометрическая оценка абсолютных показателей в пирамидном слое СА1 вентрального отдела гиппокампа продемонстрировала уменьшение средней площади цитоплазмы перикарионов нейронов и увеличение ядерно-цитоплазматического отношения у

12-ти месячных стрессированных крыс по сравнению с контрольными животными (р<0,001) (Таблица 6).

В СА3 отмечалось уменьшение средней площади перикарионов (р<0,001),

средней площади цитоплазмы перикарионов нейронов (р<0,001), относительной площади цитоплазмы перикарионов нейронов (р=0,010), увеличение ядерно-

цитоплазматического отношения (р<0,001) у 12-ти месячных стрессированных крыс по сравнению с контрольными животными (Таблица 6). Достоверных различий в средней площади перикарионов нейронов и относительных морфометрических параметрах в СА1, а также отношения относительной площади перикарионов нейронов к нейропилю и средней площади ядер нейронов в СА1 и СА3 между группами обнаружено не было (Таблица 6).

106

Таблица 6 – Изменение морфометрических параметров нейронов пирамидного

слоя вентрального отдела гиппокампа крыс, Ме (Q1-Q2)

107

Продолжение таблицы 6

Таким образом, в отличие от дорсального отдела гиппокампа, у крыс в

возрасте 12-ти месяцев, подвергнутых воздействию комбинированного стресса, в

108

вентральном отделе наиболее уязвимой цитоархитектонической областью является СА1, что выражается увеличением на 17 % в пирамидном слое удельного количества сморщенных нейронов с гиперхроматозом цитоплазмы.

3.2.4. Иммуногистохимическая характеристика вентрального отдела гиппокампа крыс в возрасте 12-ти месяцев, подвергнутых воздействию комбинированного стресса

Иммуногистохимическое исследование экспрессии caspase-3

При оценке результатов иммуногистохимического исследования вентрального отдела гиппокампа 12-ти месячных стрессированных крыс с использование антител к caspase-3 в цитоплазме большинства перикарионов нейронов пирамидного слоя СА1 и СА3 как и в контрольной группе животных отмечалась иммунонегативная реакция. В единичных полях зрения пирамидного слоя СА1 и СА3 встречались нейроны со слабовыраженной гранулярной цитоплазматической экспрессией в перикарионах. При этом достоверно значимых различий в изменении удельного количества иммунопозитивных нейронов пирамидного слоя СА1 и СА3 между контрольными и стрессированными животными обнаружено не было.

Таким образом, при моделировании комбинированного стресса, у крыс в возрасте 12-ти месяцев в СА1 и СА3 вентрального отдела гиппокампа, нами не было выявлено различий в характере и степени экспрессии caspase-3, по сравнению с контрольной группой животных.

Иммуногистохимическое исследование экспрессии iNOS

При иммуногистохимическом исследовании вентрального отдела гиппокампа 12-ти месячных стрессированных крыс с использованием антител против iNOS в СА1 и СА3 экспрессия ИРМ носила схожий характер со степенью экспрессии и распределением iNOS-ИРМ в СА1 и СА3 дорсального отдела гиппокампа. Увеличивалось количество нейронов с выраженной и умеренно выраженной цитоплазматической экспрессией ИРМ (Рисунок 48, рисунок 50).

109

Рисунок 48. Гистологическое строение СА1 вентрального отдела гиппокампа крысы в возрасте 12-ти месяцев (а) и крысы в возрасте 12-ти месяцев находившейся в течение 7 суток под влиянием комбинированного стресса (б). Слабовыраженная экспрессия ИРМ в цитоплазме большинства перикарионов нейронов пирамидного слоя и в нейропиле радиального слоя (а). Увеличение содержания ИРМ в цитоплазме перикарионов нейронов пирамидного слоя (б). Иммуногистохимическое исследование, антитела против iNOS, докраска гематоксилином. Ув. Х 400.

При проведении морфометрического исследования отмечалось увеличение

удельного количества иммунопозитивных нейронов в пирамидном слое СА1 на

39 %, по сравнению с контрольной группой 12-ти месячных животных,

достигающее 86,1 (69,5-100) % (р<0,001) (Рисунок 49). Были обнаружены

достоверные различия в изменении относительной площади iNOS-ИРМ в СA1

вентрального отдела гиппокампа между контрольными и стрессированными

животными (р<0,001). Относительная площадь ИРМ в СА1 у контрольной группы

животных составила 12,8 (10,7-15) %, у 12-ти месячных стрессированных крыс –

29,8 (20,5-34,9) % (Рисунок 49).

Обнаружено увеличение удельного количества иммунопозитивных

нейронов в пирамидном слое СА3 на 54,3 % (р<0,001), которое составило 100

(82,4-100) %. Относительная площадь ИРМ в СА3 гиппокампа у стрессированных

крыс увеличилась на 11,5 % (р<0,001), что составило 34,5 (23,8-36,7) % (Рисунок

49).

110

а

б

Рисунок 49. Динамика изменения удельного количества iNOSиммунопозитивных нейронов пирамидного слоя СА1 и СА3 вентрального отдела гиппокампа 12-ти месячных контрольных и стрессированных крыс (а). Динамика изменения относительной площади iNOS-иммунореактивного материала пирамидного слоя СА1 и СА3 вентрального отдела гиппокампа 12-ти месячных контрольных и стрессированных крыс (б). * - различия между группами статистически значимы (критерий Манна-Уитни с поправкой Бонферрони).