2 курс / Гистология / ЭТАПЫ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПРЕПАРАТОВ
.pdf
2202201442298150 (на сметанку)
Оладий продакшн
ВСЕМ ПРИВЕТ!
Я Арина-Оладий, создатель Оладий-продакшн и я хочу показать вам, что гистология крутая и супер интересная
Перед вами мой инфо-продукт в виде методичек собственного написания
ДИСКЛЕЙМЕР:
Моя цель дать людям знания в своей манере, просто и доступно. Я не преследую цели кого-то оскорбить или что-либо еще, но я люблю шутить и иногда матерюсь) не воспринимайте близко к сердцу
ЗАЧЕМ Я ЭТО ДЕЛАЮ?
Потому что, отучившись год на кафедре, прекрасно поняла, как сложно искать информацию одновременно во всех учебниках, мнения авторов которых не всегда одинаковые, а также не иметь возможности открыть 1 материал и найти ответ на все вопросы. Поэтому я взяла все в свои ручки и создаю для вас методички)
Гистология может казаться сложной и непонятной, но поверьте, если вы разберете ее для себя, вы будете мыслить абсолютно иначе! Это очень круто)
ИЗ ЧЕГО СОСТОЯТ МЕТОДИЧКИ:
В основе кафедральные методичик+лекции Глинкиной и ведущих преподавателей+ Материалы учебников (Быков, Афанасьев, Кузнецов) Все материалы отобраны, выверены и проверены
Все мои материалы абсолютно бесплатные от души душевно в душу, но при желании меня отблагодарить - мой донат открыт
2202201442298150
Делитесь и отправляйте друзьям! Будем познавать гисту вместе
Если у вас есть вопросы, вы всегда можете мне написать и мы вместе их решим, моя личка для вас открыта) Я могу в чем-то ошибиться/опечататься, так что давайте сотрудничать
НУ ЧТО! ПОЕХАЛИ! ЗАВАРИВАЙТЕ ЧАЙ/КОФЕ (а лучше налейте водки, иногда будет больно)
(на сметанку) |
Оладий продакшн |
2202201442298150 |
|
Самая первая тема этого года как и всегда вероятно- «объекты и методы гистологических исследований»
Тема важна для:
1)понимания как работать с микроскопом, понимать почему некоторые препараты готовят определенным образом и зачем это нужно (для практики)
2)Понимания, как окрашиваются разные типы тканей. Почему что0то фиолетовое, а что-то желтое (могут спросить окраску препарата)
Все достаточно хорошо описано в ваших методах и тут надо просто тупо запомнить (новых открытий я вам не сделаю)
НО приведу таблицы для удобства (не оставлять же вас без сладкого)
ЭТАПЫ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПРЕПАРАТОВ
ЭТАП |
|
ЦЕЛЬ и другие подробности |
|
|
|
1. Взятие материала |
Забираем ткань у пациента/ |
|
|
животного |
|
|
ВАЖНО: |
|
|
- |
не травмировать материал |
|
- |
маркировка (со всеми датами и тд) |
2. Фиксация |
Предотвращает процесс разложения, |
|
|
что способствует сохранению |
|
|
целостности структур. |
|
|
ВАЖНО: фиксатор должен проникать на |
|
|
всю глубину материала |
|
|
Фиксаторы: |
|
|
спирт, формалин, р-ры солей тяжелых |
|
|
металлов |
|
|
|
|
3. Денатурация (убираем воду) |
Для того, чтобы потом уплотнить (а то |
|
|
вода будет разжижать уплютняющую среду) |
|
|
Спирты ВОЗРАСТАЮЩЕЙ концентрациии |
|
|
(70-100) |
|
|
|
|
4. Заливка уплотняющей средой |
Для будущей резки препарата (нам |
|
|
явно проще резать брусок парафина, а не |
|
|
маленький кусочек ткани) |
|
|
Чаще всего парафин, реже смолы |
|
|
|
|
5. Нарезка |
Используют |
|
|
1) микротом- для обычных срезов (5-10 |
|
|
|
мкм) |
|
2) Ультрамикротом- для срезов на |
|
|
|
электронный микроскоп (30-50 нм) |
|
|
|
(на сметанку) |
Оладий продакшн |
||
2202201442298150 |
|
|
|
|
ЭТАПЫ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПРЕПАРАТОВ |
||
|
ЭТАП |
|
ЦЕЛЬ и другие подробности |
|
|
||
6. Депарафинирование (убираем плотную |
Плотная среда препятсвует окраске |
||
среду) |
|
препврата |
|
|
|
Это фактически кусок ткани в бруске |
|
|
|
парафина, че ты там будешь красить? Надо |
|
|
|
убрать парафин, потом уже красите ткань |
|
|
|
Чаще с помощью ксилола |
|
|
|
||
7. Регидратация (возвращаем воду) |
Для использования красителя на |
||
|
|
водной основе |
|
|
|
Спирты НИСХОДЯЩЕЙ концентрации |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
8. Окраска ИЛИ контрастирование |
1) |
Окраска позволяет выявить |
|
|
|
|
конкретные структуры в ткани |
|
|
|
(например ядро, грЭПС будут |
|
|
|
окрашиваться базофильно, а |
|
|
|
коллагеновые волокна в РВСТ |
|
|
2) |
оксифильно) |
|
|
Контрастирование используется для |
|
|
|
|
электронной микроскопии, для |
|
|
|
выделения различных структур в клетке |
|
|
||
9. Обезвоживание (опять убираем воду) |
Для того, чтобы затем консервировать |
||
|
|
препарат |
|
|
|
Спирты ВОСХОДЯЩЕЙ концентрации |
|
|
|
||
10. Заключение в консервирующую среду |
Для долгого хранения препаратов и |
||
|
|
возможности повторно их смотреть |
|
|
|
(чтобы не стухли короче) |
|
|
|
Используют: |
|
|
|
1) |
канадский бальзам |
|
|
2) |
Глицерин-желатин |
|
|
3) |
Полистирол |
|
|
Затем накрывают покровным стеклом |
|
|
|
Иногда до консервации препараты еще |
|
|
|
просветляют в ксилоле или толуоле |
|
|
|
|
|
(на сметанку) |
Оладий продакшн |
|
|
2202201442298150 |
|
|
|
|
ВАРИАНТЫ ПРЕПАРАТОВ |
|
|
|
|
|
|
Мазок (что-то жидкое) |
|
Кровь, костный мозг, слюна, ликвор |
|
|
|
|
|
Отпечаток (паренхматозные органы) |
Паренхима органа очень ломкая структура и нет |
||
|
|
смысла делать срез, потому что она просто |
|
|
|
рассыпется. Поэтому мы делаем разлом и прям |
|
|
|
отпечатываем на стекло (че осталось, то |
|
|
|
осталось) |
|
|
|
Тимус, печень, селезенка |
|
|
|
|
|
Пленочный препарат (что-то тонкое) |
Брюшина, плевра, мягкая мозговая оболочка |
||
|
|
Растягиваем на стекле и раздавливаем |
|
|
|
покровным стеклом |
|
|
|
|
|
Тотальный препарат (целиком на стекло) |
Половые клетки, зародыш на ранних стадиях |
||
|
|
|
|
Тонкий срез (5-10 мкм) |
|
ПРАКТИЧЕСКИ ВСЕ ЧТО МЫ ВИДИМ |
|
|
|
Самый удобный |
|
|
|
|
|
Ультратонкий срез (30-50 нм) |
|
Для электронной микроскопии |
|
|
|
|
|
* Осносновный краситель, Кискислотный, Спецспециальный |
|||
|
ОКРАСКА ПРЕПАРАТОВ |
|
|
КРАСИТЕЛЬ |
СТРУКТУРЫ |
ЦВЕТ |
|
|
|
|
|
ГЕМАТОКСИЛИН |
Основный краситель —> |
Темно-синий, фиолетовый |
|
(осн) |
реагирует с кислотами |
(базофилия) |
|
|
Значит ищем структуры в |
|
|
|
которых есть много ДНК, РНК и |
|
|
|
других кислот |
|
|
|
ОКРАШИВАЕТ БАЗОФИЛЬНО |
|
|
|
Ядра, рибосомы, грЭПС(на ней |
|
|
|
много рибосом) |
|
|
|
|
|
|
ЖЕЛЕЗНЫЙ |
Предварительная обработка |
Темно-синий-серо- |
|
ГЕМАТОКСИЛИН |
железными квасцами, а затем |
коричневый |
|
(осн) |
красят гематоксилином |
Иногда тупо темно-синий |
|
|
Структуры ядра, ядрышко , |
||
|
|
||
|
границы клеток, мышечные |
|
|
|
волокна, исчерченность |
|
|
|
|
|
|
АЗУР II |
Основный краситель —> |
Синий |
|
(осн) |
реагирует с кислотами |
|
|
|
Ядра, рибосомы, грЭПС |
|
|
|
|
|
|
ЭОЗИН |
Кислотный краситель —> |
Розовый, оттенки красного |
|
(кис) |
реагирует с основаниями |
(эозинофилия) |
|
|
Это чаще всего белки=> ищем |
|
|
|
структуры богатые белками |
|
|
|
Цитоплазма, белковые |
|
|
|
гранулы, волокна коллагена |
|
|
|
|
|
|
(на сметанку) |
Оладий продакшн |
|
2202201442298150 |
|
|
|
ОКРАСКА ПРЕПАРАТОВ |
|
КРАСИТЕЛЬ |
СТРУКТУРЫ |
ЦВЕТ |
|
|
|
ИМПРЕГНАЦИЯ СОЛЯМИ |
Препарат сначала |
Черный, коричневый |
СЕРЕБРА |
обрабатывают аммиачным р- |
|
|
ром серебра, а затем |
|
|
восстанавливают |
|
|
Выделившееся серебро |
|
|
осаждается на структурах: |
|
|
-Нейрофибриллы, |
|
|
-нервные ткани, |
|
|
-волокнистые межклеточные |
|
|
структуры, |
|
|
-ретикулярные волокна |
|
|
|
|
ОРСЕИН |
Эластические волокна |
В зависимости от того как |
(спец) |
|
«взялся» препарат |
|
|
Темно-красный, |
|
|
фиолетовый, коричневый |
|
|
|
ПИКРИНОВАЯ КИСЛОТА |
Коллагеновые волокна |
Желто-коричневый |
(спец) |
соединительной ткани |
|
|
|
|
ОСМИЕВАЯ КИСЛОТА |
Липидные включения |
Черный |
(спец) |
(жировые капли), плазмолемма |
|
|
(фосфолипидный бислой) |
|
|
Липидные структуры |
|
|
растворяют краситель и |
|
|
окрашиваются |
|
|
|
|
|
|
|
СУДАН 3 |
Липидные включения |
Желтый |
(спец) |
(жировые капли), плазмолемма |
|
|
(фосфолипидный бислой) |
|
Красители также можно делить на
1)Основные- окрашивают структуры содержащие больше кол-во кислот
(гематоксилин, азур II)
2)Кислотные- окрашивают структуры с большим количеством белка, часто вне клетки
(эозин, кислый фуксин)
3)Нейтральный - содержат и то, и то (комбинашки)
4)Гидрофобные - Судан 3, Судан 4, осмиевая кислота- растворяются в жире и липидах
5)Специальные методы- окрашивают конкретные структуры (орсеин, пикриновая,
импрегнация серебром и тд)
ТАБЛИЧКА НА БУДУЩЕЕ ОБУЧЕНИЕ ПРО САМЫЕ ЧАСТЫЕ И ИЗВЕСТНЫЕ МЕТОДИКИ и КОМБИНАЦИИ (только то, что есть на кафедре)
СЕЙЧАС ЭТО УЧИТЬ И ПУДРИТЬ БОШКУ НЕ НАДО
НАЗВАНИЕ |
ЧТО В СОСТАВЕ |
ЧТО и КАК КРАСИТ |
|
|
|
|
|
ГЕМАТОКСИЛИН-ЭОЗИН |
(сам догадаешься?) |
ИМ КРАСЯТ ВСЕ ЧТО НЕ |
|
|
- |
Гематоксилин |
ЛЕНЬ |
|
- |
Эозин |
Г- ядра, рибосомы, грЭПС |
|
|
|
Э- цитоплазма |
|
|
|
|
(на сметанку) |
|
Оладий продакшн |
|
2202201442298150 |
|
|
|
НАЗВАНИЕ |
ЧТО В СОСТАВЕ |
ЧТО и КАК КРАСИТ |
|
|
|
|
|
По РАМОНОВСКОМУ-ГИМЗЕ |
- |
Азур II |
Окрашивают мазок крови |
|
- |
Эозин |
А- базофильные структуры, |
|
|
|
ядра и тд (В СЛУЧАЕ КРОВИ |
|
|
|
ЯДРА ЕСТЬ ТОЛЬКО У |
|
|
|
ЛЕЙКОЦИТОВ) |
|
|
|
Э- цитоплазма, эритроциты и |
|
|
|
тромбоциты (у них нет ядер) |
|
|
|
|
ПО МЕТОДУ ШМОРЛЯ |
- Раствор тионина |
Окрашивают кости |
|
|
|
|
|
ОКРАСКА ПО МАЛОРИ |
- |
Кислый фуксин |
У нас им красят гипофиз |
|
- |
Анилиновый синий |
|
|
- |
Оранжевый G |
|
ПИКРОФУКСИН- |
- |
Пикрофуксин |
У нас так красят печень |
ГЕМАТОКСИЛИН |
- |
Гематоксилин |
|
КОНГОРОТ-ЖЕЛЕЗНЫЙ |
- |
Конгорот |
У нас фундальный отдел |
ГЕМАТОКСИЛИН |
- |
Ж.Г |
желудка |
|
|
|
(красным окрасятся |
|
|
|
париетальные клетки) |
|
|
|
|
МЕТОД НИССЛЯ |
- |
Толуидиновый синий |
Скопления грЭПС в нейронах |
|
|
|
(тельца Ниссля) |
|
|
|
|
ШИК-РЕАКЦИЯ |
- Шифф-периодная кислота |
Выявления гликогена |
|
|
|
|
|
НАДЕЮСЬ, ЧТО ПРО ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МИКРОСКОПА ВЫ ПРОЧИТАЕТЕ САМИ (как большие )
И напоследок
1 мм=1000мкм=1,000,000нм
(на сметанку) |
Оладий продакшн |
2202201442298150 |
|
2202201442298150 (на сметанку)
Оладий продакшн
На сегодня все) ВСЕХ ОБНИМАЮ
(вот вам мем напоследок)