Саузерн

Саузерн-блот самый первый метод для обнаружения изменений ДНК. Метод саузерн-блоттинга также можно использовать для определения молекулярной массы рестрикционных фрагментов и для измерения относительных количеств ДНК в различных образцах. Образцы ДНК могут быть получены из тканей или изолированных культур клеток. Преимущество этого метода - количественные результаты, отражающие количество меченных и немеченных молекул ДНК. Саузерн-блот особенно выгоден для анализа повторяющихся последовательностей, поскольку множество похожих последовательностей в геноме можно анализировать с помощью одного зонда. С другой стороны, этот метод анализирует только ограниченное количество сайтов, что является большим недостатком этого метода.
Вестерн-блот - это такой метод, который позволяет точно оценивать количества и определять молекулярный вес белков. Все из исходной смеси белков, извлеченных из клеток или тканей.
Для иммуноблоттинга можно использовать ряд образцов, содержащих белок, в том числе экстракты целых клеток, экстракты тканей и субклеточные фракции. Образцы тканей сложнее подготовить, так как они должны быть гомогенизированы или обработаны ультразвуком для обеспечения лизиса клеток, и могут потребоваться дополнительные специальные методы подготовки. Во всех случаях клетки должны быть лизированы, а белки солюбилизированы. После начала лизиса высвобождаются ферменты, которые могут индуцировать протеолиз и дефосфорилирование, поэтому лизис обычно проводят на льду и в присутствии ингибиторов протеаз, чтобы предотвратить деградацию белка, и ингибиторов фосфатазы, чтобы предотвратить дефосфорилирование.
Методика проведения саузерн-блоттинга и вестерн-блоттинга схожи и начинаются с электрофоретического разделения белков и фрагментов нуклеиновых кислот на геле, которые затем переносятся на мембрану. Это позволяет радиоактивно меченым или ферментативно меченным антителам или зондам ДНК связываться с иммобилизованной мишенью, а затем представляющие интерес молекулы могут быть визуализированы с помощью различных методов.
Думаю, в качестве различий могу выделить то, что Для вестерн-блоттинга вам нужны определенные белки, саузерн-блоттинг - специфическая ДНК. При вестерн-блоттинге определение белков становится доступным и возможным благодаря первичным и вторичным антителам, тогда как при саузерн-блоттинге используется радиоактивно меченный (флуоресцентный) зонд или краситель, который связывается с ДНК. Применение вестерн-блоттинга включает определение антигенов ВИЧ или поверхностного антигена гепатита B в крови.
Стоимость двух методов принципиально не различаются, поэтому не буду оценивать как недостаток или преимущество.