Презентация / ШтильАА_Фосфорилирование - язык 2019
.pdf
Передача сигналов в Bcr-Abl-позитивных клетках
Количество ДНК в ядре: плоидность
2n ДНК
2n->4n ДНК
4n ДНК
Размер и плотность клеток
Forward Scatter – прямое светорассеяние – определяется размером и объемом клеток
Side Scatter – боковое светорассеяние – определяется гранулярностью и плотностью клеток
Клональная культура
Культура с разными клетками
Живые клетки
Разные популяции
Мертвые
клетки
Иодид пропидия
Плоская молекула: интеркалирует в ДНК
Флуоресцирует в красной области
Не проникает сквозь неповрежденную мембрану, окрашивает только мертвые клетки
Пропидия иодид связывается с ДНК пропорционально ее количеству, что позволяет
измерить количество ДНК в ядре
Иодид пропидия для анализа клеточного цикла
Кол-во событий
G2/M
G1
G1
S
S
G2/M
SubG1
Интенсивность
флуоресценции
Гибель сопровождается задержкой клеточного цикла в G1
интактные 48 ч
0,1 нМ |
1 нМ |
10 нМ |
100 нМ |
24 ч
0,1 нМ |
1 нМ |
10 нМ |
100 нМ |
0,1 нМ |
1 нМ |
100 нМ |
72 ч
Принцип окраски клеток Аннексином V
Увеличение доли Аннексин V+ клеток
при действии PF-114
% Аннексин V+ клеток
120
100
80
60
40
20
0
контроль |
24 ч |
48 ч |
72 ч |
|
|
|
|
20 нМ PF-114
Цитохром с: из митохондрий в цитоплазму
0 ч |
5 uM 6 ч |
|
25 uM 2 ч |
50 uM 1 ч |
|
6 ч |
4 ч |
2 ч |
1 ч |
|
|
|
|
|
ASX-637 |
7,722 |
7,764 |
16,57 |
32,2 |
|
|
|
|
|
ASX-247 |
19,89 |
21,01 |
38,65 |
50 |
|
|
|
|
|
ASX-946 |
11,71 |
11,31 |
15,64 |
50 |
|
|
|
|
|
IC50, uM