Uchebnik
.pdfВопросы для самоконтроля студентов
1 Сравните возможности методов структурной идентификации природных карбоциклических молекул.
2Запишите основные химические свойства каротиноидов.
3Составьте схему извлечения каротиноидов из природных источников.
4В чем заключается комплексная химическая и физико-химическая идентификация структурных особенностей каротиноидов?
5Перечислите основные промышленно-важные стероидные карбоциклы
икаротиноиды.
6Сопоставьте взаимосвязь строения и реакционной способности стероидных молекул.
7Сравните основные химические свойства стероидных карбоциклов.
8Составьте схему обнаружения и выделения стероидных молекул.
9Опишите возможности структурного анализа стероидных молекул.
10Что такое фитостеролы, опишите их строение и химические свойства.
Примеры установления структур изопреноидов
3-О-β-D-глюкозид кампестерина является новым, не описанным в литературе соединением. Это белое кристаллическое вещество с температурой плавления 174-1760С, образует темно-зеленое окрашивание с реактивом Либермана-Бурхарда, бордовое с сульфатом церия (ТСХ) и красно-фиолетовое окрашивание с 1% ванилином в концентрированной серной кислоте, УФ
(MeOH) λmах 243 нм.
Три полосы поглощения в области 998-1037 см-1 и интенсивное поглощение в области 892 см-1, свидетельствуют о β-конфигурации гликозидной связи пиранозного цикла углеводного компонента.
Впродуктах кислотного гидролиза после нейтрализации и экстракции хлороформом идентифицирован кампестерол, в гидролизате методом хроматографии с достоверным образцом идентифицирована глюкоза.
В1Н-ЯМР-спектре аномерный протон глюкозы резонирует в области 5.05 м.д. в виде дублета с КССВ 7.6 Гц, что также указывает на β-конфигурацию сахара. Остальные протоны глюкозы прописываются в области 3.96-4.57 м.д.
Вспектре 13С-ЯМР обнаружено 34 сигнала углеродных атомов. Сигналы С-5 и С-6, связанных двойной связью резонируют в области 140.51 и 121.12 м.д.
Углеродные атомы глюкозы: 100.84 (С-1’), 73.50 (С-2’), 76.66 (С-3’), 70.20 (С- 4’), 77.09 (С-5’), 61.16 (С-6’) м.д., сигнал углеродного атома С-3 в области 76.78, другие сигналы в области от 11.64 до 56.2 принадлежат 25 углеродным атомам кампестеролового скелета.
Вмасс-спектре (метод положительных ионов) прописываются сигналы фрагментов с m/z 563 [М+1]+ и 401, соответствующие молекулярным формулам
С34Н58О6 и С28Н48О, последний указывает на отщепление глюкозидного фрагмента.
221
Таким образом, на основании физико-химических методов исследования для вещества предложено строение 3-О-β-D-глюкозид кампестерина:
|
|
|
IV |
|
|
|
|
II |
III |
|
|
|
I |
|
|
||
HOHO |
|
OH |
|
m/z 563 [M+1]+ |
|
|
|
|
O |
||
|
O |
|
|
||
HO |
|
|
|
||
|
|
|
|
||
|
I [M-C6H11O5]+ |
II [M-C6H12O6]+ |
|||
|
m/z 400 |
-H2O |
m/z 383 |
||
|
C H O |
|
C28H47 |
||
|
28 |
48 |
|
|
|
III |
-C5H9O |
IV -C7H11O |
-H+ |
||
m/z 382 |
|||||
m/z 315 |
|
m/z 289 |
|||
|
C28H46 |
||||
C H |
|
C21H37 |
|||
23 |
39 |
|
|
|
Кислотный гидролиз 3-О-β-D-глюкозида кампестерина проходит действием 2н НСl в течение 2 ч на кипящей водяной бане.
β-ситостерол (R-стигмаст-5-ен-3-ол) - С29Н50О, М+= 414, Тпл. 142-1440С.
1Н-ЯМР (CDCl3, , м.д): 0.66 (s, СН3-18), 0.78 (d, 6.5 Гц, СН3-27), 0.80 (d, 6.5 Гц, СН3-26), 0.84 (t, 7 Гц, СН3-29), 0.89 (d, 6.5 Гц, СН3-21), 0.98 (s, СН3-19), 4.5 (m, 3α-Н), 5.33 (m, 6-Н).
Стигмастерол (стигмастерин) - С29Н48О, М+= 412, Tпл.168-1700С.
1Н-ЯМР (CDCl3, , м.д): 0.67 (s, СН3-18), 0.80 (d, 6.5 Гц, СН3-27), 0.82 (t, 7.1 Гц, СН3-29), 0.85 (d, 7 Гц, СН3-26), 0.87 (d, 6.5 Гц, СН3-21), 0.99 (s, СН3-19), 4.57 (m, 3α-Н), 5.29-5.33 (t, 6.3 Гц, 22-Н, 23-Н), 5.37 (d, 4 Гц, 6-Н).
Кампестерол (24α-метил-5-холестен-3β-ол) - С28Н48О, М+=400, Tпл. 1561580С.
1Н-ЯМР (CDCl3, , м.д): 0.66 (s, СН3-18), 0.79 (d, 7 Гц, СН3-28), 0.81 (d, 6.5 Гц, СН3-27), 0.87 (d, 6.5 Гц, СН3-26), 0,90 (d, 6.6 Гц, СН3-21), 1.01 (s, СН3-19), 4.56 (m, 3α-Н), 5.35 (m, 6-Н).
Эргостерол (5,7,22-эргостатриен-3β-ол) С28Н44О, М+=396, Tпл. 160-1620С.
1Н-ЯМР (CDCl3, , м.д): 0.66 (s, СН3-18), 0.80 (d, 8.3 Гц, СН3-26), 0.83 (d, 6.3 Гц, СН3-27), 0.87 (d, 6.3 Гц, СН3-28), 0.91 (d, 6.6 Гц, СН3-21), 1.00 (s, СН3-19), 4.03 (t, 6.7 Гц, 3α-Н), 4.57 (m, 22-Н, 23-Н), 5.29 (t, 6.3 Гц, 7-Н), 5.35 (d, 4 Гц, 6-Н).
3-O-β D глюкопиранозид кампестерина - C34H58O6, М+=562, Tпл. 174-1760С.
ИК (КВr, , см-1): 3440, 2860-2930, 1460, 1370, 1037, 1010, 998, 892, 730. m/z (70 eV): 563[М+1]+; 401, 316, 315, 290, 289, 274, 256, 214, 179, 163.
1Н-ЯМР (C5D5N, , м.д): 0.65 (s, СН3-18), 0.84 (d, 7 Гц, СН3-27), 0.86 (d, 6.9 Гц, СН3-26), 0.89 (d, 7.3 Гц, СН3-28), 0.92 (d, 6.5 Гц, СН3-21), 0.98 (s, СН3-19), 2.46 (t, 11.5 Гц, 4β-Н), 2.73 (dd, 13.1; 2.3 Гц, 4α-Н), 4.05 (m, Н-3), 3.93 (m, Н-2’),
222
3.99 (m, Н-5’), 4.28 (m, Н-3’, Н-4’), 4.41 (dd, 11.7; 5.2 Гц, Н-6’α), 4.57 (dd, 11.7; 1.7 Гц, Н-6’β),5.34 (brs, Н-6).
13С-ЯМР (DMSO, , м.д): 36.21 (1-С), 20.59 (2-С), 76.79 (3-С), 33.40 (4-С),
140.51(5-С), 121.12 (6-С), 36.83 (7-С), 55.49 (8-С), 56.19 (9-С), 41.83 (10-С),
22.67(11-С), 31.37 (12-С), 38.37 (13-С), 45.22 (14-С), 29.26 (15-С), 28.83 (16-С),
49.66(17-С), 18.60 (18-С), 18.95 (19-С), 35.44 (19-С), 11.76 (21-С), 25.61 (22-С),
27.73(23-С), 31.45 (24-С), 28.81 (25-С), 19.65 (26-С), 19.05 (27-С), 11.63 (28-С). Для глюкозы: 100.40 (1’-С), 73.50 (2’-С), 76.66 (3’-С), 70.2 (4’-С), 77.09 (5’-С),
61.16(6’-C).
Для ситостерина и кампестерина из хвойной древесины изучена реакция Байера-Виллигера, осуществлен синтез индоло-, пиразоло- и изаксозолостеринов, реакции формилирования, эпоксилирования и ацилирования изомерных 3-кетостеринов.
Большое распространение имеет циклоартенол, отличающийся от ситостерина только одним атомом углерода, хотя превращение в растении циклоартенола в ситостерин – это многостадийный процесс:
Врастениях рода Astragalus содержатся различные тритерпеноиды (циклоартановые, ланостановые, олеановые) генетически связанные между собой и/или с предшественником - сквален-2,3-оксидом. Особенность биосинтеза фитостероидов заключается в возникновении дополнительного 9,19трехчленного цикла на стадии циклизации сквален-2,3-оксида и последующем раскрытии этого цикла, что и определяет биогенетическую взаимосвязь циклоартановых и ланостановых тритерпеноидов.
До настоящего времени во многих научных центрах мира ведутся интенсивные исследования растений Astragalus на содержание циклоартановых метилстероидов и гликозидов, а метилстероиды, указанные ниже, найдены только в свободном виде:
223
Углеводные фрагменты чаще представлены D-глюкозой, D-ксилозой, L- арабинозой и L-рамнозой в положениях 3 и/или 6, 16, 25.
Описаны и ацилированные гликозиды и генины, причем ацетильные группы существенно влияют на химические сдвиги α и β- углеродных атомов.
Структура хедеракозида С, структурного компонента одноименных гликозидов растений Hedera доказана комплексом данных 13С-ЯМР в СD3ОD и масс-спектра с интенсивным сигналом при m/z 749, соответствующем α- хедериновому скелету после отщепления трех углеводных фрагментов от С28:
100 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
749 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
50 |
|
|
183 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
|
|
143 |
205 247 |
325 |
367 |
423 |
471 |
|
603 |
703 |
791 |
893 941 |
1012 1073 |
1143 |
1219 |
|
|||||||||
|
|
499 |
631 |
|
|||||||||||||||||||||
0 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
M/Z 100 |
200 |
300 |
400 |
500 |
600 |
700 |
800 |
900 |
1000 |
1100 |
1200 |
|
13С-ЯМР (СD3ОD, , м.д.): 39.83 (1-С), 26.55 (2-С), 82.55 (3-С), 44.08 (4-С),
48.43(5-С), 19.00 (6-С), 33.29 (7-С), 40.87 (8-С), 48.27 (9-С), 37.82 (10-С), 24.69 (11-С), 123.90 (12-С), 145.03 (13-С), 43.19 (14-С), 29.09 (15-С), 24.41 (16-С),
47.43(17-С), 42.69 (18-С), 47.43 (19-С), 31.60 (20-С), 35.05 (21-С), 33.29 (22-С),
64.36(23-С), 13.80 (24-С), 16.63 (25-С), 17.90 (26-С), 26.43 (27-С), 178.28 (28-С)
224
, 33.53 (29-С), 24.23 (30-С). Для 30-α-L-Ara: 104.05 (1’-С), 75.41 (2’-С), 73.84 (3’- С), 68.84 (4’-С), 64.97 (5’-С). Для 30-α-L-Rha: 101.94 (1”-С), 72.21 (2”-С), 72.53 (3”-С), 74.04 (4”-С), 70.45 (5”-С), 18.10 (6”-C). Для 28-β-D-Glc 1,6: 95.95 (1’”-С), 74.21 (2’”-С), 78.45 (3’”-С), 71.33 (4’”-С), 76.91 (5’”-С), 69.77 (6’”-C). Для 28-β- D-Glc 1,4: 104.48 (1””-С), 75.14 (2””-С), 76.93 (3””-С), 80.02 (4””-С), 78.18 (5””- С), 62.14 (6””-C). Для 28-α-L-Rha: 101.78 (1”’”-С), 72.08 (2”’”-С), 72.39 (3”’”-С), 73.94 (4”’”-С), 70.30 (5”’”-С), 18.01 (6”’”-C).
Из надземной части татарника колючего экстракцией хлороформом и последующего хроматографирования на колонке силикагеля с использованием элюата этилацетат-гексан выделены тараксастерол и его ацетат:
|
|
|
|
30 |
||
|
|
29 |
19 |
21 |
||
|
|
|
|
|||
|
11 |
26 |
17 |
|
||
|
1 |
|
|
15 |
28 |
|
2 |
9 |
|
||||
|
27 |
|
||||
RO |
5 |
7 |
|
|||
|
|
|||||
R= H (1a); COCH3 (1b) |
||||||
|
|
Химические сдвиги 1Н (500 МГц) и 13С (125 и 75 МГц) соединений (δ, м.д.)
Атом |
|
|
1а |
|
|
1b |
|
ХС13С, м.д. |
ХС13С, м.д. |
ХС13С, |
ХС1H, м.д. |
ХС13С, |
ХС13С, м.д. |
|
СDCl3 |
СDCl3 |
м.д. |
(J/Гц) |
м.д. |
СDCl3 |
|
|
(75 МГц) |
С5D5N |
С5D5N |
СDCl3 |
(75 МГц) |
1 |
38.4 |
38.11 |
38.55 |
1.64, 0.92 |
38.7 |
38.71 |
2 |
23.6 |
23.67 |
24.07 |
1.75, 1.67 |
27.3 |
27.53 |
3 |
80.8 |
80.94 |
80.78 |
4.70 dd (11.8; 4.9) |
78.9 |
79.12 |
4 |
37.7 |
37.77 |
38.01 |
- |
38.7 |
38.98 |
5 |
55.4 |
55.42 |
55.62 |
0.78 |
55.3 |
55.49 |
6 |
18.1 |
18.16 |
18.42 |
1.46, 1.35 |
18.2 |
18.41 |
7 |
33.9 |
33.97 |
34.26 |
1.35, 1.35 |
34.0 |
34.20 |
8 |
40.8 |
40.89 |
41.11 |
- |
40.8 |
41.02 |
9 |
50.3 |
50.37 |
50.54 |
1.33 |
504 |
50.61 |
10 |
37.0 |
37.02 |
37.21 |
- |
37.0 |
37.26 |
11 |
21.4 |
21.44 |
21.62 |
1.48, 1.21 |
21.3 |
21.56 |
12 |
25.5 |
26.12 |
26.42 |
1.65, 1.08 |
258.5 |
25.60 |
13 |
38.8 |
39.13 |
39.40 |
1.56 td (12.2; 3.3) |
38.7 |
38.42 |
14 |
41.9 |
42.15 |
42.24 |
- |
41.9 |
42.15 |
15 |
26.6 |
16.62 |
26.93 |
1.65, 0.94 |
26.6 |
26.78 |
16 |
39.1 |
38.84 |
38.55 |
1.26, 1.17 |
39.1 |
39.26 |
17 |
34.4 |
34.50 |
34.69 |
- |
34.4 |
34.50 |
18 |
48.6 |
48.61 |
48.81 |
0.99 |
48.5 |
48.82 |
19 |
38.6 |
39.36d |
39.62 |
2.15 q (6.8) |
38.2 |
39.49 |
20 |
154.4 |
154.62 |
154.82 |
- |
154.4 |
154.71 |
21 |
25.4 |
25.59 |
25.93 |
2.48, 2.23 |
25.4 |
25.60 |
22 |
39.3 |
38.27d |
39.09 |
1.41, 1.41 |
39.2 |
38.43 |
23 |
27.8 |
27.92 |
28.04 |
0.91 |
27.9 |
28.08 |
24 |
16.4 |
16.48 |
16.77 |
0.91 |
15.2 |
16.01 |
25 |
15.4 |
15.86 |
16.42 |
0.86 |
15.8 |
15.46 |
225
26 |
16.2 |
16.32 |
16.02 |
0.99 |
16.1 |
16.38 |
27 |
14.6 |
14.70 |
14.89 |
0.96 |
14.6 |
14.86 |
28 |
26.1 |
19.41 |
19.78 |
0.94 |
26.1 |
19.59 |
29 |
19.4 |
25.47 |
25.60 |
1.08 |
19.3 |
25.74 |
30 |
107.0 |
107.11 |
107.56 |
4.79, 4.74 |
107.0 |
107.23 |
ОАс |
21.1; |
21.30; |
21.12; |
2.04 |
|
|
|
170.8 |
170.98 |
170.66 |
|
|
|
Установление структур таких сложных молекул стало возможным с помощью комплекса физико-химических методов. Так, первый ланостановый гликозид из Astragalus был идентифицирован с помощью данных 1H-, 13C-ЯМР, DEPТ и 2М ЯМР 1Н-1Н COSY, HSQC, HMBC, как 3-О-β-D-ксилопирано- зиднозид-23ξ,24ξ-ланост-9(11)-ен-3β, 7β,16β,19,23,24,25-гептаола (орбикозид),
который выделен с известным ланостановым тритерпеноидом - орбигенином:
OH
|
|
HO |
OH |
|
|
OH |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
HO |
|
OH |
|
|
||
орбикозид |
|
орбигенин |
OH
Химические сдвиги углеродных и водородных атомов молекулы орбикозида, данные экспериментов DEPT, показатели 2М ЯМР-спектров: 1Н-1Н COSY, HSQC, HMBC и химические сдвиги углеродных атомов орбигенина (δ, м.д., J/Гц, С5D5N, О-ТМС)
Атом С |
|
|
орбикозид |
|
орбигенин |
|
δС |
DEPT |
δН (J) |
НМВС (атом С) |
δС |
1 |
30.87 |
СН2 |
α 1.35 |
|
30.99 |
|
|
|
β 2.62 dt (13.6; 3.4) |
|
|
2 |
27.22 |
СН2 |
2.13; 2.40 |
4, 29, 30, X1 |
28.66 |
3 |
88.87 |
СН |
3.50 dd (11.8; 4) |
78.20 |
|
4 |
39.84 |
С |
- |
|
39.71 |
5 |
50.44 |
СН |
1.36 |
|
50.34 |
6 |
31.85 |
СН2 |
1.98; 2.25 |
|
32.22 |
7 |
71.79 |
СН |
4.09 td (10; 4) |
|
71.84 |
8 |
50.87 |
СН |
2.87 dm |
7, 9, 11, 13 |
50.87 |
9 |
141.86 |
С |
- |
|
142.01 |
10 |
44.93 |
С |
- |
|
45.30 |
11 |
121.58 |
СН |
5.92 dt (6.2; 2) |
8, 10, 12, 13 |
121.57 |
12 |
37.54 |
СН2 |
2.16; 2.26 |
9, 11, 13, 14, 18 |
37.54 |
13 |
45.37 |
С |
- |
|
45.37 |
14 |
45.37 |
С |
- |
|
45.38 |
15 |
49.52 |
СН2 |
2.48 dd (14; 5) |
8, 13, 14, 16, 28 |
49.56 |
|
|
|
3.00 dd (14; 8) |
13, 14, 17, 28 |
|
16 |
72.63 |
СН |
4.83 td (8; 5) |
13, 14 |
72.63 |
17 |
55.50 |
СН |
1.93 dd (11.3; 7.3) |
|
55.50 |
18 |
15.69 |
СН3 |
1.43 s |
|
15.72 |
19 |
60.54 |
СН2 |
4.09; 4.22 d (10) |
|
60.54 |
226
20 |
27.42 |
СН |
2.62 |
|
27.42 |
21 |
20.47 |
СН3 |
1.23 d (6.4) |
|
20.47 |
22 |
43.03 |
СН2 |
2.20; 2.20 |
|
43.03 |
23 |
73.20 |
СН |
4.32 td (8.4; 3) |
|
73.21 |
24 |
79.14 |
СН |
3.78 d (8.4) |
|
79.13 |
25 |
74.25 |
С |
- |
|
74.24 |
26 |
24.70 |
СН3 |
1.73 s |
|
24.69 |
27 |
28.89 |
СН3 |
1.69 s |
|
28.90 |
28 |
19.28 |
СН3 |
1.15 s |
|
19.28 |
29 |
28.57 |
СН3 |
1.37 s |
|
29.18 |
30 |
18.10 |
СН3 |
1.10 s |
|
17.70 |
|
|
|
Остаток β-D-Хуl |
|
|
1 |
107.73 |
СН |
4.88 d (7.6) |
3, Х4 |
|
2 |
75.48 |
СН |
4.02 dd (8.6; 7.8) |
Х3 |
|
3 |
78.60 |
СН |
4.18 t (8.6) |
Х2, Х4 |
|
4 |
71.23 |
СН |
4.23 m |
|
|
5 |
67.14 |
СН2 |
4.41 dd (11.3; 5) |
Х1, Х3, Х4 |
|
|
|
|
3.81 dd (11.3; 9.9) |
Х1, Х3, Х4 |
|
Структуры многих стероидов (генинов, гликозидов), особенно место гидроксилирования, их пространственная ориентация были установлены с участием культур микроорганизмов, которые специфично окисляют, восстанавливают, гидролизуют или гликозидируют молекулы, в зависимости от вида микроорганизмов и набора ферментов в них.
Сердечные гликозиды содержатся в семенах, листьях, стеблях, корнях и коре растений семейств: куртовые, норичковые, лилейные, лютиковые, в шелковицах, наперстянках, морском луке и др. Их агликоны и генины могут быть двух типов – карденолиды и буфадиенолиды, причем доминирует во всех растениях первый тип. Так, дигитоксигенин, строфантидин, ланатозиды, цимарин и др. являются карденолидами, С23-стероидами с пятичленным лактонным кольцом.
Буфадиенолиды – С24-стероиды с дважды ненасыщенным лактонным кольцом. Дигитоксигенин и дигитогенин – типичные структуры группы стероидов наперстянки представляют группу сердечных гликозидов и сапогенинов, соответственно. Углеродный скелет дигитоксигенина на один углеродный атом отличается от скелета желчных кислот, а скелет молекулы дигитогенина подобен холестерину:
O
O
|
|
OH |
дигитоксигенин – агликон |
дигитогенин |
сцилларен А |
«сердечных гликозидов» |
(С27-стероид) |
(буфадиенолид) |
(карденолид) |
|
|
227
Редкие структуры получены из растения Adonis vernalis, агликон и его рамнозид, по активности подобные цимарину и конваллотоксину – адонитоксин и адонитоксигенин с тремя ОН и альдегидной группами – 19альдогитоксигенины.
Из коры и корней дерева уабайо и семян строфанта выделен высокотоксичный гликозид уабаин, рамнозид уабагенина, редкого гексаоксипроизводного. Еще более редкими являются гликозиды и генины с кетогруппой, например: сармуто-, каудо- и сарверозиногенины:
уабагенин сармутогенин
каудогенин |
зиногенин |
сарверогенин |
Растительные буфадиенолиды представлены сциллареном А (из морского лука); геллебрином (морозник черный), сциллиглаукозидом, бовозидом А, боворубозидом, являющихся 19-альдегидами, и др.:
|
сцилларен А |
геллабрин |
|
|
|
|
O |
|
|
|
O |
|
O |
H |
|
|
|
|
|
Glu |
|
OH |
|
O |
|
|
|
|
сциллиглаукозид |
бовозид А |
228
Сырье, содержащее гликозиды, содержит и ферменты, способные расщеплять С-О-С связи между сахарами, однако не описано ферментов, способных расщеплять связи между указанными выше молекулами редких сахаров или их связь с генинами. Поэтому, сухое, измельченное сырье обезжиривают обработкой петролейным эфиром, а затем настаивают с водой
при комнатной температуре или при охлаждении ( 00) для отделения гидролитических ферментов и полисахаров. Водное извлечение отделяют, сырье заливают толуолом и оставляют на несколько суток при 25-370С для ферментативного гидролиза, а затем исчерпывающе экстрагируют смесями вода:спирт, увеличивая содержание спирта до тех пор, пока сырье не потеряет горький вкус. Экстракты концентрируют в вакууме (500С), жиры удаляют обработкой петролейным эфиром, дубильные вещества и другие полифенолы осаждают свежеприготовленным гидроксидом или ацетатом свинца, фильтруют или центрифугируют. Прозрачный раствор доводят до рН=6, концентрируют в вакууме и фракционируют экстракцией эфиром, хлороформом и смесью последнего со спиртом 2:1 и 3:2.
Для выделения гликозидов, оставшуюся водную фазу насыщают натрия сульфатом, экстрагируют смесью хлороформа со спиртом и хроматографируют на нейтральном оксиде алюминия (менее полярные фракции) или подвергают ацилированию с последующим гидролизом раствором калия бикарбоната.
Качественное определение сердечных гликозидов:
Реакция Келлер-Килиани. Добавляют 1-2 капли уксусной кислоты, 1-2
капли сульфата железа окисного, встряхивают, после 3-5 минут на границе раздела появляется красное окрашивание (2-дезоксигексозы), синее
(моногликозиды).
Реакция Легаля. Добавляют 1 мл 5% раствора натрия гидроксида и 1-2 мл раствора натрия нитропруссида в пиридине, на границе растворов
появляется постепенно исчезающее красное окрашивание ( α,β-пятичленное лактонное кольцо; карденолиды).
Реакция Раймонда. Добавляют 2-3 мл раствора м-динитробензола или 3,5-динитробензойной кислоты в горячем метанольном растворе щелочи, появляется фиолетовое, переходящее в синее окрашивание (карденолиды с С21
метиленовой группой).
Высокоспецифичных реакций для буфадиенолидов не описано, но их отличает полоса поглощения при 300 нм (ε 3.7) в УФ-спектре.
Большинство сердечных гликозидов и агликонов дают характерное окрашивание в концентрированной серной кислоте, при нагревании с трихлоруксусной кислотой и с раствором сурьмы хлорида (III).
Сердечные гликозиды с альдегидной группой разделяют реактивом Жирара.
229
Химические свойства сердечных гликозидов определяются углеродным скелетом (конформации) и функциональными группами. Соответственно, все известные специфические реакции используются для установления структуры молекул.
Как все гликозиды, сердечные подвергаются стадийному и полному гидролизу для установления их структуры и активности. Так, строфантидин – действующее начало строфантозида, получают по реакции гидролиза по схеме:
Причем отмечено, что углеводные фрагменты сердечных гликозидов в разном сочетании представлены 20 альдозами, в т.ч.:
Отмечено, что строфантидин плавится при разных температурах (136138; 177-178; 220-2300С) в зависимости от растворителя, использованного для кристаллизации, величины кристаллов и метода определения температуры плавления.
230