5 курс / Пульмонология и фтизиатрия / ХРОНИЧЕСКАЯ_ОБСТРУКТИВНАЯ_БОЛЕЗНЬ_ЛЁГКИХ_ПЕРСПЕКТИВЫ_ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ
.pdf
Приложение
Рис. 19. Иммуногистохимическое окрашивание (коричневая окраска) на специфические клеточные маркеры: α1-антитрипсин (A1AT), CD31, панцитокератин (AE1/AE3), Е-кадге- рин, CD16 в лёгких мышей C57BL/6 (а). Относительное содержание клеток, экспрессирующих антигены альфа-1 антитрипсина (А1АТ) (b), CD31 (c), пан-цитокератина (AE1/AE3) (d), Е-кадгерина (e) и CD16 (f) в лёгких мышей интаткного контроля («Intact control»), мышей с эмфиземой лёгких, вызванной введением эластазы («Lung emphysema»), и мышей с эмфиземой в условиях введения Триамида («Lung emphysema+Treamid»), выделенных от самцов мышей C57BL / 6 при иммуногистохимическом окрашивании на специфический клеточный маркер: альфа-1 антитрипсин, CD31, пан-цитокератин, Е-кадгерин и CD16, (21 сутки эксперимента). Результаты представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего. Достоверные различия * – с интактным контролем; ● – с группой «Lung emphysema» (по критерию Манна–Уитни (p < 0,05)).
241
Хроническая обструктивная болезнь лёгких:
перспективы фармакологической регуляции стволовых клеток в клинике
Рис. 20. Микрофотографии срезов легкого (среднее лёгочное поле), полученных от мы- шей-самок линии C57BL/6 интактного контроля (а, d, Intakt control), мышей с эмфиземой лёгких, вызванной введением эластазы (b, e, Lung emphysema) и мышей с эмфиземой лёгких в условиях введения Триамида (c, f, Lung emphysema+Treamid). Перебронхеальное (a, b, c) и переваскулярное (d, e, f) воспаление в легочной ткани. Окраска гематоксилином и эозином, ув. ×400. Препараты изготовлены на 21 сутки эксперимента. Количественная оценка воспаления на гистологических препаратах лёгких (g). Общий индекс воспаления (количество клеток воспаления / µm базальной мембраны) был определен во всех трёх группах. Результаты представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего. Достоверные различия * – с интактным контролем; ● – с группой «Lung emphysema» (по критерию Манна–Уитни (p < 0,05)).
242
Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/
Приложение
Рис. 21. Характеристика популяции клеток воспаления CD45+CD19-Sca1+CD11b+F4/80+, CD45+Sca1+CD11b+, F4/80+CD11b+ и F4/80lowCD11blow, выделенных из лёгких мышей самок
C57BL/6 на 21 сутки эксперимента. Клетки анализировали проточной цитометрией с использованием антител CD45, CD19, CD11b, Sca1, F4/80. Точечные графики представляют три независимых эксперимента со средним значением из трёх независимых эксперимен-
тов. Содержание клеток воспаления CD45+CD19-Sca1+CD11b+F4/80+ (a) CD45+Sca1+CD11b+ (b), F4/80+CD11b+ (c) и F4/80lowCD11blow (d) в лёгких мышей интактного контроля («Intact control»), мышей с эмфиземой лёгких, вызванной введением эластазы («Lung emphуsema»), и мышей с эмфиземой в условиях введения Триамида, («Lung emphуsema+Treamid»). Результаты представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего. Достоверные различия * – с интактным контролем; ● – с группой «Lung emphysema» (по критерию Ман- на–Уитни (p < 0,05)). (e) Установление фенотипа и качественный анализ CD45 (PerCP). (f) Установление фенотипа и качественный анализ CD19 (FITC). (g) установление фенотипа и качественный анализ экспрессии CD11b (Alexa-647) и F4/80 (BV421).
243
Хроническая обструктивная болезнь лёгких:
перспективы фармакологической регуляции стволовых клеток в клинике
Рис. 22. Иммуногистохимическое окрашивание (коричневая окраска) на специфические клеточные маркеры: нейтрофильная эластаза, ММП9 и ММП12 в лёгких мышей C57BL/6 (а). Относительное содержание клеток, экспрессирующих антигены нейтрофильной эластазы (b), ММП9 (c) и ММП12 (d) в лёгких мышей интактного контроля («Intact control»), мышей с эмфиземой лёгких, вызванной введением эластазы («Lung emphysema»), и мышей с эмфиземой в условиях введения Триамида («Lung emphysema +Treamid»), выделенных от самцов мышей C57BL/6 при иммуногистохимическом окрашивании на специфический клеточный маркер: нейтрофильная эластаза, ММП9, ММП12 (21 сутки эксперимента). Результаты представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего. Достоверные различия * – с интактным контролем; ● – с группой «Lung emphysema» (по критерию Ман-
на–Уитни (p < 0,05)).
244
Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/
Приложение
Рис. 23. Характеристика популяции клеток Клара (CD45-CD31-CD34-Sca1+) и стволовых клеток лёгких (CD45-CD117+CD49f+), выделенных из лёгких мышей самок C57BL/6 на 21 сутки эксперимента. Клетки анализировали проточной цитометрией с использованием анти-
тел CD31, CD34, CD45, CD49f, CD117 (c-kit), Sca1. Точечные графики представляют три не-
зависимых эксперимента со среднимзначением изтрёхнезависимыхэкспериментов. Содержание клеток Клара (a), стволовых клеток лёгких CD45-CD117+CD49f+ (b) в лёгких мышей интактного контроля («Intact control»), мышей с эмфиземой лёгких, вызванной введением эластазы («Lung emphysema»), и мышей с эмфиземой лёгких в условиях введения Триамида, («Lung emphysema+Treamid»). Результаты представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего. Достоверные различия * – с интактным контролем; ● – с группой «Lung emphysema» (по критерию Манна–Уитни (p < 0,05)). (c) установление фенотипа и качественный анализ CD45 (PerCP) и CD49 (FITC). (d) установление фенотипа и качественный анализ CD117 (c-kit) (PE-CY7). (e) установление фенотипа и качественный анализ экспрессии CD45 (PerCP). (f) установление фенотипа и качественный анализ CD34 (FITC) и CD31 (APC). (g) установление фенотипа и качественный анализ экспрессии Sca1 (PE-Cy7).
245
Хроническая обструктивная болезнь лёгких:
перспективы фармакологической регуляции стволовых клеток в клинике
Рис. 24. Характеристика популяций эндотелиальных прогениторных клеток
CD31+CD34+CD45-иCD309+CD45-,клетокпредшественниковангиогенезаCD45-CD117+Flk1+,
выделенных из лёгких мышей самок C57BL/6 на 21 сутки эксперимента. Клетки анализировали проточной цитометрией с использованием антител CD45, CD31, CD34, CD117, CD309 (Flk1).Точечныеграфикипредставляюттринезависимыхэкспериментасосреднимзначениемизтрёхнезависимыхэкспериментов.Содержаниеэндотелиальныхпрогениторныхклеток CD31+CD34+CD45- (a),клеток предшественников ангиогенезаCD45-CD117+Flk1+ (b), эндотелиальных клеток CD309+CD45- (c) в лёгких мышей интактного контроля («Intact control»), мышей с эмфиземой лёгких, вызванной введением эластазы («Lung emphysema»), и мышей с эмфиземой в условиях введения Триамида («Lung emphysema+Treamid»). Результаты представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего. Достоверные различия * – с интактным контролем; ● – с группой «Lung emphysema» (по критерию Манна–Уитни (p < 0,05)). (d) установление фенотипа и качественный анализ CD45 (PerCP) и CD309 (APC). (e) установление фенотипа и качественный анализ CD45 (PerCP). (f) установление фенотипа и качественный анализ экспрессии CD117 (PE-Cy7) и CD309 (APC). (g) установление фенотипа и качественный анализ CD34 (FITC) и CD31 (APC).
246
Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/
Приложение
Рис. 25. Содержание протеина клеток Клара в гомогенате лёгких мышей линии С57BL/6 интактного контроля («Intact control»), мышей эмфиземой лёгких, вызванной введением эластазы («Lung emphysema»), и мышей с эмфиземой в условиях введения Триамида («Lung emphysema +Treamid») на 21 сутки эксперимента. Результаты представлены как среднее зна- чение±стандартнаяошибкасреднего.Достоверныеразличия*–синтактнымконтролем(по критерию Манна–Уитни (p < 0,05)).
247
А.М. Дыгай, Е.Г. Скурихин, Э.С. Пан
ХРОНИЧЕСКАЯ ОБСТРУКТИВНАЯ БОЛЕЗНЬ ЛЁГКИХ: ПЕРСПЕКТИВЫ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ
РЕГУЛЯЦИИ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК
В КЛИНИКЕ
Формат 70x100 1/16
Гарнитура Times
Усл.-п. л. 20,15. Уч.-изд. л. 15,5
Тираж 300 экз.
Издатель – Российская академия наук
Публикуется в авторской редакции
Верстка и печать ‒ УНИД РАН Отпечатано в экспериментальной цифровой типографии РАН
Издается по решению Научно-издательского совета Российской академии наук (НИСО РАН) от 01.02.2022 г. и распространяется бесплатно
Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/