Лекция 2020 лечебное дело / 3 / рекомбинации_бактерий
.pptРекомбинация |
Доноры и реципиенты |
Опыт |
Результат |
||
Трансформация |
1. ДНК донора |
0,5 мл |
0,5 мл |
|
|
|
B. subtilis tyr+ (прототроф) |
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
2. Культура реципиента |
|
|
|
3 |
|
B. subtilis tyr- (ауксотроф) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
1 |
2 |
|
tyr - тирозин |
|
3 |
|
|
|
|
|
|
|
контакт ДНК с |
1 сектор |
|
бактериями |
роста |
|
термостат 30 минут |
2 сектор |
|
37ºС |
нет |
|
3 |
3 сектор – рост |
|
колоний |
|
|
|
|
1 |
2 |
|
питательная среда |
|
|
Спицейзена не |
|
|
содержит тирозин |
|
|
термостат 2 суток 37ºС |
|
Рекомбинация Доноры и реципиенты |
Опыт |
Результат |
Трансдукция |
1. Умеренный |
0,5 мл |
0,5 мл |
|
|
|
трансдуцирующий фаг, |
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
полученный из клеток |
|
|
|
|
|
доноров E.coli lac+ |
|
|
|
3 |
|
2. Культура реципиента |
|
|
|
|
|
E.coli lac- (ауксотроф) |
|
|
1 |
2 |
|
|
|
3 |
|
|
|
lac - лактоза |
|
|
|
|
|
|
контакт фага с |
|
|
|
|
|
бактериями |
|
|
|
|
|
термостат 20-30 |
|
|
|
|
|
минут 37ºС |
1 сектор – роста нет |
||
|
|
|
|
2 сектор – рост |
|
|
|
|
|
бесцветных колоний |
|
|
|
|
3 |
3 сектор – рост |
|
|
|
|
|
||
|
|
1 |
2 |
цветных колоний |
|
|
|
|
|
||
|
|
дифференциально- |
|
|
|
|
|
диагностическая |
|
|
|
|
|
среда Эндо |
|
|
|
|
|
термостат 24 часа 37ºС |
|
|
Рекомбинация |
Доноры и реципиенты |
Опыт |
Результат |
|||
Конъюгация |
1. |
E. coli F+ tyr- thr+ leu+ |
0,5 мл |
0,5 мл |
|
|
|
2. |
E. coli F- tyr+ thr- leu- |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
3 |
|
tyr – тирозин |
|
3 |
1 |
2 |
|
|
thr - треонин |
|
|
|
||
|
leu – лейцин |
|
|
|
|
E. coli F+ - клетка донор, |
контакт донора и |
1 |
сектор |
|
|||||
|
реципиента |
роста нет |
|||||||
т.к. имеет F-плазмиду |
термостат 37ºС |
||||||||
E. coli F- - клетка |
8 минут (время |
2 |
сектор |
|
|||||
конъюгации E.coli) |
|
|
|
||||||
реципиент (F-плазмида |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
отсутствует) |
|
|
|
|
|
|
3 |
сектор – рост |
|
|
|
3 |
|
|
|||||
|
|
|
|
|
|||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
колоний |
|
1 |
|
2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
минимальная |
|
|
|
||||
|
питательная среда без |
|
|
|
|||||
|
|
аминокислот |
|
|
|
||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
термостат 24 часа 37ºС |
|
|
|