vse_metody_MIKROB

Классификация бактерий по типам питания и способам получения

энергии:

аутотрофы (лат. autos – сам, trophe – питание) – используют для построе-

ния своих клеток неорганический углерод в виде СО2;

гетеротрофы (лат. heteros – другой, «питающийся за счет других») – усваи-

вают углерод из сложных органических соединений.

Для накопления своей биомассы бактериям, помимо источника углерода,

требуется источник энергии. Энергия запасается бактериальной клеткой в форме молекул АТФ. Бактерии, для которых источником энергии является солнечный свет, называются фототрофами. Бактерии, которые для биосинтеза используют энергию химических реакций, называются хемотрофами. Хемо-

трофы получают энергию за счет окислительно-восстановительных реакций. В

патологии человека ведущую роль играют хемогетеротрофы.

К хемогетеротрофам относят:

сапрофиты (от греч. sapros – гнилой и phyton – растение) – источником пи-

тания для них служит мертвый органический материал. Например: клостри-

дии.

паразиты (от греч. parasitоs – нахлебник) – получают питательные вещест-

ва от макроорганизма и могут наносить ему вред. Различают облигатные и факультативные паразиты. Облигатные паразиты не могут жить вне клеток организма. Например: риккетсии, хламидии. Факультативные па-

разиты могут существовать внеклеточно и размножаться на питательных средах in vitro.

3. Культивирование бактерий. Питательные среды для бактерий, их

классификация.

Культивирование бактерий in vitro осуществляется на питательных средах,

которые должны отвечать следующим требованиям:

1.Необходимый набор питательных веществ и ростовых факторов;

2.Оптимальные значения рН (обеспечивают функционирование ферментов

5

бактерий);

3.Влажность;

4.Изотоничность (обеспечивает осмотическое равновесие между микробной клеткой и средой, облегчает процессы осмоса и диффузии питательных веществ);

5.Стерильность.

Питательные среды для бактерий

Классификации питательных сред.

По консистенции (физическим свойствам):

жидкие – мясо-пептонный бульон (МПБ), 1% пептонная вода;

6

полужидкие – полужидкий мясо-пептонный агар* (МПА с концентра-

цией агар-агара до 1%);

плотные – МПА (концентрация агар-агара 2-3%).

* Агар – полисахарид, получаемый из водорослей «агар-агар». Он плавится при температуре 1000С, а застывает при температуре 400С.

7

По составу:

простые (МПА, МПБ);

сложные (кровяной агар).

По назначению:

транспортные – для первичного посева и транспортировки исследуемо-

го материала в лабораторию;

элективные (селективные) – среды для избирательного культивирова-

ния бактерий определенного вида (1% пептонная вода и щелочной агар для холерных вибрионов, среда Плоскирева – для возбудителей брюш-

ного тифа и дизентерии);

дифференциально-диагностические – для дифференциации отдельных видов бактерий по ферментативным свойствам. Например: среда Эндо –

для кишечных бактерий.

8

Состав и механизм работы среды Эндо.

Состав: МПА + 1% лактозы + индикатор (фуксин, обесцвеченный гипо-

сульфитом натрия).

Дифференциация кишечных бактерий основана на различиях в способно-

сти расщеплять лактозу. Кишечные палочки расщепляют лактозу до кислоты,

которая нейтрализует гипосульфит натрия. В результате фуксин из связанного состояния переходит в свободное. Колонии кишечных палочек окрашиваются в красный цвет (лактозопозитивные). Возбудители брюшного тифа и дизенте-

рии не расщепляют лактозу, поэтому дают на среде Эндо бесцветные (лактозо-

негативные) колонии.

9

специальные – для выделения и культивирования бактерий, не расту-

щих на простых средах (сывороточный агар, кровяной агар);

накопительные – для накопления возбудителя при его низкой концен-

трации в материале от больного (селенитовая среда – для культивирова-

ния возбудителей дизентерии).

4. Дыхание бактерий. Классификация бактерий по типу дыхания.

Сущность дыхания у микроорганизмов – получение энергии, образующей-

ся в процессе прямого биологического окисления веществ кислородом или пу-

тем ферментативного метаболизма. Накопление энергии происходит в мезосо-

мах.

В соответствии с потребностями в кислороде бактерии классифици-

руют на основные группы:

Облигатные (строгие) аэробы – микроорганизмы, которые растут и раз-

множаются только в присутствии кислорода. Например: Vibrio cholerae, Pseu-

domonas aeruginosa.

10

Облигатные анаэробы – микроорганизмы, которые растут и размно-

жаются только без доступа кислорода. Например: Clostridium botulinum, Clostridium tetani, Bacteroides fragilis.

Факультативные анаэробы – микроорганизмы, которые могут расти и размножаться как в присутствии кислорода, так и в бескислородных условиях.

Например: Escherichia coli, Salmonella typhi, Mycobacterium tuberculosis.

Микроаэрофильные бактерии – микроорганизмы, которые растут и раз-

множаются при повышенном содержании СО2 и низком содержании О2. На-

пример: Helicobacter pylori, Campylobacter coli.

5.Бактериологический метод диагностики инфекционных заболева-

ний. Методы культивирования бактерий. Получение чистой культуры аэ-

робов и анаэробов. Способы создания анаэробных условий.

Основным методом диагностики инфекционных заболеваний является

бактериологический. Он заключается в посеве исследуемого материала

(кровь, моча, фекалии, мокрота, мазок со слизистой оболочки ротоглотки и но-

са и др.) на искусственные питательные среды для выделения чистой культуры возбудителя. Затем проводят его идентификацию по морфологическим, тинкто-

риальным, культуральным, биохимическим, антигенным и др. признакам.

Выделение чистой культуры аэробных возбудителей достигается путем посева исследуемого материала на плотные питательные среды (в чашке Пет-

ри), что приводит к механическому разобщению отдельных микробных клеток друг от друга. Посев производят секторами бактериологической петлей и по-

мещают в термостат при температуре 370С. Размножение изолированных кле-

ток дает потомство (колонию) одного вида, т.е. чистую культуру микробов.

11

чашка Петри с плотной питательной средой

бактериологическая петля

Посев исследуемого материала секторами для получения изолирован-

ных колоний микроорганизмов

Для получения изолированных колоний и чистой культуры анаэробов

производят посев исследуемого материала петлей секторами на специальные

среды для анаэробов с последующим культивированием в анаэробных (бески-

слородных) условиях.

12

Способы создания анаэробных условий:

1) механическое удаление воздуха из анаэростата с последующим заполне-

нием газовой смесью (80% азота, 10% водорода, 10% углекислого газа);

2) использование газогенераторных пакетов с набором специальных реа-

гентов (боргидрит натрия, винная кислота, бикарбонат натрия) для создания бескислородной газовой среды в анаэростате.

13

Проведение бактериологического исследования по схеме.

Цель бактериологического исследования: выделение и идентификация (оп-

ределение вида) возбудителя.

I этап. Посев исследуемого материала на пластинчатый агар с целью полу-

чения изолированных колоний микроорганизмов.

II этап. Изучение выросших колоний и выделение чистой культуры с це-

лью накопления биомассы одного вида микроорганизмов.

III этап. Определение биохимических, антигенных, патогенных и других свойств выделенной культуры с целью идентификации бактерий.

IV этап. Учет свойств бактерий и вывод о виде возбудителя.

14