Возбудители бруцеллёза и туляремии
.docxПробирки помещают на 2 ч в термостат и после извлечения из него выдерживают при комнатной температуре еще 18 - 20 ч, после чего проводят окончательный учет. Диагноз подтверждает РА в разведении сыворотки 1:100. При повторной постановке РА через 7 - 10 суток ее титр может возрастать в 4 раза и более, что очень важно при дифференциации туляремии от бруцеллеза, возбудители которого, имея общую антигенную структуру с Francisella tularensis, могут агглютинироваться в сыворотке больных туляремией.
При массовых обследованиях вместо развернутой РА можно применять кровяно-капельную реакцию: на предметное стекло наносят каплю крови и гемолизируют ее в дистиллированной воде с последующим добавлением к ней туляремийного диагностикума. В таком случае реакция агглютинации в гемолизированной капле наступает немедленно.
В целях диагностики туляремии на первой неделе заболевания ставят РСК на холоде.
Биологический и бактериологический методы. Поскольку выделить культуру возбудителя туляремии методом посева материала больного не удается, для ее получения прибегают к биологическому эксперименту. Для этого три-пять белых мышей или двух морских свинок заражают (подкожно, накожно или внутрибрюшинно) пунктатом из бубона, отделяемым язвы, конъюнктивы, зева или мокротой.
Животные погибают через 7-15 суток или же их убивают на 15 - 20-е сутки. При вскрытии трупов во всех органах отмечаются геморрагии и выпотевание экссудата в брюшную полость. Кровь, костный мозг, суспензии внутренних органов и лимфатических узлов трупа высевают на одну из трех сред: желточную, глюкозоцистиновый кровяной агар или среду Емельяновой.
Желточная среда состоит из 3 ч. яичных желтков и 2 ч. 0,85 % изотонического раствора натрия хлорида. Ее разливают в стерильные пробирки по 5 мл и свертывают 60 мин при температуре 75 °С, на следующий день прогревают 30 мин при 82 - 85 °С. Засеянные пробирки закрывают резиновыми колпачками и для фиксации микробов на поверхности среды располагают в термостате в наклонном положении.
На 3-5-е сутки, а иногда через 3-4 недели появляются первые очень мелкие точечные колонии.
Глюкоэоцистиновый агар с кровью: к расплавленному МПА добавляют 0,05 - 0,10 % цистина и 1 % глюкозы, кипятят несколько минут, охлаждают до 45 - 50 °С и добавляют 5 - 10 % кроличьей де- фибринированной крови.
Среда Емельяновой содержит 2,5 мл аутолизата дрожжей, 10 мл гидролизата желатина, 20 мл гидролизата рыбной муки, 1 г глюкозы, 0,1 г цистина, 0,5 г натрия хлорида, 2 г агара, 100 мл дистиллированной воды. Колонии туляремийных бактерий на последних двух средах влажные, молочно-белого цвета.
Растет возбудитель туляремии также в желточном мешке 12-дневного куриного эмбриона.
Выделенную чистую культуру идентифицируют по морфологическим, серологическим и биологическим свойствам.
Популяция колоний состоит из очень мелких кокковидных или палочковидных бактерий; в мазках-отпечатках из органов они располагаются внутриклеточно.
Лучше всего окрашиваются по Романовскому - Гимзе.
Свежевыделенные патогенные бактерии туляремии биохимически малоактивны. Для определения вида выделенной культуры используют диагностическую агглютинирующую сыворотку. Патогенность культуры устанавливают заражением чувствительных животных.
Для обнаружения туляремийных антигенов у погибших грызунов в энзоотических очагах широко применяется реакция термокольцепреципитации Асколи.
Схема микробиологических исследований при туляремии
День исследования |
Метод |
|
Ускоренный |
1 – й 2 – й 3 – й 4 – й |
кровь (с 1-го дня) Постановка кровяно-капельной реакции
|
|
Бактериологический |
|
содержимое бубона, кровь, мокрота, гной из глаза, зева, соскоб язвы (с 3-4-го дня). |
1 – й
2 – й
3 - й |
Посев на яично-желточную среду, глюкозоцистиновыйагар. Изучение роста, микроскопия колоний. Постановка развернутой реакции агглютинации со специфической туляремийной сывороткой. Учет реакции. Ответ. |
|
Серологический |
|
сыворотка крови со второй недели |
1 – й
2 – й |
Постановка развернутой реакции агглютинации с туляремийным диагностикумом. Учет реакции. Ответ. |
|
Биологический |
|
Органы трупов, мокрота, отделяемое язвы, конъюнктивы глаза. |
1 – й 2 – й
3 – й
4 – й |
Заражение морской свинки или белой мыши. Вскрытие трупов. Микроскопия окраска по Граму, Романовскому-Гимзе. Посев из органов на среды. Изучение характера роста. Микроскопия колоний. Реакция развернутой агглютинации. Учет реакции. Ответ. |
|
Аллергический |
|
постановка пробы с 3-5 дня заболевания |
1 – й 2 – й |
Внутрикожное или накожное введение тулярина. Учет реакции через 24-48 часов. |