Микробные препараты для сельского хозяйства / Тема 3

Тема 3

Энтомопатогенные бактерии

1.Бактериальные эпизоотии насекомых. Факторы, влияющие на заражение насекомых бактериями

2. Правила работы с инфицированными насекомыми, определение возбудителей.

3. Лабораторные и полевые испытания с искусственным заражением насекомых.

4. Основные возбудители бактериальных заболеваний насекомых: облигатные и факультативные патогены.

1. Энтомопатогенные бактерии обладают меньшей контагиозностью, чем вирусы, энтомофторовые грибы и простейшие. Поэтому бактериальные эпизоотии среди насекомых встречаются реже, но могут быть обширными и напряженными. Н.В. Кандыбином и его школой было установлено, что с помощью B.thuringiensis и Serracia marcescens можно вызвать эпизоотологические процессы в популяции капустной белянки и американской белой бабочки. Это высокочувствительные к данным патогенам насекомые. Среди слабо чувствительных видов не удается вызвать эпизоотию, а если и удается, то только при наличии оптимальных условий развития. Течение эпизоотологического процесса наблюдают в зависимости от возрастных особенностях и плотности популяции, путей передачи возбудителя от больных особей к здоровым, а также от условий хранения и накопления возбудителя эпизоотии в очаге, влияния некоторых экологических факторов (температуры, влажности, инсоляции, питания) на напряженность эпизоотии. Среди гусениц (личинок) насекомых старшего возраста эпизоотии приобретают активное развитие вследствие их интенсивного питания, выделения большого количества экскрементов, активной подвижности. При этом больные особи чаще контактируют со здоровыми и происходит более интенсивное обсеменение корма и среды обитания.

Как уже было сказано, на развитие бактериальных болезней насекомых существенное влияние оказывают различные экологические факторы (стрессоры). Повышение температуры до 30° С ускоряет возникновение и развитие бактериальных болезней, тогда как температура ниже 20° С замедляет или приостанавливает развитие бактериозов. Температура выше 30° С часто приводит к термической «дезинфекции» насекомого, к его выздоровлению.

Влажность в сочетании с высокой температурой и недостаточным притоком воздуха, а также ухудшение качества влажной пищи, попадающей в кишечник насекомого, часто бывает фактором, способствующим развитию бактериальных болезней насекомых.

Денатурация корма, загрязнение корма - химическими веществами и токсические или субтоксические дозы ядов способствуют усиленному развитию бактериозов.

Облучение влияет как дезинфицирующий фактор, убивающий бактерий (ультрафиолетовые лучи), а также (особенно радиоактивное облучение) поражает насекомых и тем самым облегчает возникновение бактериальных болезней.

Пища (ее состав) сама по себе оказывает большое влияние на развитие бактериозов насекомых, так как пищевым фактором в значительной мере определяется физиологическое состояние фитофага.

2. Зараженных насекомых следует искать прежде всего в местах, где наблюдается их высокая смертность. В иных условиях, т. е. там, где не отмечено явной эпизоотии, больных насекомых можно обнаружить путем тщательного просмотра значительного числа особей в популяции. Массовая гибель насекомых в популяциях бывает настолько заметна, что местные работники собирают образцы больных насекомых и отсылают их на анализ в лаборатории. В ряде случаев болезнь проявляется при искусственном разведении насекомых для каких-либо опытов, когда наблюдается их массовая гибель или же в процессе опыта выявляется неодинаковая устойчивость особей одного вида. Иногда с целью обнаружения возбудителя болезни и последующего его использования для борьбы с каким-либо вредителем необходимо анализировать большие серии особей этого вредителя из самых различных мест обитания.

Для обнаружения больных насекомых в популяциях, где не наблюдается видимой эпизоотии, отбирают для анализа образцы по 50—200 насекомых, которые вместе с кормовым растением переносят в лабораторию. Осмотр насекомых и наблюдения за ними производят сразу же и затем в процессе их дальнейшего содержания в садках. При поисках инфекции, если не ставится задача получить данные о масштабах болезни в популяции, исследовать следует прежде всего личинок последних возрастов (главным образом перед окукливанием), просматривая тех из них, которые еще не окуклились, отстали в росте, вялые или по внешнему виду отличаются от остальных. Если при исследовании одной популяции не удалось обнаружить инфекцию, необходимо собрать насекомых этого вида из самых разных мест их обитания и поместить в один общий садок. Если среди таких насекомых окажется хотя бы одно больное, инфекция будет передана другим особям, и из них можно будет изолировать возбудителя.

Материал, собираемый в природе, следует помещать в пробирки или небольшие широкогорлые склянки с полиэтиленовыми пробками или же в полиэтиленовые флаконы с завинчивающейся пробкой. Относительно большие количества насекомых собирают в полиэтиленовые мешочки или банки, куда следует поместить также небольшое количество кормового растения. Некоторые образцы мертвых насекомых удобно помещать в склянки, закрытые корковой пробкой или полиэтиленовой пленкой с резинкой Невысохших, «мокрых» мертвых насекомых лучше транспортировать в пробирках, закрытых ватной пробкой, или в коробочках с отверстием, затянутым капроновой сеткой. В подобной таре можно временно хранить и живых насекомых. Полученный лабораторией материал до начала исследования хранят в холодильнике прй 4°С.

Нахождение в природе мертвых насекомых не означает, что эти насекомые погибли от болезни, поскольку они могли погибнуть от инсектицидов, механических повреждений или из них вылетели насекомые-паразиты.

Хотя при массовой гибели насекомых и можно получить большое количество материала, но часто все насекомые в образцах бывают уже мертвыми, высохшими или претерпевшими иные изменения. В этих случаях необходимо собирать по возможности разные образцы, отбирая последних оставшихся живыми насекомых и немедленно фиксируя часть из них. Мертвых насекомых следует сохранять в сухом виде в пробирках, закрытых ватными пробками, снабдив их этикетками с указанием происхождения материала Одновременно необходимо выяснить и записать все данные о частоте встречаемости болезни, в зараженной популяции, виде вредителя, его возрасте, особенностях проявления болезни и т. п.

Для установления наличия инфекции в теле большинства видов насекомых их необходимо препарировать. Для приготовления влажного мазка берут пинцетом кусочек ткани исследуемого насекомого и делают им мазок на покровном стекле, которое немедленно кладут мазком вниз на поверхность фиксирующего раствора. В качестве фиксирующего может быть спиртовой раствор сулемы (содержит 2 части насыщенного водного раствора сулемы и 1 часть 86%-ного спирта). Фиксатор Буэна содержит 150 мл насыщенного водного раствора пикриновой кислоты, 50 мл 40%-ного формалина и 12 мл ледяной уксусной кислоты). Через секунду предметное стекло погружают в фиксирующий раствор и оставляют в нем на 5—10 минут. Затем стекло с фиксированным мазком промывают водой и окрашивают раствором Гимза (1 капля концентрированного красителя на 1 мл дистилята), не допуская высыхания стекла.

Мертвые насекомые непригодны для изготовления из них гистологических препаратов. В этих случаях нужно скальпелем вынуть часть содержимого трупа и растереть в капле воды на предметном стекле. Остатки трупа следует просмотреть под лупой и сохранить в пробирке в холодильнике. Если в мазке преобладают бактерии одного типа, иные микроорганизмы отсутствуют, то причиной инфекции может быть бактериальная септицемия. Для выделения возбудителя в чистую культуру используют МПА. Для определения систематического положения выделенных чистых культур бактерий определяют морфологические признаки (форма, размер клетки, взаимное расположение, спорообразование, окраска по Грамму и др.); культуральные, биохимические, антигенные характеристики, чувствительность к различным антимикробным воздействиям и степень генетического родства с представителями других таксонов (по процентному содержанию гуанина и цитозина в геноме, гомологии нуклеиновых кислот). Рекомендуется подтверждать идентификацию сравнением всех диагностических свойств с типичным штаммом, который сохраняется, например, в базовой коллекции непатогенных микроорганизмов сельскохозяйственного назначения.

3. При определении инфекционности микроорганизмов, выделенных из больных насекомых и предполагаемых в качестве возбудителей болезней, достоверными следует признавать лишь положительные результаты опытов с искусственным заражением. Для заражения насекомым скармливают инфицированный корм после предварительного голодания в течение 12—24 часов. Корм (листья растений) смачивают в суспензии инокулюма, в которую добавлен эмульгатор (эмульфор, эрифор, тритон-Х, твин, филпон и т. п.), дают избытку суспензии стечь с листьев и кладут их в чашки Петри, где находятся подопытные насекомые. Следует давать такое количество корма, которое насекомые могут поглотить за 24 часа, так как это позволит относительно точно установить время заражения. Параллельно ставят контроль – насекомые, питающиеся незараженным кормом. Инсектицидную активность выражают в % гибели с поправкой на контроль по формуле Аббота:

А = (М_о – М_к / 100 – М_к) ×100,

А – гибель насекомых (в %), М_о, М_к - процент погибших особей в опыте и в контроле. Гибель в контроле не должна превышать 15%.

Иногда для нанесения инокулята в виде порошков или жидкостей применяют распыливающую или опрыскивающую аппаратуру, используемую обычно в токсикологических опытах при оценке инсектицидов, которая имитирует условия применения биопрепаратов на посевах и в насаждениях.

Для опытов с искусственным заражением следует брать насекомых в одинаковой фазе развития и одного и того же возраста, обычно послё того, как прошла линька, с тем чтобы на развитие болезни не влиял ни процесс линьки, ни период перед ней, когда насекомые не питаются.

Для заражения насекомых, обитающих в воде, используют любую посуду с циркулирующей водой. Пригодна обычная пробирка, в которую по тоненькой трубке подается струя воздуха от мембранного насоса. В пробирку помещают насекомых и заполняют ее суспензией изучаемого возбудителя. Споры возбудителя быстро перемещаются в жидкости завихряющейся под действием струи воздуха, и непрерывно соприкасаются с заражаемыми насекомыми. Личинок подкармливают в этот период соответствующим измельченным кормом.

В природных условиях энтомопатогенные материалы применяют путем опыливания, опрыскивания или обработки кормовых растений аэрозолями или же в виде приманок. Для этого применяют те же аппараты, что и для химической борьбы с насекомыми. Для измерения количества препарата, осевшего на единицу площади, при обработке с самолетов или высокопроизводительными наземными опрыскивателями и опыливателями применяют не токсикологические, а биологические методы учета. Так, например, при испытании бактериальных препаратов на обрабатываемой площади перед опрыскиванием или опыливанием выставляют открытые чашки Петри или предметные стекла, залитые агаризованной средой, которые затем переносят в термостат и по числу колоний бактерий определяют плотность покрытия препаратом.

Для оценки смертности насекомых учитывают живых особей на обработанном препаратом участке и контрольном (необработанном), до и через 6-7 дней после обработки. Для расчета используют формулу Франца:

М = 100 × (1-К₁/К₂ × Р₂/Р₁),

де М – смертность комах, %; К₁, К₂ – количество живых особей до и после обработки в контроле; Р₁, Р₂ – количество живых особей до и после обработки в опыте.

4.Основные группы возбудителей бактериальных болезней насекомых

Бактерии являются основными компонентами микрофлоры кишечника насекомых. Бактериозы насекомых вызывают разнообразные грам-отрицательные и грам-положительные бактерии. Практически все патогенные для насекомых бактерии отнесены к представителям Pseudomonadaceae, Enterobacteriaceae, Lactobacillaceae, Micrococcaceae, Bacillaceae. Они способны вызвать разноплановые заболевания, которые сопровождаются септицемией (сильным поражением, при котором гемолимфа уже не в состоянии подавлять размножение микроорганизмов, беспрерывно проникающих к ней). Бактериальные клетки паразита заполняют гемолимфу до такой степени, что форменные элементы уже не способны выполнять свои функции и справиться с наплывом бактерий. Септицемии возникают на соответствующих стадиях развития болезни.

В группу облигатных возбудителей болезней насекомых включены виды бактерий, которые развиваются только в живых насекомых, вызывая их гибель. Некоторые из видов бактерий этой группы могут развиваться и на субстратах-заменителях живых тканей насекомых. Продукты обмена и токсины, выделяемые этими бактериями, очень активно действуют на насекомых, болезни или гибель которых — специфический индикатор этих бактерий.‘Облигатные виды энтомопатогенных бактерий отличаются от остальных болезнетворных бактерий также и своей специфичностью, способностью заражать лишь определенные виды насекомых, оставаясь безвредными для других видов. К облигатным видам энтомопатогенных бактерий относят Bacillus popilliae, B. thuringiensis, B. lentimorbus, B. larvae, Clostridium brevifaciens.

Факультативные возбудители болезней представлены бактериями родов Рsеиdотопаs, Enterobacter. Они способны проникать в организм насекомых, вызвать септицемию, но не выделяют токсинов. Тем не менее, выделяют продукты обмена, накопление которых в организме насекомого в больших количествах может приводить к повреждениям кишечника. Бактерии активно проникают в эпителий кишечника и даже в полость тела, где они интенсивно размножаются и вызывают гибель хозяина.

К роду Clostridium относятся подвижные палочки (реже неподвижные величиной 1,5-20,0 мкм, с закругленными иногда с заостренными концами чисто расположены в парах или короткими цепочками. Образуют овальные или круглые эндоспоры, придающие клеткам веретенообразную форму. С возрастом могут изменять отношение к окрашиванию по Граму, но на ранних стадиях культивирования всегда грам-положительны. Большинство видов хемоорганотрофы, но некоторые могут расти хемоавтотрофно или хемолитотрофно; одни виды проявляют сахаролитическую, другие — протеолитческую. Наиболее характерные признаки — способность вызывать масляно-кислое брожение и анаэробный распад углеводов с образованием масляной кислоты и газов (С0₂ водород, иногда метан). Восстанавливают сульфиты до сульфидов. Обычно каталазоотрицательные. Большинство видов — строгие анаэробы; также имеются аэротолерантные виды или отдельные штаммы. Подвижны за счет перитрихиальных жгутиков, иногда встречаются неподвижные формы. Образуют овальные или сферические споры. Обитают в почве, на дне пресных и соленых водоемов, кишечнике человека и животных; некоторые виды патогенны.

Как энтомопатогенные известны виды C. brevifaciens, C. malacosomae (активны для шелкопряда), C. fermentales (для личинок комаров).

Весь цикл развития C. malacosomae происходит в кишечнике гусениц шелкопряда Мalacosoma pluviale, ни при каких условиях не происходит проникновения и размножения возбудителя в гемолимфе или других органах хозяина. В кишечнике создаются благоприятные для клостридий анаэробные условия. Причиной гибели считают потерю воды организмом из-за рвоты и поносов. Тела гусениц при этом укорачивается, что вызвано сокращением продольных мышц кишечника и всего тела, а также потерей воды. Жидкость, выделяемая при рвоте и экскременты зараженных особей служат активными средствами распространения болезни среди насекомых, составляющих популяцию и живущих в тесном контакте в паутинных гнездах шелкопряда. По-видимому бактерия вырабатывает токсин, который выделяется при автолизе спорангия. Культуры этих видов плохо растут на искусственных питательных средах (среды на основе растительных экстрактов и бульона Дифко) в анаэростатах и в этих условиях никогда не образуют спор. Однако введением насекомым вегетативных клеток можно вызать болезнь с характерным укорачиванием тела гусениц.

Род Bacillus насчитывает 48 видов, некоторые виды — строгие аэробы, другие — факультативные анаэробы.Клетки палочковидной формы (прямые палочки с закругленными или обрубленными концами до 10 мкм). Хемогетеротрофы, метаболизм строго дыхательный или дыхательный и бродильный одновременно (редко строго бродильный); большинство видов образуют каталазу. В процессе вегетативного роста обр споры. По форме спор и набуханию спорангия их распределяют на группы:

- бактерии, продуцирующе овальную эндоспору, которая не сопровождется набуханием спорангия (В. thuringiensis);

- образующиеся овальную эндоспору, которая вызывает набухание спорангия (В. laterosporus);

- бактерии, которые образуют круглую спору с набуханием спорангия (B. sphaericus).

Наиболее изученными энтомопатогенными бактериями являются В.thuringiensis, В. laterosporus, B. sphaericus, B. popilliae.

Также следует упомянуть B. stearothermophilus, патогенную для наcекомых и применяемую в качестве средства биологического воздействия в качестве средства биологического воздействия в первую очередь на гусениц чешуекрылых. Механизм энтомопатогенного действия связан со способностью образовывать белковые кристаллические структуры (гранулы) при спорообразовании, которые высвобождаются при прорастании спор и под действием пищеварительных ферментов гусениц разлагаются с образованием бактериальных токсинов.

B. sphaericus - первый инсектицидный штамм, потенциальный москитный ларвицид. Инсектицидные штаммы вместе со спорой продуцируют включения (кристаллы). У штаммов без наличия кристалла токсичность может локализоваться в других структурах спорового комплекса, но высокоинсектицидные штаммы обязательно продуцируют белковый кристалл. Была разработана схема идентификации В. sphaericus, базирующаяся на определении структуры жгутикового антигена. Описано до 50 серовариантов. Проведено фаготипирование и распределение штаммов на фаговары. Новые штаммы заслуживают внимания для применения против пустынной саранчи, популяций двукрылых насекомых-переносчиков возбудителей болезней человека.

B. popilliae, B. lentimorbus - вызывают "молочную болезнь" у японского жука. При микроскопировании спорангий В. popilliae напоминает след от ботинка, где кроме споры находятся включения. Бактерии не культивируются на искусственных средах, их размножение проводят только заражением личинок путем икьекций. Поэтому идентификация данных бактерий затруднена. В естественных условиях источником заражений личинок является почва. B. lentimorbus – без параспоральных включений.

B. laterosporus – - аэробные спорообразующие бактерии. Параспоральные включения в виде "каное". Обладает высокой токсичностью против комаров. Возможно скрининг штаммов B. laterosporus позволит выявить еще более высокоактивные агенты для биологического метода.

В. сеrеиs - (от лат. сеrа — воск, свеча) грам-положительные, подвижные палочки, жгутики - перитрихи. Споры 1-1,5 мкм, овальные, центральные или парацентральные. Факультативные анаэробы. Температурный оптимум роста 30°С, оптимум рН 7-9,5. На МПА образует «распластанные» колонии с неровными краями; на яичном агаре образует широкую зону преципитации белого цвета (эффект бактериальной лецитиназы), зона быстро растет и через несколько суток инкубации охватывает всю поверхность чашки. Колонии, выросшие на агаре, имеют характерный восковидный вид. На жидких средах бацилла образует белый хлопьевидный осадок, нежную пленку на поверхности и вызывает помутнение бульона. Следует отметить высокую протеолитическую активность микроорганизма — разжижает желатин в течение 1-4 сут (80% штаммов); все штаммы образуют лецитиназу, ацетилметилкарбинол, расщепляют до кислоты глюкозу и мальтозу, а часть штаммов — также и сахарозу, глицерин, лактозу, галактозу, инулин, дульцит и декстрин. Образуют каталазу. Для прорастания необходимы аминокислоты. Пептонизирует молоко, гидролизирует крахмал, использует цитраты . В. сеrеиs образуют токсины только in vivo, во время прорастания спор. В экспериментальных дозах может быть патогенной для морских свинок. Патогенна для широкого круга насекомых.

Впервые B. thuringiensis была выделена в 1915 г. Берлинером из больных гусениц мельничной огневки. Штаммы этой бактерии помимо образования спор, которые при попадании внутрь насекомого вызывают септицемию, синтезируют также ряд экзо- и эндотоксинов.

Первый идентифицированный у B. thuringiensis токсин – α-экзотоксин (фосфолипаза С), является продуктом растущих клеток; предполагают, что эффект данного токсина, летальный для насекомых, связан с распадом в тканях незаменимых фосфолипидов. Второй токсин – β-экзотоксин, состоящий из аденина, рибозы и фосфора. Молекула этого токсина представляет собой нуклеотид, сложно связанный через рибозу и глюкозу с аллослизиевой кислотой, а его токсическое воздействие состоит в прекращении синтеза насекомыми РНК. Третий токсин – γ-экзотоксин. Его структура и действие мало изучены; предполагают, что он относится к фосфолипидам. Четвертый токсин – кристаллический δ-эндоксин, образуется одновременно со спорой и выделяется в среду. Интактные кристаллы нетоксичны, но при попадании в пищеварительный тракт насекомых под воздействием щелочных протеаз разрушаются с образованием действующего токсина. Специфичность протеаз насекомых различных видов определяет разницу воздействия токсина. Не все насекомые обладают протеазами, способными разрушать данный токсин, чем и определяется его избирательность.

Основным действующим началом препаратов на основе B. thuringiensis является δ-эндоксин, который относятся к токсинам кишечного действия. Данный токсин взаимодействует с чувствительными к нему рецепторами эпителиальных клеток кишечника и формирует литические поры или ионные каналы. Проникая в клетку, токсины, оказывают разобщающее действие на процессы окислительного фосфорилирования и дыхания в митохондриях, обусловленное его протонофорными свойствами. Вакуолизация клеток, приводящая к их деструкции, вызвана нарушением транспорта ионов. Типичными последствиями воздействия δ-эндоксина являются паралич кишечника, прекращение питания, развитие общего паралича и гибель насекомого.

Следует отметить, что механизм действия экзотоксинсодержащих препаратов на насекомых иной, чем препаратов с кристаллическим эндотоксином. Характер интоксикации организма насекомого экзотоксином свидетельствует, что при его заглатывании целостность эпителия средней кишки не нарушается и токсин остается в организме длительное время. Та часть токсина, которая включилась в физиологические процессы, не выводится из организма, оказывая влияние в первую очередь на метаморфоз и последующие фазы развития насекомого. Экзотоксин способен также ингибировать питание насекомых, снижать их репродуктивную функцию.

Бактерии группы B. thuringiensis эффективны в отношении 400 видов насекомых, включая вредителей полей, леса, садов и виноградников; наибольший эффект от применения данных препаратов получают при борьбе с листогрызущими вредителями. Микробиологическая промышленность многих стран выпускает различные препараты на основе B. thuringiensis, способных образовывать споры, кристаллы и токсические вещества в процессе роста. Основная масса микробных инсектицидных препаратов (свыше 90 %) изготовлена на основе Bacillus thuringiensis, насчитывающая свыше 67 серотипов. Штаммы B. thuringiensis используют для борьбы с различными вредителями – гусеницами, жуками, комарами, мошкой.

Как уже упоминалось, факультативные возбудители болезней могут проникать в насекомых и вызывать септицемию, хотя они и не выделяют токсинов. Следует, однако, отметить, что факультативные возбудители выделяют продукты обмена, накопление которых в организме насекомого в больших количествах может в такой степени повредить кишечник, что это позволяет бактериям проникать в эпителий кишечника и даже в полость тела, и они; размножившись там, вызывают гибель хозяина. В эту группу включают представителей родов Pseudomonas, Enterobacter cloacae и Serratia marcescens.

Болезни насекомых, вызываемые бактериями рода Pseudomonas. При искусственном разведении или у взятых из природных условий насекомых иногда встречаются септицемии, характерные тем, что из мертвых гусениц на влажной фильтровальной бумаге или в воде выделяется отчетливо флуоресцирующая бактериальная масса с желтоватым или зеленоватым пигментом. В литературе много данных об обнаружении в насекомых бактерий рода Pseudomonas, однако в большинстве случаев не указываются пути их проникновения. Можно допустить два основных объяснения, каким образом бактерии этого рода становятся причиной септицемии: они занесены в организм насекомого энтомопатогенными нематодами или проникли в полость тела через стенки кишечника после его интоксикации выделяемым ими токсином.

Р. aеruginosa характеризуется образованием желто-зеленого, растворимого в воде флюорохрома, который постепенно слегка окрашивает питательную среду. Грамотрицательная бактерия образует палочки размером 0,5—0,6 х 1,5 мкм с бесформенными слизистыми оболочками. Образование слизи – характерная особенность, слизь придает вязкость бульонным культурам и колониям мукоидных штаммов. Палочки подвижные, хорошо окрашиваются, спор не образуют.На агаре вырастают большие, серые, слегка выпуклые колонии, более темные в центре, с просвечивающими неправильными краями. Культура бактерий имеет рыбный запах благодаря метиламину и аммиаку, которые образуются в пептоновых средах. Желто-зеленый пигмент, помимо желтого флюоресцина, содержит также и синеватый пиоцианин, извлекаемый хлороформом. Высоковирулентные штаммы отличает значительное образование пиоцианина, проявляющего свойства бактериоцина, дейтвующего на Гр+ и Гр- бактерии, а также имеющего умеренную фунгицидную активностиь. Возбудитель хорошо растет на большинстве обычных сред, использует многие сахара как источник углерода, быстро разжижает желатин, гемолизирует кровяные среды, образует каталазу, сильно редуцирует нитраты и нитриты и окисляет глютонат калия. Бактерию можно культивировать в больших количествах и на заводских средах с кукурузным экстрактом в качестве источника азота. Выживание бактерий при хранении непродолжительно, высушенные клетки погибают через 24 часа, но лиофилизированный материал сохраняет жизнеспособность в течение трех и более лет. В ферментационной жидкой среде при хранении на холоду бактерии без существенной потери вирулентности живут до 6 дней. В мертвых гусеницах инфекционность возбудителя сохраняется несколько недель.