6 курс / Гастроэнтерология / Современные_подходы_к_лабораторной_диагностике_гепатита_В
.pdf
количественное определение HBsAg при
HBV - инфекцией необходимо для:
•Прогнозирования естественного течения
инфекции;
•Оценки эффективности противовирусной терапии;
•Скрининговый маркер;
•Диагностический маркер
Качественное
определение
Диагностические возможности количественного определения HBsAg
•19801993гг. полуколичественное определение HBsAg в сыворотке крови методом РПГА путем титрования сыворотки;
•В начале 2000-х гг. компанией Abbott Laboratories (США) разработан стандартизованный хемилюминесцентный тест, позволяющий измерять количество HBsAg в МE;
•Несколько позже подобный тест разработан швейцарской компанией
Roche Diagnostics;
Внастоящее время существуют следующие тест-системы , ИФА
•the Architect QT assay Abbott Laboratories (США) 0.05 to 250 IU/ml, The Elecsys II assay has an
automatic on-board dilution with a range of HBsAg measurement from 0.05 to 52,000IU/ml.
•Elecsys HBsAg II Quant assay (Roche Diagnostic )
•набор реагентов “ГепатитИФА-HBsAg”, разработанный компанией “Алкор Био” (Санкт-Петербург). Особенность данной тест-системы состоит в возможности ее использования и для качественного, и для количественного определения HBsAg в сыворотке и плазме крови человека методом иммуноферментного анализа (ИФА).
•
Результаты измерения количественного содержания |
||||||||
HBsAg в образцах испытуемой панели сывороток с |
||||||||
|
|
низким содержанием антигена |
||||||
|
70 |
|
|
|
|
|
|
|
|
60 |
|
|
|
|
|
|
|
|
50 |
|
|
|
|
|
|
|
/мл |
40 |
|
|
|
|
|
|
ARCHITECT |
|
|
|
|
|
|
HBsAg(ABBOTT) |
||
|
|
|
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
МЕ |
30 |
|
|
|
|
|
|
Алкор-Био |
|
|
|
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
20 |
|
|
|
|
|
|
|
|
10 |
|
|
|
|
|
|
|
|
0 |
|
|
|
|
|
|
|
|
83 |
91 |
98 |
101 |
102 |
107 |
109 |
119 |
|
|
|
|
N образца |
|
|
|
|
Мукомолов С.Л. Справочник заведующего КДЛ, 2011., №8, с.40-44
Сывороточные уровни HBV DNA и HBsAg
HBV DNA
Вирион
репликация
HBsAg
Вирион + дефектные частицы
(exceeding virions by a factor of 102–105)
репликация cccDNA транскрипция/ mRNAs трансляция
уровень HBsAg отражает транскрипционно активную cccDNA больше, чем общее количество cccDNA
Adapted from Brunetto et al. J Hepatol 2010
Вопрос 1
ПРОГНОЗИРОВАНИЕ ЕСТЕСТВЕННОГО ТЕЧЕНИЯ ХРОНИЧЕСКОГО ГЕПАТИТА В
Естественное течение ХГВ: современное представление (1)
•Иммунная толерантность
–HBeAg(+), высокий уровень HBV ДНК, нормальный уровень АЛТ, минимальное или полное отсутствие
воспаления по данным биопсии
HBeAg
HBV ДНК
АЛТ
Иммунная
толерантность
Anti-HBe
Иммунный Неактивное Реактивация клиренс носительство
Yim HJ & Lok ASF. Hepatology 2006;43:S173-81.
Фазы естественного течения хронического гепатита В
иммунная толерантность
иммунный клиренс
• |
HBeAg положительные |
• |
HBeAg положительные |
|
• |
Высокая вирусная |
• |
Невысокая вирусная нагрузка |
|
|
нагрузка |
иммунный клиренс |
||
• |
Невысокая активность |
|||
1. HBeAg отрицательный |
||||
|
АлАТ |
|||
|
2. Широкий диапозон колебания вирусной |
|||
• |
Минимальная |
|||
нагрузки ( HBVDNA) |
||||
|
гистологическая |
|||
|
3. Широкий диапозон колебания |
|||
|
активности и стадия |
|||
|
биохимической активности |
|||
|
фиброза в печени |
|||
|
|
|
||
Неактивная фаза (DNA HBV 2000IU/ml) |
Активная фаза |
Низкая вирусная нагрузка |
Высокая вирусная нагрузка |
F 0 – F1-2 |
F3 |
Без перехода в цирроз |
Прогрессирование в цирроз |
Результаты определения кол.HBsAg при
HBeAgнегативном хроническом гепатите В
Исследования |
Неактивная фаза |
Активная фаза |
|
|
|
n=68, Hong Kong |
2.24±1.61logIU/ml |
2.98±0.88logIU/ml |
( генотип B-C) |
|
|
|
|
|
N=209, Italy |
медиана62.12 |
медиана3029 |
( генотип D) |
(0.1–4068) IU/ml |
(0.5–82,480) IU/ml |
|
|
|
n= 122, French |
3.30±0.97 ) IU/ml |
3.77±0.11logIU/ml, |
( генотип А-Е) |
|
|
|
|
|
|
|
|
ТАКИМ ОБРАЗОМ,
1.Одномоментное сочетанное определение уровня HBsAg и HBV DNA может позволить точно определить “неактивные случаи” и прогнозировать исчезновение HBsAg в популяции хронического гепатита В HBeAg- с учетом HBV генотипа.
2. Очевидно, что HBsAg <1000IU/ml у пациентов с HBV генотипом D свидетельствует о неактивной фазе, а HBsAg <100IU/ml
при генотипах B или C является еще и предиктором исчезновения HBsAg
Корреляция между количественным содержанием ДНК вируса ГВ и |
||||
концентрацией HBsAg в сыворотке крови больных хроническим HBeAg |
||||
|
|
негативным гепатитом В (Якутия) |
|
|
|
600 |
|
|
|
|
500 |
|
|
|
МЕ/мл |
400 |
|
|
|
300 |
|
|
HBsAg |
|
HBsAg |
|
|
||
200 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
100 |
|
|
|
|
0 |
|
|
|
|
<10(2) |
10(2)-10(3) 10(3)-10(4) |
>10(4) |
Итого |
|
|
Вирусная нагрузка |
|
|
Измерение вирусной нагрузки – Вектор-Бест (Новосибирск) Измерение HBsAg – Алкор-Био (Санкт-Петербург)
Мукомолов С.Л.(Институт Пастера), Герасимова В.В., ЦГЭ в Республике Саха(Якутия)
Корреляция между наличием мутаций в области pre-core/core области |
|||||
ДНК вируса ГВ и концентрацией HBsAg в сыворотке крови больных |
|||||
|
хроническим HBeAg-негативным гепатитом В (Якутия) |
|
|||
|
350 |
|
|
|
|
|
300 |
|
291 |
|
|
|
|
|
|
|
|
/мл |
250 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
МЕ |
200 |
|
|
|
|
|
|
|
|
HBsAg |
|
HBsAg |
151 |
|
|
147 |
|
|
|
|
|||
150 |
113 |
|
|
|
|
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
100 |
|
|
|
|
|
50 |
|
|
|
|
|
0 |
|
|
|
|
|
WT |
PC28 |
PC28+BCP(1762/1764) |
ИТОГО |
|
|
|
Наличие мутаций в pre-core/core |
|
|
|
Мутации в pre-core/core – INNOLIPA (Innogenetics, Бельгия)
Измерение HBsAg – Алкор-Био (Санкт-Петербург)
Мукомолов С.Л.(Институт Пастера), Герасимова В.В., ЦГЭ в Республике Саха(Якутия)